维生素D的免疫功能

维生素D是动物所必需的营养素,除对钙和骨代谢具有重要影响外,对免疫系统也有重要作用。1,25(OH)2维生素D3是维生素D的活性形式,1,25(OH)2维生素D3的生物学效应是由维生素D3受体(VDR)介导的。淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞都有VDR的表达,这表明,维生素D对免疫系统功能有重要调节作用。     

1,25-( OH)2D3及LPS对2型糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞维生素D受体表达的影响

目的 探讨1,25-(OH)2D3及TLR4配体(脂多糖,LPS)对2型糖尿病(T2DM)和糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)尿毒症患者血清干预的单核细胞维生素D受体(VDR)表达的影响,进一步探索1,25-( OH)2D3在T2DM和DN炎症性免疫反应中的作用.方法 分离研究对象(健康对照组、T2DM组和DN尿毒症组)外周血血清,孵育THP-1单核细胞,然后于含或不含10-7 mol/L的1,25-(OH)2D3培养液中培养48 h后,再用终浓度为1μg/ml的LPS干预24h,收集单核细胞和培养上清.采用RT-PCR检测VDR mRNA表达,Western blot、免疫荧光检测THP-1单核细胞内VDR蛋白表达.ELISA法检测细胞培养上清IL-6和IL-10浓度.结果 与正常对照组比较,在LPS的刺激下T2DM组和DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR mRNA水平下调[对照组(0.99±0.25);T2DM组(0.65±0.24);DN尿毒症组(0.62±0.27),P＜0.05];DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR蛋白表达比正常对照组和T2DM组显著下调[对照组(0.48 ±0.05);T2DM组(0.50±0.06);DN尿毒症组(0.20±0.01),P＜0.01],且LPS增强以上患者血清孵育的THP-1单核细胞炎症细胞因子IL-6的分泌[对照组(15.13±1.61);T2DM组(24.06 ±2.92);DN尿毒症组(70.77 ±5.48),P＜0.05];而1,25-(OH)2D3可部分阻断上述作用.结论 LPS能下调T2DM和DN尿毒症患者单核细胞VDR mRNA和蛋白的表达,引起促炎和抗炎细胞因子失调.1,25-(OH)2D3可部分逆转LPS的作用,对T2DM和DN尿毒症可能具有一定的保护作用.     

1，25-(OH)_2D_3对体外培养围产期奶牛外周血淋巴细胞转化率及γ-干扰素(IFN-γ)的影响

体外培养围产期奶牛外周血淋巴细胞,分别添加0、0.01、0.1、1、10和100nM的1,25(OH)_2D_3,研究1,25-(OH)_2D_3对奶牛外周血淋巴细胞免疫功能的影响。结果表明,1,25-(OH)_2D_3对淋巴细胞转化率没有影响,但可以通过抑制IFN-γ的分泌影响奶牛的细胞免疫功能。添加0.01～100nM的1,25-(OH)_2D_3对淋巴细胞的转化率没有显著影响,但剂量依赖性抑制了ConA和PWM诱导的淋巴细胞IFN-γ的产量。当1,25(OH)_2D_3浓度达到0.1nM、1nM时与对照组相比分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)抑制ConA诱导的淋巴细胞IFN-γ的产量。以PWM激活的细胞在培养48h、72h,1,25-(OH)_2D_3添加量在0.1～100nM范围均极显著抑制IFN-γ的产生(P<0.01)。添加0.01nM 1,25(OH)_2D_3对IFN-γ的抑制作用相对较小(P>0.05),在培养48h后并未表现出显著的抑制作用,但培养72h后也极显著的抑制了IFN-γ的产生(P<0.01)。     

1,25(OH)2D3及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)₂D₃是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊，分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞，用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^-1 1,25(OH)₂D₃处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染，同时设置阴性对照组和空白对照组，每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)₂D₃处理以及VDR基因敲除后，分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达，用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明，1,25(OH)₂D₃能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD109tr1、gBD109tr2、gBD113...     

