小熊猫槽盘吸虫感染病理观察

本研究对北京动物园死亡小熊猫进行剖检、小肠内容物及肺内寄生虫检查及组织病理学观察.结果显示:小肠内容物及肺内检测到大量虫体,其雄茎囊镜检呈弧形横卧于虫体前半部,生殖孔开口于虫体亚中部,阴茎伸出孔外,睾丸具有大量分瓣,形如香肠状、豆状或不规则的长卵圆形,依形态判定为小熊猫槽盘吸虫;病理组织学检查结果显示小熊猫肺泡中寄生大...     

秦岭大熊猫槽盘吸虫的鉴定与遗传进化分析

本研究旨在对采自大熊猫秦岭亚种(ailuropoda melanoleuca qinlingensis)小肠内的槽盘吸虫进行种类鉴定及遗传进化分析。通过形态学和分子生物学方法,对虫体样本分别进行染色显微镜观察和核糖体DNA内转录间隔区Ⅱ(ITS2)部分序列的PCR扩增和序列分析。经不同染色方法比较后,发现孔雀绿染色法处理后的虫体外部形态以及内部结构清晰,形态上符合印度槽盘吸虫(Ogmocotyle indica)的典型特征;序列及遗传进化分析表明,10个样本ITS2序列完全一致,其系统发生树显示10个样本与O.indica位于同一分枝。研究结果表明,分离的虫株从形态学和进化分析上均与印度槽盘吸虫具有高度一致性,提示该槽盘吸虫为印度槽盘吸虫。     

山羊槽盘吸虫的研究近况

山羊的槽盘吸虫（Ogmocotylesikae和Ogmocotyleindica）系背孔科（Notocotylidae）列叶属（Ogmocotyle又名槽盘属）。本属共四种虫：（１）１９３３年由Skrjabin和Schulz根据采自前苏联西伯利亚狍体内的新吸虫创立的OgmocotylePvgargi新属新种；（２）同年Yamaguti在日本鹿体内发现一新种，定名为Cymbiformasikae（同种异名Ogmocotylesikae）；（３）Bhaleao１９４２年在印度的牛、绵羊、山羊体内发现一新吸虫，命名为Cymbiformaindica（同种异名Ogmocotyleindica）；（４）１９５４年Price在美国的小猫熊体内发现一新吸虫，定名为Og…     

山羊槽盘吸虫各发育期形态学观察及中间宿主的研究

槽盘吸虫（Ogmocotyle 又名列叶吸虫）系背孔科（Notocotylidae）列叶属（Ogmocotyle 又名槽盘属）,因虫体腹面从头到尾中间凹陷,两边翘起,形似槽状,从而得名槽盘吸虫.Ogmocotyle属系1933年1月由Skrjabin 和SchuLz根据采自前苏联西伯利亚鹿包（Capreolus pygargi betfordi）体内的新种吸虫Ogmocotyle pygargi 创立的新属、新种;1933年5月 Yamaguti在日本鹿（Sikae nippon）体内发现了另一种新吸虫,定名为Cymbiforma Sikae 新属、新种;1942年Bhaleao在印度的黄牛、绵羊、山羊小肠内发现一新种吸虫,命名为Cymbiforma indica;1954年Price在美国小猫熊（Ailurus fulgens）体内发现了一种新吸虫,定名为Ogmocotyle ailuri.     

分子分类结合形态学观察鉴定重庆地区片形吸虫种类

目的明确重庆地区片形吸虫的种类,并为重庆地区片形吸虫的分类研究提供科学的参考依据。方法在对重庆地区黄牛、水牛肝脏上寄生的片形吸虫形态结构进行观察后,根据片形吸虫第一内转录间隔区(ITS-1)和第二内转录间隔区(ITS-2)基因设计特异性引物,运用多聚酶链式反应(PCR)技术,以法国肝片吸虫gDNA为对照,对所采样品gDNA用大片吸虫和肝片吸虫的ITS-1和ITS-2特异性引物进行扩增。结果形态学鉴定均为“不规则”片形吸虫,电泳结果显示均分别扩增出特异性ITS-1和ITS-2条带。结论综合形态学和PCR鉴定结果,初步认为重庆地区存在着大片吸虫和肝片吸虫的“中间型”。     

片形吸虫第一内转录间隔区DNA多态性的研究

以不同地区的片形吸虫虫株为研究对象，经PCR扩增出了ITS-1部分基因片段，采用单链构象多态性(SSCP)方法，并结合序列分析研究了不同地区片形吸虫ITS-1 DNA的多态性。不同地区的样品经SSCP分析，显示3种带型，第1种为大片形吸虫的带型，第2种为肝片形吸虫的带型，第3种为2种带形的混合带型。广西区样品和大部分贵州省样品属于大片形吸虫带型；四川省、黑龙江省和部分贵州省样品为混合带型；南京市和甘肃省样品为肝片形吸虫带型或混合带型。测序结果表明，根据ITS-1基因的序列变异位点可区分2种片形吸虫；表现为混合带型的样品在变异位点具有多态性。本研究结果显示，ITS-1片段可作为遗传标记用以区分大片形吸虫和肝片形吸虫，同时也证实，在我国除了这2种片形吸虫外，还可能存在着“中间型”的片形吸虫。     

