猪非典型瘟病毒（APPV）研究进展

猪非典型瘟病毒（atypical porcine pestivirus,APPV）是2015年新发现的瘟病毒属病毒,国际病毒分类学委员会2017 年将其确定为瘟病毒属K（Pestivirus K）的代表毒株。该病毒可导致仔猪先天性震颤（congenital tremor,CT）,典型症状为仔猪轻微震颤,头部和四肢明显。目前APPV已在全球广泛流行,我国也有相关报道,关于该病毒研究的报道越来越多,但研究进展的报道相对较少,目前已证实其与CT紧密相关。APPV不容易被分离,缺少最重要的病毒攻毒试验结果,疫苗研究也需要在前期基础研究深入的基础上才有可能获得成功。为此,本文从病原学、流行病学、诊断技术及疫苗研发等方面,对取得的最新研究进展进行概述,以期增强人们对APPV的认识,为我国防控与研究APPV提供参考。     

猪小环状病毒(PCV)研究进展

1973年Ilise Tischer首先发现猪小环病毒(PCV),并将其描述为一种猪肾细胞系(pk-15)的污染物.以后陆续有证据显示该病毒与断奶后全身消耗性综合征(PMWS)和仔猪先天性震颤相关.血清学调查表明,该病毒在全世界范围内广泛存在并经常和PRRS伴发存在,因此这方面研究逐渐成为热点.本文概述PCV的流行病学、发病机理、临床表现、病理变化及诊断和防治等     

仔猪先天性震颤瘟病毒RT-PCR检测方法的建立

旨在建立检测仔猪先天性震颤瘟病毒(APPV)的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。根据GenBank上登录的APPV基因组序列,设计1对引物,以临床上表现典型震颤仔猪的淋巴结为材料,提取RNA,建立了RT-PCR方法,并进行敏感性、重复性和特异性试验,对其扩增产物测序比对分析;利用该方法,对临床病料进行检测。结果显示,从典型震颤仔猪的淋巴结中均扩增到与预期大小有一致的片段,经测序比对,扩增片段序列与APPV相应片段的核苷酸同源性在89%以上;该方法只能扩增出APPV片段,而其他几种常见猪病毒均为阴性,3次重复检测结果基本一致,可检测最低cDNA浓度为184.11ng/μL;对临床病料检测,典型病例的检出率达100%。试验结果表明,建立的RT-PCR方法具有良好的特异性、重复性、敏感性等优点,可用于临床APPV引起的仔猪先天性震颤早期检测、病毒鉴定和分子流行病学调查。     

广东地区1株猪非典型瘟病毒的鉴定及遗传演化分析

猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus, APPV)是引起仔猪先天性震颤(congenital tremor, CT)的主要病原,给养猪业带来严重的经济损失。为了解APPV在广东地区猪群的流行和变异情况,本研究于2018—2019年从广东地区采集12份疑似CT的病料样品,通过RT-PCR对APPV进行检测,并对APPV阳性的病料样品通过PCR扩增其全长基因组序列并测序,同时对其ORF和E2基因的同源性、遗传进化关系及E2蛋白氨基酸分子特征进行分析。结果显示,有3份样品为APPV阳性,进一步对其中1份阳性样品通过全基因组PCR扩增得到1条长度为10 989 bp的APPV全长序列,命名为APPV-China/GD-ZK/2018(GD-ZK)。GD-ZK与参考毒株ORF和E2基因的核苷酸同源性分别为80.7%～99.7%,80.8%～99.9%,其中与APPV/CNYJ/2018的同源性最高。分别对GD-ZK株的ORF和E2基因进行遗传演化分析,结果显示,根据遗传进化关系可将APPV划分为Genotype 1、Genotype 2和Genotype 3三种...     