维生素D受体基因与骨代谢关系的研究

维生素D(VD)与骨代谢的钙磷吸收有着非常密切的关系,其体内活性形式为1,25 (OH)₂D₃。而VD受体（VDR）是介导1,25 (OH)₂D₃发挥生物效应的核内生物大分子。近年来,随着对骨病研究的深入,对VDR基因与骨代谢关系的研究越来越受到国内外学者的重视。在不同群体甚至不同个体中,VDR基因极容易表现出多态性。目前大量的研究集中在VDR基因4个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点FokI、BsmI、ApaI、TaqI与骨代谢之间的关系。作者分别从钙吸收、骨量、骨密度、骨质疏松、佝偻病等方面对VDR基因与骨代谢关系进行综述。     

1,25-二羟维生素D_3对肉鸡生长性能、骨骼矿化及小肠NaPi-Ⅱb和VDR mRNA表达的影响

试验旨在研究不同水平1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2-D3)对1~14日龄肉鸡生长性能、骨骼矿化及促进十二指肠磷吸收关键基因表达的影响。将180只1日龄罗斯308肉鸡分入3个处理,每处理6个重复,每重复10只。3个处理组分别饲喂3种日粮:在基础日粮中分别添加0、5、10μg/kg 1,25-(OH)2-D3,试验期14d。14日龄屠宰肉鸡,剥离股骨、胫骨及十二指肠1/2处的黏膜;测定肉鸡的生长性能、骨骼矿化相关指标,分析Ⅱb型磷酸钠转运蛋白(NaPi-Ⅱb)、细胞核维生素D受体(nVDR)和细胞膜维生素D受体(mVDR)基因表达情况。结果显示:与基础日粮组相比,添加5μg/kg 1,25-(OH)2-D3组肉鸡体增重、采食量、料重比、股骨和胫骨各指标(重量、长度、直径、灰分重量、灰分含量、钙、磷含量)及十二指肠NaPi-Ⅱb、nVDR和mVDR mRNA表达量均未发生显著变化(P0.05);添加10μg/kg 1,25-(OH)2-D3显著降低了肉鸡体增重、采食量、股骨和胫骨各指标及十二指肠NaPi-Ⅱb、nVDR和mVDR mRNA表达量(P0.05),同时料重比显著增加(P0.05)。综合上述结果,在基础日粮中添加5μg/kg 1,25-(OH)2-D3不会影响1~14日龄肉鸡的生长、骨骼矿化及十二指肠磷吸收关键基因表达;但添加量增至10μg/kg会显著抑制1~14日龄肉鸡生长、骨骼发育,影响十二指肠NaPi-Ⅱb和VDR mRNA表达。     

肉鸡日粮中1α-羟基维生素D_3与1,25-二羟基维生素D_3的生物学效价比较

试验旨在研究以骨骼矿化指标评估1~42日龄肉鸡日粮中1α-羟基维生素D_3(1α-OH-D3)和1,25-二羟基维生素D_3[1,25-(OH)_2-D_3]的相对生物学效价。将300只1日龄罗斯308肉鸡母雏随机分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复10只。设计6种饲粮,在基础饲粮(钙Ca 0.50%,非植酸磷NPP 0.25%,无维生素D_3)中分别添加3个水平1α-OH-D_3(1.25、2.5、5.0μg/kg)和3个水平1,25-(OH)_2-D_3(1.25、2.5、5.0μg/kg)。结果表明:以42日龄肉鸡胫骨强度、重量、长度、直径和灰分重量为评价指标,1α-OH-D_3生物学效价分别是1,25-(OH)_2-D_3的0.78、0.77、0.93、0.91倍和0.78倍;以42日龄肉鸡股骨强度、重量、长度、直径和灰分重量为评价指标,1α-OH-D_3生物学效价分别是1,25-(OH)_2-D_3的0.76、0.84、0.95、0.88倍和0.80倍;以42日龄肉鸡跖骨重量、长度和灰分重量为评价指标,1α-OH-D_3生物学效价分别是1,25-(OH)_2-D_3的0.82、0.96倍和0.83倍。结果提示:以42日龄肉鸡骨骼矿化指标评价,1α-OH-D_3的生物学效价约为1,25-(OH)_2-D_3的0.85倍。     

醋酸铅对小鼠卵巢组织结构和卵巢颗粒细胞凋亡的影响

将40只20日龄雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只。给3个处理组小鼠分别连续2d腹腔按体质量注射醋酸铅10,20,40mg/kg,对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后24,72h分离卵巢,用原位末端标记法(TUNEL)测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,研究卵巢组织结构及卵巢颗粒细胞凋亡的变化。结果显示,醋酸铅可使小鼠卵巢组织结构发生病变,加速卵巢颗粒细胞的凋亡,且凋亡率随着攻毒剂量的增加和时间的延长而升高,与对照组相比,差异极显著(P0.01);表明醋酸铅对小鼠卵巢具有毒性作用,可诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡,并呈现一定的剂量-时间依赖关系。     

