母鼠孕期和哺乳期连续染毒双酚A对子代雄鼠睾丸发育的影响

旨在探究双酚A (BPA)对子代雄鼠睾丸发育的影响。本研究将8周龄体重18～22 g的SPF级母鼠随机分为7组,每组4个重复,每个重复5只,A组每天给予普通蒸馏水,B组每天饮水给予0.05 mg·kg^-1 BPA,C组每天饮水给予0.5 mg·kg^-1 BPA组,D组每天饮水给予5 mg·kg^-1 BPA,E组每天饮水给予10 mg·kg^-1 BPA,F组每天饮水给予20 mg·kg^-1 BPA,G组每天饮水给予50 mg·kg^-1 BPA。F0代母鼠自怀孕起直至F1代子鼠断奶止饮水染毒BPA,F1代雄鼠于断奶(21日龄)处死。ELISA结果显示,母鼠染毒BPA剂量5 mg·kg^-1以上时,子代血清和睾丸组织BPA含量显著增加(P<0.05)。睾丸器官指数测定结果证明,染毒BPA剂量大于等于20 mg·kg^-1可导致子代雄鼠睾丸指数显著增大(P<0.05)。H&E染色显示,母鼠染毒BPA剂量大于等于10 mg·kg^-1可导致睾丸生精小管萎缩,小管间隙变大。彗星试验结果证明,染毒BPA大于等于5 mg·kg^-1可使子代睾丸细胞核DNA损伤显著上升(P<0.05)。免疫组化结果显示,母鼠染毒BPA剂量大于等于20 mg·kg^-1时子代睾丸雄激素受体(AR)表达量显著减少(P<0.05)。转录组测序结果显示,母鼠染毒50 mg·kg^-1BPA后子代雄鼠睾丸剪切体代谢通路U5 snRNA亚基编码基因Snrnp40上调,剪切体通用蛋白组件编码基因Hnrnpu下调,导致mRNA转录后修饰第一步受阻,荧光定量PCR结果与转录组测序结果一致,证实了转录组结果。结果表明,母鼠暴露于低剂量BPA可以引起子代睾丸发育异常,其分子机制可能与剪切体进行mRNA转录后修饰第一步反应受阻有关。     

母鼠孕期暴露双酚A对子代断乳雄鼠生殖内分泌以及睾丸DNA甲基化的影响

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对子代断乳雄鼠生殖内分泌与睾丸DNA甲基化的影响。按0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0 mg·kg~(-1)·d~(-1 )BPA剂量在妊娠期(PND)1～17 d灌胃孕鼠,制备孕鼠BPA暴露模型。然后统计母鼠妊娠期流产率,仔鼠断乳时存活率,睾丸系数。放射免疫法检测血清中雌二醇(E_2)、睾酮(T)含量;酶联免疫吸附法检测血清中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;实时定量荧光PCR法检测睾丸中DNA甲基转移酶1(Dnmt1)、DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)、DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)mRNA相对转录水平。结果显示,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著增加断乳时仔鼠睾丸系数(P0.01);20.0,40.0 mg/kg BPA暴露可显著增加母鼠流产率(P0.05),极显著降低仔鼠存活率(P0.01);2.5,20.0 mg/kg BPA暴露可极显著提高仔鼠血清T和ERβ含量(P0.01);各BPA剂量均可极显著降低仔鼠血清雌二醇水平(P0.01),促进睾丸内Dnmt1转录,抑制Dnmt3a和Dnmt3b转录;血清中雌激素受体α含量与BPA剂量呈现非线性关系。表明BPA通过干扰子代雄鼠睾丸内DNA甲基转移酶(Dnmt)的转录,使睾酮、雌二醇及雌激素受体分泌紊乱,影响子代雄鼠的生殖机能。     