广西南宁市水牛肝脏内前后盘吸虫的鉴定

为探明广西南宁地区水牛体内前后盘吸虫的种类,通过对其肝脏来源虫体进行鉴定,确定水牛感染的具体种属。本研究对南宁市某屠宰场水牛肝脏进行剖检、病理观察,并采集肝脏内寄生的前后盘吸虫进行虫卵孵育,对孵育所得的虫卵及虫体进行形态观察,对成虫虫体进行HE及苏木素染色,观察其内部的结构,并采用分子生物学方法对成虫进行鉴定。结果显示,虫体感染的肝脏表面有出血点,且呈现淤血、化脓灶、肝脏肿大、质地偏软等肉眼可见病变。虫卵呈椭圆形、淡灰色、有卵盖且内含圆形胚细胞,卵黄细胞不充满整个虫卵。对成虫染色观察可见虫体由体壁及内部生殖、消化等系统构成。体壁由皮层和肌层组成,虫体可见生殖系统、消化管和一些肌束与纤维组织,其中生殖系统包括卵巢、子宫和睾丸等生殖器官,消化管分布于整个体腔。虫体核糖体基因ITS-2扩增产物为441 bp,分析显示与GenBank中Explanatum explanatum（AB743577.1）相似性达99.3%。遗传进化分析显示此虫体与Explanatum explanatum具有很近的亲缘关系,同属一个分支。综合剖检病理变化,虫卵特性,虫体形态特性及分子生物学结果,确定该虫体为前后盘科的Explanatum explanatum。本研究结果为前后盘科吸虫分类鉴定提供一定的理论基础,并进一步丰富该科的虫体种类,此外初步了解广西南宁地区水牛前后盘吸虫病的流行情况,并为准确防治吸虫感染提供一定的理论依据。     

异形同刺线虫形态学鉴定及基于核糖体ITS序列分子进化分析研究

对采自黑龙江省某鹅场莱茵鹅盲肠内的线虫进行形态学鉴定,然后采取PCR方法扩增虫体核糖体ITS序列,进行序列分析并以ITS序列为标记基因构建系统发生树,分析该线虫与其他虫体的进化关系。结果表明,所分离的虫体为异形同刺线虫(Ganguleterakis dispar),该线虫ITS序列全长为957 bp,其中ITS-1,5.8S和ITS-2大小分别为424 bp,157 bp和376 bp。应用BI,MP,NJ 3种方法构建系统发生树结果相同,在尖尾目线虫的分支中,本研究的5条异形同刺线虫聚集在一起,与同科的鸡异刺线虫亲缘关系较海绵异刺线虫和Heterakis dahomensis接近。该结果为禽类异形同刺线虫病的分子鉴别诊断方法提供了参考。     

片形吸虫Cold-SSCP鉴别方法的建立

以采自我国不同地区的片形吸虫虫体为研究对象，PCR扩增出核糖体DNA (rDNA)的第一内转录间隔区(ITS-1)序列，然后采用非同位素的单链构象多态性(Cold-SSCP)方法分析PCR产物，对不同地区片形吸虫进行分子鉴定。所有样品经Cold-SSCP分析显示2种带型。样品测序及序列分析结果表明，第1种为肝片形吸虫带型，另1种为大片形吸虫带型。本研究建立了区分大片形吸虫和肝片形吸虫的Cold SSCP方法，可用于这2种吸虫的分子流行病学调查，从而为片形吸虫分子生物学的进一步研究奠定了基础。     

山羊腔阔盘吸虫的形态学观察和分子鉴定

为了从形态学和分子水平对山羊腔阔盘吸虫(Eurytrema coelomaticum)的种类鉴定提供依据,对采集自广东佛山发病山羊胰脏的阔盘吸虫在形态学观察的基础上,抽提虫体基因组DNA,通过PCR方法对虫体核糖体18SrRNA基因和线粒体cox1基因进行扩增,将产物与pMD18-T载体连接,转化到大肠埃希菌DH5α感受态细胞进行克隆、测序和序列分析。结果获得虫体18SrRNA基因的大小为1 922bp,线粒体cox 1基因大小为444bp。序列分析显示,获得的18SrRNA基因与GenBank收录的腔阔盘吸虫(E.coelomaticum,登录号为DQ401035)同源性高达99%;线粒体cox1基因与GenBank收录的胰阔盘吸虫(E.pancreaticum,登录号为KC535544)的同源性仅为90%。研究结果从分子水平证明采集自广东佛山山羊体的阔盘吸虫为腔阔盘吸虫(E.coelomaticum),对山羊阔盘吸虫病的防控有指导意义。     