1,25(OH)_2D_3对体外诱导培养鸡胚破骨细胞的影响

为了研究1,25(OH)2D3对体外诱导培养鸡胚破骨细胞的作用,从18日龄鸡胚长骨(股骨和胫骨)分离骨髓细胞进行培养,在培养过程中分别添加10-7,10-8和10-9mol/L的1,25(OH)2D3。通过倒置显微镜观察其活体形态,对培养1,3,5,7 d的破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)鉴定,培养7 d后进行骨吸收陷窝和功能分析。结果显示,10-8mol/L组除第1天和其他各组差异不显著以外,第3,5,7天诱导所生成的破骨细胞的数量都显著高于10-7和10-9mol/L这2组(P0.05),极显著高于对照组(P0.01)。经扫描电镜观察,无论是吸收陷窝面积还是陷窝吸收程度,10-8mol/L组均显著高于其2组;对照组无明显陷窝。由此可知,1,25(OH)2D3能诱导鸡胚骨髓细胞形成破骨细胞,且浓度为10-8mol/L时效果最好,所诱导的破骨细胞活性较高。     

保胎无忧散对小鼠诱导性流产的保胎作用

选择保胎无忧散预处理试验小鼠,观察保胎无忧散对米非司酮(RU486)诱导流产作用的抑制效果.结果显示,使用RU486在孕7d,颈部注射后,试验小鼠的流产率达到了100％；应用中药方剂保胎无忧散能有效对抗RU486诱导的小鼠流产,试验中动物模型的流产率从100％下降到40％；组织学观察发现,RU486诱导流产小鼠子宫内膜出现明显损伤,而在中药方剂组,试验小鼠子宫得到了有效的保护.     

维生素D对牛卵巢卵泡颗粒细胞的影响

试验旨在探寻具有生物活性的维生素D(1α,25-(OH)2D3)对体外培养的牛卵巢卵泡颗粒细胞的活力、增殖及雌激素分泌的影响。在体外培养的牛卵巢卵泡颗粒细胞中加入不同梯度的1α,25-(OH)2D3(0,1,10,100 n M),用CCK-8检测细胞活力,细胞计数检测增殖,ELISA法检测雌二醇浓度。结果表明:1、10、100 n M的1α,25-(OH)2D3均能提高卵泡颗粒细胞的活性,1α,25-(OH)2D3为100 n M时其刺激作用最强;10、100 n M的1α,25-(OH)2D3能刺激卵泡颗粒细胞增殖与雌二醇分泌,100 n M的1α,25-(OH)2D3刺激增殖作用最强,10 n M的1α,25-(OH)2D3刺激雌二醇分泌的能力最强。     

天然维生素D3代谢物有益于蛋鸡骨骼健康

钙储备充足是保证蛋鸡骨骼质量和蛋壳质量的关键。1,25(OH)_2D_3(生物活性维生素D_3代谢物)在钙稳态中起重要作用。琉球柳叶中的1,25(OH)_2D_3-糖苷是生物活性形式维生素D_3的独特来源,在肠道中分解后可被逐渐吸收并发挥作用。     

1,25-(OH)_2-D_3对抗菌肽表达调控的影响

通过外源途径调控机体内源性抗菌肽表达,以增强动物的防御能力和提高动物的生产性能是实现"健康养殖"的一条新型途径。生物体受病原微生物入侵后可由TLR介导内源性抗菌肽表达。结果表明:由PAMP诱发抗菌肽合成机制的模式有TLR-NF-κB和TLR-VDR 2大信号传导通路。TLR-VDR通路的基本过程是激活相应TLR→诱导Cyp27B1表达→产生1,25-(OH)2-D3→激活VDR→识别抗菌肽基因VDRE序列而调节抗菌肽表达。1,25-(OH)2-D3作为TLR-VDR通路的重要调节物质,可诱导抗菌肽在许多细胞中表达并与其他物质对抗菌肽表达起协同作用。     