阿司匹林丁香酚酯的一代繁殖毒性研究

为了初步评价阿司匹林丁香酚酯(AEE)对亲代大鼠的生殖功能和子代早期发育的影响,将360只Wistar大鼠随机分成6组,分别为受试药物AEE高、中、低剂量组(剂量分别为498.0、124.5和31.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)),阿司匹林组(剂量为68.4 mg·kg~(-1)·d~(-1)),丁香酚组(剂量为246.0 mg·kg~(-1)·d~(-1)),空白对照组(给予常规维持饲料)。各实验组均按设定剂量连续给药10周后,测定亲代大鼠主要的脏器系数、繁殖指数和生产指标以及子代(F1)仔鼠的出生指标和生长指标。结果显示,与空白对照组相比,高剂量的AEE影响胎鼠的生长(P0.05),并且高剂量AEE组大鼠的妊娠率、窝产仔数、出生活仔率和出生存活率都偏低,其中雄性仔鼠比例偏高;阿司匹林组妊娠大鼠和哺乳期胎鼠生长缓慢(P0.05);高剂量组AEE亲代大鼠的睾丸和附睾系数偏高(P0.05),阿司匹林和丁香酚组子代大鼠的附睾系数偏高(P0.05)。结果表明,在本试验条件下,AEE对大鼠繁殖毒性的最大无损害作用剂量为31.1 mg·kg~(-1)·d~(-1),对大鼠的最小有损害作用剂量为124.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)。     

胎儿期至性成熟期持续暴露双酚A影响雌鼠卵巢核糖体功能

双酚A(BPA)是一种常见的环境类雌激素,对动物产生生殖毒性。为了探究长期双酚A暴露对卵巢发育的影响,将孕0 d昆明小鼠(8周龄,体质量25～30 g,SPF级)随机分为7组,每组4个重复,每个重复5只。A组每天饮水给予蒸馏水(0.00 mg/kg BPA)作为对照组,B组每天饮水给与0.05 mg/kg BPA,C组每天饮水给与0.50 mg/kg BPA,D组每天饮水给与5.00 mg/kg BPA,E组每天饮水给与10.00 mg/kg BPA,F组每天饮水给与20.00 mg/kg BPA,G组每天饮水给与50.00 mg/kg BPA。BPA饮水自母鼠孕0 d到仔鼠45 d性成熟,共计63 d。结果显示,BPA剂量≥0.50 mg/kg时,仔鼠血清和卵巢中BPA含量显著增加(P0.05),但仔鼠卵巢器官指数均无显著变化和病理损伤。TUNEL结果显示,染毒BPA≥10.00 mg/kg时卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡(P0.05)。当染毒BPA剂量≥0.50 mg/kg时仔鼠卵巢ERα表达量显著增多(P0.05);低剂量BPA (0.05～10.00 mg/kg)显著降低ERβ表达,较高剂量(20.00～50.00 mg/kg)显著增加ERβ表达。转录组测序结果显示,BPA影响了卵巢核糖体通路,其中核糖体蛋白L21、Sa表达基因显著下调,核糖体蛋白L3、S2、L7a、S26、L26表达基因显著上调。这些基因的改变可能会导致胚胎生殖系统发育受阻和卵巢早熟。荧光定量PCR验证了转录组结果。本研究证实长期低剂量BPA暴露不会导致性成熟期小鼠卵巢器官指数变化和明显病理损伤,但会导致卵巢细胞凋亡和ER表达异常,BPA的生殖毒性可能与核糖体功能蛋白表达异常有关。     

枸杞多糖对全氟辛酸致仔鼠损伤的保护作用

为了探讨枸杞多糖(LBP)对全氟辛酸(PFOA)致小鼠损伤的保护作用,将100只孕0d小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,每组20只。正常对照组饲喂正常饲料,其余4组饲喂含有相同剂量的PFOA(5mg·kg~(-1)·d~(-1))的染毒饲料,持续至孕17d,建立慢性毒性损伤模型。C、D、E组小鼠分别灌服不同剂量的LBP(20,40,80 mg·kg~(-1)·d~(-1)),A、B组小鼠灌服等量生理盐水。检测仔鼠的体质量、脏器指数、血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)含量、DNA总甲基化、DNA甲基转移酶(DNMTs)的表达量。结果发现,与正常对照相比,PFOA可极显著降低仔鼠成活率(P<0.001),体质量(P<0.01),脾脏指数、子宫指数、SOD、GSH-PX的含量、DNA甲基转移酶1,3a,3b(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)的表达(P<0.05);极显著提高肝脏指数、MDA和DNA总甲基化(P<0.01)。给予LBP后,高剂量组仔鼠成活率极显著高于模型组(P<0.001);DNA总甲基化极显著低于模型组(P<0.01);体质量、脾脏指数、子宫指数、SOD、GSH-PX、DNMT1、DNMT3a、DNMT3均显著高于模型组(P<0.05)。结果表明,枸杞多糖可提高抗氧化能力,逆转DNA甲基化异常修饰和DNMTs的表达,缓解PFOA造成的胚胎期仔鼠发育迟缓和死亡。     