云南牛羊同盘类吸虫的分类研究

对云南省各地州市的牛羊和部分马，亚洲象（Ｅｌｅｐｈａｓｍａｘｉｍｕｓ）猕猴（Ｍａｃａｃａｍｕｌａｔｔａ）等５种动物所寄生的同盘类吸虫（Ａｍｈｉｓｔａｍａｔｏａｘｓｔｒｅｍａｔｏｄｅｓ）进行分类鉴定，共有５６种，隶于５科，１１属，牛羊有３科１１属５１种同秀吸虫，马、亚洲象，猕猴有３科４属５种同盘吸虫，其中异叶巨盘吸虫（Ｇｉｇａｎｔｏｃｏｔｙｌｅａｎｉｓｏｃｏｔｙｌｅ）为国内新记录，直肠锡叶吸虫（Ｃｅ     

肝片吸虫蚴虫的形态学及分子学鉴定

为了找到青海地区肝片吸虫(Fasciola hepatica)的主要中间宿主,并对椎实螺(Lymnaeidae snails)体内的蚴虫进行虫种鉴定。对青海部分地区的椎实螺进行压片镜检,结果发现椭圆萝卜螺(Radix swinhoei)内无肝片吸虫蚴虫感染。狭萝卜螺(Radix lagotis)体内发现雷蚴,雷蚴为肝片吸虫的蚴虫,但是感染率较低为10%。青海萝卜螺(Radix cucnnorica)体内发现了雷蚴和尾蚴,并在养殖青海萝卜螺的水中青菜叶子上收集到囊蚴,经初步鉴定均为肝片吸虫的蚴虫,感染率较高为41.89%。主要中间宿主螺为青海萝卜螺。提取蚴虫体内DNA,通过PCR扩增18S rRNA片段并测序。将测序用DNAMAN软件进行比对后发现,与Gen Bank中发布的大片吸虫(Fasciola gigantica)和肝片吸虫的18S rRNA的序列进行比对其相似度分别为99.12%和92.03%。可以进一步确定所收集的蚴虫为肝片吸虫的蚴虫。     

枝双腔吸虫的形态学鉴定及分子进化研究

双腔吸虫病为一种人兽共患性寄生虫疾病,据报道有3种双腔吸虫可以感染羊。为了解齐齐哈尔地区绵羊感染双腔吸虫的种类,本研究对齐齐哈尔地区绵羊胆管分离的吸虫根据虫体形态学初步鉴定为枝双腔吸虫;PCR扩增吸虫的r DNA ITS序列,测序后经NCBI数据库比对分析,结果显示本研究分离的吸虫与枝双腔吸虫同源性达到99.8%;基于ITS-2序列构建系统进化树,分析结果显示本研究分离的吸虫与不同宿主来源的枝双腔吸虫聚集在同一个分支,因此鉴定本研究分离的吸虫为枝双腔吸虫。本研究对齐齐哈尔地区绵羊感染双腔吸虫种类有了初步了解,并为双腔吸虫的流行病学调查和分子鉴别诊断提供科学的参考依据。     

兔体双腔吸虫调查和形态学研究

经对宁夏4个地区1085只家兔和35只野兔的调查,发现有3种双腔属（Dicrocoelium）吸虫:矛形双腔吸虫（D.lanceatum）、东方双腔吸虫（D.orientalis）和中华双腔吸虫（D.chinensis）。其中后2种为宿主新纪录。它们在家兔中的感染率依次为4.2％、1.8％、0.4％,在野兔中的感染率依次为14.3％、5.7％、5.7％。中华双腔吸虫呈纺锤形,体长5.702～6.934mm,体宽1.091～1.549mm,长宽比4.9:1,睾丸并列,阴茎囊椭圆形并达腹吸盘前缘,卵黄腺起自于睾丸之后、卵巢之前水平处;其余2虫种的形态与记载的基本一致。     

青海省藏羊片形吸虫观察及鉴定

为了明确青海省藏羊体内一种片形属吸虫的种类,并为青海省藏羊体内片形吸虫的分类研究提供科学的参考依据,采用形态学方法对青海省部分地区藏羊片形属吸虫进行了形态学观察及鉴定,对肩部特征不明显虫体进行了扫描电镜观察以及对体长、体宽测量并计算体长与体宽的比值。结果发现肩部特征不明显的虫体的体长范围在1.80~3.40 cm,体宽范围在0.70~1.20 cm,比值范围为2.38~3。扫描电镜观察虫体结构符合肝片吸虫的形态学特点。综合结果分析,初步鉴定青海省藏羊体内的片形属吸虫为肝片吸虫(Fasciola hepatica)。     