Preliminary Study on a Novel Atypical Congenital Tremor of Piglets and Its Etiology

To investigate the infection of atypical porcine pestivirus (APPV) in China, autopsywas carried out for clinical suspected piglet of congenital tremor, viscera pathologic changes were observed. Two pairs of primersfor detection of the NS2-3 and NS5B genes by RT-PCR were designed according to the genome of APPV. The positive product was sequenced using DNAStar and Mega 7.0 softwares,and drawing the molecular evolution trees. The results showed that the lesions were similar to classical swine fever, but without infarction of the spleen and peripheral hemorrhage of the mandibular lymph node.Epidemic materials amplified products were consistent with the expected size, the sequences were APPV fragments by BLAST. APPV and other pestivirus belonged to two branch with the homologies about 70%. The homologies of NS2-3 and NS5B genes among the isolates and the APPV reference strains were about 76.9% to 98.8%, and the homologies of NS2-3 gene of 7 isolates were 89.7% to 94.8%,the homologies of NS5B gene of 12 isolates were 82.2% to 100.0%. This was the first report for the infection of APPV in piglets in China.     

一种新型仔猪先天性震颤及其病原的初步研究

为了解国内猪群是否存在新型仔猪先天性震颤及其病原,本试验对临床疑似仔猪先天性震颤病例进行剖检,观察组织脏器的病理变化;根据GenBank上登录的瘟病毒基因组序列设计2对引物,以典型震颤仔猪的病料RNA为模板,进行RT-PCR,并对阳性产物进行测序;用DNAStar和Mega 7.0软件对所测序列进行分析,绘制系统进化树。结果表明,疑似仔猪先天性震颤病猪的组织脏器病理变化与猪瘟的病理变化相似,但无明显的脾脏梗死和淋巴结周边出血;从采集的病料中均扩增到与预期大小基本一致的条带;所测序列经BLAST比对,均为仔猪先天性震颤瘟病毒（APPV）的相应基因序列片段;系统进化树结果显示,哺乳动物瘟病毒可分为两大进化分支,APPV为单独一分支,其他瘟病毒为另一分支,两分支的同源性低于70%;所测的NS2-3和NS5B基因序列与GenBank上登录的APPV相应序列同源性在76.9%~98.8%之间,表明本研究所测定的序列是APPV的基因组序列;测定的7条NS2-3基因序列之间的同源性在89.7%~94.8%之间,12条NS5B基因序列的同源性在82.2%~100.0%之间。本试验首次证实国内猪群中存在新型仔猪先天性震颤病及其病原（APPV）。     

一起猪非典型瘟病毒感染的诊断

2017年8月四川省某规模化猪场出现临产母猪产弱子、发抖、死胎,且死胎率达30%,哺乳仔猪成活率明显降低,其中以全身性或局部性阵发痉挛为典型症状。用RT-PCR扩增及序列分析确诊该猪场感染了一种新型的猪非典型瘟病毒(APPV)。这是四川省首次检测到并报道APPV,可为该病的研究和防控提供了一定的参考。     

猪非典型瘟病毒研究进展

由非典型瘟病毒引起的仔猪先天性震颤在猪场发病率日益升高,本文对非典型瘟病毒的流行情况、临床症状、病理变化、诊断方法和防控措施进行简要阐述。     

瘟病毒研究的最新进展(综述)

<正> 病毒与细胞的相互作用所有瘟病毒都具有一个相似的宿主范围。HCV 可传染牛和小反刍兽;BVDV 在自然情况下会感染猪,绵羊、山羊和多种野生反刍兽。能培养瘟病毒的细胞种类比上述的还要广泛。然而,尽管它们能越过宿主的种的障碍,但瘟病毒在异种宿主中通常是不能充分复制的。在多数情况下,它们既不引起细胞的 CPE,也不引起临床发病。BVDV     

基于E^rns蛋白的猪非典型瘟病毒间接ELISA检测方法的建立

猪非典型瘟病毒(APPV)是新近发现的仔猪先天震颤的病原体,其血清学检测方法亟待建立.E^rns蛋白是APPV诱导机体产生中和抗体的重要保守性抗原,是血清学检测的特异性靶标之一.本研究制备了猪非典型瘟病毒原核表达的Erns蛋白,以其作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法.结果表明,最佳抗原包被浓度为8μg/mL,最佳血清稀释度为1:10,阴阳性临界值D450=0.318,灵敏度达到1:64,特异性好,与猪瘟、猪伪狂犬、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪流感及圆环病毒病的阳性血清均不发生交叉反应.该检测方法重复性好,批内变异系数最大值为7.84%,批间变异系数最大值为8.57%.利用建立的间接ELISA方法对50份猪临床血清样本进行了检测,其阳性率为10%.基于Erns蛋白间接ELISA检测方法的建立为APPV的流行病学调查和临床诊断提供了有效的工具.     