亚急性硒中毒对雄性小鼠睾丸能量代谢及抗氧化能力的影响

为了研究亚硒酸钠对小鼠睾丸能量代谢及抗氧化能力的影响,将试验小鼠分为空白对照组(0.00mg/kg体重)、亚硒酸钠低剂量组(0.14mg/kg体重)、中剂量组(0.54mg/kg体重)和高剂量组(2.16mg/kg体重),每天同一时间按以上剂量灌胃,连续30 d.分别于染毒10、20 d和30 d后,处死小鼠,迅速采取睾丸组织,离心,取上清.通过对睾丸能量代谢与抗氧化能力水平的检测,结果显示,染毒后小鼠睾丸乳酸脱氢酶(LDH)、细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性明显降低,且随着染毒剂量的增加呈显著下降趋势;小鼠睾丸细胞丙二醛(MDA)含量明显升高,且随着染毒剂量的增加和时间的延长呈显著升高趋势.结果表明,亚急性硒中毒使小鼠睾丸的能量代谢与抗氧化能力受损,试验结果为进一步研究亚急性硒中毒对小鼠生殖系统的影响提供理论依据.     

黄芩苷对双酚A致小鼠生殖损伤的保护作用

为研究黄芩苷对双酚A(Bisphenol A,BPA)所致子代小鼠生殖毒性的缓解作用。本试验将60只昆明孕鼠随机分为A、B、C共3组,每组20只。A组为对照组,孕鼠妊娠1~14d灌胃生理盐水同时饲喂普通鼠粮;B组为BPA组,孕鼠妊娠1~7d给予生理盐水,妊娠8~14d给予500mg/kg BPA;C组为黄芩苷+BPA组,孕鼠妊娠1~7d灌胃1mg/kg黄芩苷,妊娠8~14d给予500mg/kg BPA,待孕鼠自然分娩。观察记录仔鼠死亡情况。至仔鼠8周龄剖杀,分离血清,摘取睾丸或卵巢,ELISA试剂盒分析仔鼠血清睾酮(T)、雌二醇(E2)及黄体生成素(LH)水平,HE染色观察卵巢或睾丸组织结构的变化,免疫组化及免疫荧光方法检测仔鼠睾丸或卵巢Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果显示:黄芩苷能够降低BPA致子代小鼠死亡率,升高仔鼠T(♂)、LH(♀)含量,降低仔鼠(♀)E2水平(P0.05)。HE染色结果表明,BPA组仔鼠睾丸组织损伤严重,间质细胞减少,卵巢组织结构空泡逐渐增多,颗粒数量逐渐减少。黄芩苷能改善BPA引起的睾丸及卵巢组织损伤。免疫组化结果显示,BPA对仔鼠睾丸或卵巢Bax蛋白表达无影响,但对睾丸或卵巢Bcl-2蛋白表达有降低作用。预先给于黄芩苷后能够升高仔鼠睾丸或卵巢Bcl-2蛋白表达,但对Bax蛋白表达无显著影响。免疫荧光结果发现,BPA升高仔鼠睾丸或卵巢组织中Bax阳性蛋白表达,降低Bcl-2阳性蛋白表达。黄芩苷降低睾丸或卵巢Bax蛋白表达,升高睾丸或卵巢Bcl-2蛋白表达。本试验结果表明,孕鼠妊娠期给予黄芩苷降低BPA引起的子代小鼠死亡率,平衡生殖激素水平和睾丸/卵巢中相关凋亡蛋白表达,缓解BPA染毒孕鼠对子代小鼠所致的生殖毒性。     

EGCG抑制饮食性高脂血症大鼠Angptl3-LPL信号通路的研究

本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的降脂作用与Angptl3-LPL信号通路之间的关系。通过高脂饲料喂养建立高脂血症大鼠动物模型,将正常大鼠按体质量和体脂水平随机分为正常对照组、高脂模型组、EGCG高剂量组(EGCG-H,30 mg·kg~(-1)·d~(-1))、EGCG低剂量组(EGCG-L、15 mg·kg~(-1)·d~(-1))、T0901317组、EGCG-T0901317组(EGCG,30mg·kg~(-1)·d~(-1))。连续灌胃8周后,用生化法检测血清中TG、TC、LDL-C含量,qPCR法检测脂肪组织中脂蛋白脂肪酶(LPL)mRNA和肝组织中Angptl3 mRNA相对表达量,Western blot检测蛋白表达水平。给大鼠口服选择性的LXRs激动剂T0901317后测定肝脏Angptl3 mRNA和蛋白表达水平,评价EGCG对T0901317抑制剂的作用。结果表明,与高脂模型组相比,EGCG(30、15 mg·kg~(-1)·d~(-1))能有效降低大鼠的血脂水平,明显抑制肝脏Angptl3 mRNA和蛋白表达、上调脂肪组织LPL mRNA和蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),且EGCG(30mg·kg~(-1)·d~(-1))可有效抑制由T0901317引起的Angptl3 mRNA和蛋白的表达。本研究从一个新的角度揭示了EGCG通过抑制Angptl3-LPL信号通路来防治与高脂相关性疾病的可能机制,所以以Angptl3-LPL信号通路为调节靶标,可能成为治疗血脂紊乱的一条新途径。     