猫杯状病毒的分子鉴定及系统进化分析

猫杯状病毒可引起猫传染性鼻结膜炎,该病是较为常见的传染病之一。猫杯状病毒具有较高的变异性,因此开展该病毒的流行性调查和遗传进化分析对于该病毒的防控具有重要的意义。本研究主要针对分离的一株猫杯状病毒通过RNA提取,cDNA的合成,RT-PCR和目的基因的克隆等方法对毒株进行了分子鉴定,并利用MEGA6.0软件构建遗传进化树,分析该毒株的系统进化关系。结果表明该毒株与目前国内流行的其他毒株相似性较低,初步分析可能为新的变异毒株。本研究为猫杯状病毒的流行病学调查提供了一定的理论基础。     

RAPD与形态学对片形吸虫种类鉴别的比较研究

通过形态学特征观察与随机扩增多态DNA（RAPD）技术，对国内外8株片形吸虫（Fasciola)作比较鉴别。形态典型的6株肝片形吸虫（F.hepatica)和1株大片形吸虫（F.gigantica)两种方法结果。南京的1株不典型虫种（F.sp)，其形态特征类似日本中间种／印度片形吸虫（F.indica),RAPD检测则与大片形吸虫聚类，差异仅0．255，亲缘于大片形吸虫，是一株形态不典型的大片形吸虫。比较表明，形态学方法能简单易行正确地判定典型片形吸虫，但难以识别中间种或亲缘种；RAPD技术则从分子遗传变异水平上鉴别虫种，有利于对中间种或亲缘种的识别及新种的发现，两者具有相互不可替代的相辅相成作用。     

海晏县沼泽草场牛羊放牧情况及同盘吸虫感染调查

为了解海晏县沼泽草场放牧牛羊及同盘吸虫感染等情况而进行了本调查,结果为：沼泽草场放牧户占到全县总放牧户数的9.27%,放牧牛羊分别占到全县牛羊总数的10.93%和12.65%。77.78%的沼泽草场放牧户牛羊感染同盘吸虫,而牛群和羊群同盘吸虫感染率分别达到了59.26%和48.15%;牛羊群体混合感染率40.74%;牛羊个体同盘吸虫感染率分别为14.83%和17.04%。结果还表明专业技术人员等对同盘吸虫病了解不足,区域间感染率差别较大,牛羊感染率有上升的趋势,证明现在使用的驱除药物对同盘吸虫虫卵阳性率降低很不理想,今后对本病的预防知识普及宣传及技术培训、驱除药物研制和筛选、湿地椎实螺的防治十分迫切。     

酶切图谱及序列分析虫体ITS2鉴别中国的片形吸虫

提取我国广西、四川、黑龙江、甘肃等地及法国的片形吸虫的总DNA,用PCR扩增完整的ITS-2.对得到的PCR产物用限制性内切酶Hsp 92Ⅱ,Rca I进行酶切和RFLP技术分析.并对ITS-2 PCR产物进行双向测序.以便确定国内片形吸虫种内及种间ITS-2的特点和序列变异的水平.结果显示:广西、四川、黑龙江、法国等地的样品通过PCR均扩增到约550 bp的ITS-2目标片段.Hsp92Ⅱ,Rcal可区别不同种的片形吸虫.对PCR产物的序列分析结果表明片形吸虫ITS-2全长均为362 bp,同种内ITS-2序列无变异,不同种间ITS-2序列存在5～6个碱基差异,变异率约为2.8%.对各地区片形吸虫ITS-2的PCR RFLP分析与对PCR产物的DNA序列分析一致证明,来自四川的样品和法国样品同属肝片形吸虫F.hepattca;广西样品属大片形吸虫F.gigantica;黑龙江的样品为中间型片形吸虫.本研究首次从分子水平上证实我国除有肝片形吸虫、大片形吸虫外,还存在中间型的片形吸虫.     

犬瘟热病毒小熊猫株附着蛋白基因的序列分析

为了从基因水平上研究我们分离的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）小熊猫（ＬＰ）毒株与疫苗弱毒Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ株的差别,本文对ＬＰ毒株附着蛋白（Ｈ）基因进行了序列测定,我们设计了４对引物,对ＬＰ株进行了ＲＴ－ＰＣＲ扩增,将扩增得到的４个阳性ＰＣＲ片段纯化后,直接进行测序,把所测序列拼接后,去掉侧翼的Ｆ基因和Ｌ基因序列,得到Ｈ蛋白的全基因序列,该基因全长为１９４６ｂｐ,开放阅读框架（ＯＲＦ）始于２１－２３