醋酸铅对母鼠生殖与胚胎发育影响

将420只体质量为(15.32±2.01)g的雌性昆明系小鼠随机分为5个处理组和1个对照组,每组设7个重复,每个重复10只。各处理组分别腹腔按体质量注射10、15、20、25、30mg/kg的醋酸铅溶液,对照组注射等体积的灭菌生理盐水,每隔2d注射并称重1次,共注射10次,期间记录小鼠体质量及临床表现。当小鼠体质量达到25g以上时,分批对各试验组和对照组进行超排处理,腹腔注射10IU马绒毛膜促性腺激素(PMSG),47h后注射10IU人绒毛膜促性腺激素(hCG),并与公鼠合笼。合笼后87~96h内颈椎脱臼处死小鼠,观察卵巢、子宫形态,并统计胚胎数,同时制作卵巢、子宫石蜡切片,观察其病理组织学变化,研究醋酸铅对雌性小鼠卵巢、子宫组织结构及早期胚胎发育的影响。结果显示:(1)当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,可明显抑制小鼠体质量的增长,随着染毒剂量的增加,作用时间的延长,小鼠体质量增加明显趋缓,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01);(2)染铅组母鼠早期胚胎发育受到显著影响,主要表现为回收胚胎总数以及受精卵发育到桑椹胚和囊胚的总数均显著低于对照组(P0.05),而各染铅组退化胚、延迟胚数和未受精卵总数显著高于对照组(P0.05);(3)染铅组卵巢中的初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡数量明显低于对照组,而原始卵泡、闭锁卵泡数量明显高于对照组。(4)染铅组小鼠卵巢和子宫形态发生明显畸形,当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01)。且上述变化均呈明显的剂量一时间效应。研究结果表明,当醋酸铅暴露剂量≥20mg/kg时,可对小鼠生长发育具有明显抑制作用,同时使母鼠生殖器官卵巢和子宫的结构造成严重损害,并影响其生殖功能与早期胚胎发育。     

维生素D的研究进展(下)

维生素D的生物学功能1.一般作用模式现已确认,VD在靶组织特别是1,25—(OH)_2D_3在肠和骨骼中是通过类似于类固醇激素的作用对许多生物学活动进行调节。这些功能包括细胞生长、分化和免疫功能,还有与矿物质代谢有关的许多靶组织的活动(Herdt 等,1991)。1,25—(OH)_2D_3在雏鸡肠道内可刺激 mRNA 编码 VD 依赖性钙结合蛋白(CaBP)(Christak 等,1980)。此外,还发现其他 VD 依赖性蛋白质,如在肠道作为线粒体外膜一部分的分子量为39000～42000的一种蛋白质(Hobden 等,1980)、一种精胺结合蛋白(Mezzetti 等,1981)、鸟氨酸脱羧酶(Shinki 等,1981)和一种分子量为67000的     

维生素D生物功能的新进展

维生素D除具有调控钙、磷代谢和骨稳态等作用之外,在其他组织中也发挥多种活性作用,如调控免疫系统和调节细胞增殖与分化等方面的新作用。维生素D受体（VDR）除了在其传统组织如骨、肠道和肾脏中发现以外,还在众多组织中被发现。此外,这些组织中亦含有酶CYP2781,其可使维生素D循环形式25-OH—D3转化生成1,25（OH）2D3。1,25（OH）2D3在非肾组织中的代谢与肾脏不同,且VDR介导的转录活性调控作用也是细胞特异性的,因而维生素D的新作用具有细胞特异性,这为维生素D及其类似物提供了许多新的,临床应用依据,但其非传统作用也受到维生素D传统作用的限制,如高血钙和高尿钙。     

1,25(OH)2D3通过调节氧化还原状态影响猪前体脂肪细胞分化

维生素D可影响动物脂肪形成,然而其对脂肪细胞分化的作用仍有争议。本研究分离培养3日龄仔猪皮下前体脂肪细胞,成脂诱导后,分别以0 nmol/L(对照)、0.1 nmol/L和100 nmol/L1,25(OH)₂D₃处理,通过分析其对细胞分化、氧化还原指标及基因表达的影响,探讨维生素D调控猪脂肪细胞分化的机制。结果表明,0.1 nmol/L 1,25(OH)₂D₃显著抑制猪前体脂肪细胞分化(P<0.05),极显著提高细胞ROS和GSSG水平(P<0.01),降低GSH及GSH/GSSG比值(P<0.01);100 nmol/L 1,25(OH)₂D₃显著促进细胞分化(P<0.05),降低ROS和GSSG水平(P<0.01),提高GSH及GSH/GSSG比值(P<0.01)。此外,100 nmol/L 1,25(OH)₂D₃显著上调SOD2和Prx3 mRNA表达,但0.1 nmo...     