孕鼠暴露双酚A对仔鼠存活率、生殖激素及相关基因的影响

为了研究孕鼠在孕期暴露双酚A（bisphenol A,BPA）对仔鼠生殖激素及相关基因的影响,试验将40只昆明孕鼠随机分为A、B、C、D共4组,每组10只。其中A组为对照组,饲喂普通鼠粮;B、C、D组孕鼠整个妊娠期（妊娠1 d至分娩）分别按每只鼠每天50、500、2 500 mg/kg体重给予BPA,待孕鼠自然分娩,观察记录仔鼠死亡情况。至仔鼠性成熟（56日龄）剖杀仔鼠,摘取睾丸或卵巢称重并计算脏器指数,HE染色观察卵巢或睾丸组织结构的变化,ELISA试剂盒分析仔鼠血清睾酮（T）、促卵泡素（FSH）及雌二醇（E₂）水平,免疫组织化学方法检测仔鼠睾丸或卵巢Bax、Bcl-2蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测仔鼠睾丸StAR、CYP11a或卵巢AMH、Kitlg mRNA表达。结果显示,孕鼠暴露BPA极显著增加了仔鼠死亡率（P<0.01）,显著降低了仔鼠睾丸重（P<0.05）。ELISA检测结果表明,孕鼠暴露BPA极显著降低了仔鼠T（♂）及FSH（♀）含量（P<0.01）,极显著升高了仔鼠（♀） E₂水平（P<0.01）。HE染色结果显示,随BPA剂量增加,仔鼠睾丸组织损伤严重,间质细胞减少;卵巢组织结构随BPA剂量增大,空泡逐渐增多,黄体颗粒数量逐渐减少。免疫组化结果显示,孕鼠暴露BPA增加了仔鼠睾丸或卵巢组织中Bax阳性蛋白表达,减少了Bcl-2阳性蛋白表达,显著降低了雄性仔鼠StAR mRNA表达量（P<0.05）;B、D组雄性仔鼠CYP11a mRNA表达量极显著降低（P<0.01）,而C组CYP11a mRNA表达量极显著升高（P<0.01）;C、D组雌鼠Kitlg mRNA表达极显著降低（P<0.01）,AMH mRNA表达量显著升高（P<0.05）。本试验结果表明,孕鼠妊娠期暴露不同剂量BPA增加了仔鼠死亡率,扰乱了生殖激素平衡和睾丸/卵巢中相关凋亡蛋白及生殖基因表达。     

高氟对雏鸡肝细胞周期和凋亡影响的研究

选用300只1日龄Avian肉鸡健雏,随机分为4组,分别饲以对照日粮(F 23 mg·kg~(-1))和高氟口粮(F 400 mg·kg~(-1)>,Ⅰ组;F 800 mg·kg~(-1),Ⅱ组;F 1 200 mg·kg~(-1),Ⅲ组)42 d,第14、28、42天每组随机抽取5只,利用流式细胞术研究高氟对雏鸡肝细胞周期和凋亡的影响.结果显示:高氟Ⅱ组和Ⅲ组肝脏质最显著低于对照组(P<0.05),脏器指数显著高于对照组(P<0.05).流式细胞仪测定,14 日龄时高氟Ⅱ组和高氟Ⅲ组肝细胞G_0/G_1期极显著升高(P<0.01),S期、G_2+M期和增殖指数(PI)与对照组相比不同程度地降低;28和42日龄时高氟Ⅱ组和高氟Ⅲ组肝细胞G_0/G_1极显著降低(P<0.01),S期和PI值显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),G_2+M期无显著变化.14、28和42日龄时,高氟Ⅱ和Ⅲ组肝细胞同时凋亡率均极显著高于对照组(P<0.01).日粮含氟800及1 200 mg·kg~(-1)时可引起肝细胞增殖能力增强,凋亡细胞显著增多.