非典型猪瘟病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒(atypical porcine pestivirus virus,APPV)全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模板优化反应条件,建立了检测APPV的特异性荧光定量PCR方法。结果显示,建立的荧光定量PCR方法C_t值与标准品在1.49×10~1～1.49×10¹⁰ copies/μL呈现良好的线性关系,相关系数为R^20.999,斜率为-3.442,扩增效率为95.207%。该方法与PCV2、PRV、PRRSV、PPV及CSFV基因组均无交叉反应,敏感性比常规PCR高出1 000倍,组内和组间重复试验变异系数均小于2%。对临床采集的20份疑似感染APPV的样品进行检测,结果显示应用所建立的荧光定量PCR成功检测到3份APPV阳性样品,而常规PCR仅检测到1份,表明所建立的荧光定量PCR比常规PCR灵敏度更高。本试验所建立的APPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对APPV早期诊断及感染进行定量分析检测。     

猪隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

隐孢子虫病是一种全球性的人兽共患病 ,猪隐孢子虫病世界各地均有报道 ,严重威胁着人类和动物的健康。本文对猪隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和生活史、流行病学特点、诊断、防治等方面目前研究状况进行了综述 ,为猪隐孢子虫病的有效防制提供参考     

Distribution and persistence of atypical porcine pestivirus in experimentally inoculated pigs

Atypical porcine pestivirus (APPV) is a cause of congenital tremors (CTs) in piglets and has been found in swine populations around the globe. Although systemic distribution of the virus has been reported, there is limited information regarding viral localization at the cellular level and distribution at the tissue level. We collected multiple tissues from 2-d-old piglets (n = 36) born to sows inoculated at 45 or 62 d of gestation with APPV via 3 simultaneous routes: intravenous, intranasal, and directly in amniotic vesicles. In addition, 2 boars from APPV-inoculated sows with CT were raised and euthanized when 11 mo old. In situ hybridization performed on tissue samples from piglets demonstrated a broad and systemic distribution of viral RNA including endothelial cells, fibroblasts, and smooth muscle. Labeling in tissues was more pronounced in piglet tissues compared to boars, with the notable exception of diffuse labeling of the cerebellum in boars. Presence of APPV in boar tissues well after resolution of clinical signs suggests persistence of APPV similar to other pestiviruses.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒侵入细胞过程研究进展

作为动脉炎病毒科成员之一的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）,是一种严重危害世界养猪业的传染病病原。PRRSV如何侵入宿主细胞是病毒学的一个基本但却一直悬而未决的问题,明确该过程对优化设计PRRSV疫苗有重要指导意义。本文拟就PRRSV入侵细胞过程的国内外研究进展作一概述,重点展示细胞受体和病毒结合蛋白的研究动态。     

可食疫苗研究进展

对动物免疫成功与否，要看能否将易感群体减少到传染病可流行的阈值以下，因此免疫接种的广泛性是控制人盲疫病流行的重要因素之一。尽管医药科学已有飞速发展，但是由于疫苗的生产、配送等方面的限制，全球推广免疫接种仍然面临着巨大的困难。开发使用方便、廉价、高效疫苗，对控制全球各种疾病的爆发和流行有着深远的意义。目前，广泛研究的可食疫苗（Edible Vaccine）为解决这一难题提供了新的思路和方法。可食疫苗不仅有使用方便、安全的优点，而且一旦在转基因植物、动物或微生物中研究推广，可以立即为落后贫困地区人畜疫病防疫提供廉价可行的可食疫苗。本文主要综述目前广泛研究的几种可食疫苗的研究进展，主要包括：转基因植物可食疫苗、沙门氏菌携带的重组和DNA核酸可食疫苗、其他微生物携带或重组的可食疫苗，以及转基因动物生产的可食疫苗。