日粮中1,25—二羟维生素D3含量对肉鸡性能的影响

据报道,向低钙高磷肉鸡日粮中添加10μg/kgl,25—二羟维生素D_3[1,25-(OH)_2D_3]可以降低其胫软骨发育不良(TD)的发生率并增加骨灰分含量。但有时可引起饲料转化率降低。一些研究报告,5μg/kgl,25-(OH)_2D_3就可有效降低肉鸡的TD。但是,这些研究都是用电热笼架式育雏器进行试验的。在商品生产中,降低舍饲肉鸡TD发生率所需要的1,25-(OH)_2D_3含量尚无评价。 最近,美国佐治亚州立大学的Kevin D.Roberson等人通过试验研究评价了在实际条件下饲养肉鸡3和5周龄时降低TD发生率所需日粮1,25-(OH)_2D_3的含量。 试验用日龄Peterson×Arbo Acres肉鸡小公鸡进行,饲养于有刨花垫料的平养鸡栏中,用白炽灯连续光照,自由采食和饮水,试验期5周。基础日粮为可以引起TD的低钙高磷日粮。试验日粮添加3、6或9μg/kgl,25     

NO在小鼠早期胚胎吸收过程中的作用

给妊娠 7d小鼠尾静脉注射细菌脂多糖 (L PS)诱导早期胚胎吸收。注射 L PS后 12、2 4、36 h,以 EL ISA、比色法检测血清和子宫匀浆中 Th1型细胞因子 IFN- γ、IL- 12与 NO的含量变化 ;免疫组织化学法观察 3种一氧化氮合酶(n NOS,e NOS,i NOS)和 Th2型细胞在小鼠子宫表达的变化。此外 ,还观察了 NO供体硝普钠 (SNP)诱导孕鼠流产效果及氨基胍 (AG)对抗 L PS诱导孕鼠流产的效果。结果显示 ,相对于正常妊娠组 ,L PS处理组孕鼠子宫匀浆 NO含量及 IFN- γ、IL- 12水平极显著升高 (P<0 .0 1) ,血清 NO含量也极显著升高 (P<0 .0 1) ;n NOS、i NOS在 L PS处理组小鼠子宫可见阳性标记 ,而 e NOS未见阳性标记 ;大量 Th2型阳性细胞标记仅在正常妊娠组小鼠子宫内膜基质可见 ,L PS处理组未见阳性细胞。腹腔注射 SNP致使孕鼠早期胚胎吸收 ,然而妊娠 6～ 9d腹腔注射 AG却未能降低 L PS诱导的孕鼠早期胚胎吸收。上述结果提示 ,L PS处理后 ,Th1型免疫反应增强 ;源自升高表达的 i NOS的子宫局部高浓度 NO可能作为一种效应分子介导小鼠早期胚胎吸收。     

伪狂犬病毒人工感染小鼠模型的建立

为建立伪狂犬病毒(PRV)人工感染小鼠的模型,本研究采用PRV强毒株接种猪、羊及小鼠,疫苗株接种小鼠,应用组织病理技术观察PRV人工感染不同动物导致的组织病变。以1×102~4.5×104TCID50不同梯度剂量PRV强毒株通过滴鼻或皮下接种途径人工感染小鼠,6×104~2.7×105TCID50不同剂量疫苗株皮下接种小鼠,统计各人工感染剂量下小鼠存活率。感染PRV动物脑部病理切片经苏木素-伊红(HE)染色观察,结果显示PRV强毒株及疫苗株接种小鼠后与PRV感染猪、羊后出现相似病理变化,均可导致炎性细胞的浸润及大脑实质内小胶质细胞的增殖。免疫组化染色表明PRV可以感染小鼠脑组织。本研究最终采用小鼠作为实验动物,应用PRV疫苗株,采用1×105TCID50剂量通过皮下注射接种小鼠,在接种后6 d观察病变。该实验模型为进一步研究PRV感染小鼠后的天然免疫机制提供了实验依据。