多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数参考品的研究

为了研制多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数的参考品,以期更科学的评价活菌计数结果的有效性。制备一批猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗为参考品候选物,对其性状、纯粹、真空度、剩余水分进行检测,对其运输稳定性、均一性进行测定,组织协作标定对参考品候选物进行定值,用协作标定的方法统计参考品候选物24个月的保存期,将参考品应用于多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数的检验。结果表明,参考品的性状、纯粹检验、剩余水分和真空度测定均符合《中国兽药典》的规定,均一性试验结果显示,10瓶参考品候选物计数结果的变异系数为5.4%,小于10%,说明其均一性良好。协作标定的赋值范围为(4.2～5.6)×10~8CFU/头份,保存期试验结果显示,参考品候选物在-70℃以下保存24个月菌数稳定。参考品的初步应用显示本参考品不仅可以为多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数提供参照物,而且可以用于控制多杀性巴氏杆菌类疫苗检验用马丁琼脂培养基的质量。     

沙门氏菌类活疫苗活菌计数参考疫苗的研究

为研制沙门氏菌类活疫苗活菌计数的参考疫苗,以期更科学地评价活菌计数结果的有效性,研究制备了一批仔猪副伤寒活疫苗作为参考疫苗候选物,对其性状、纯粹检验、真空度、剩余水分进行检测,对其运输稳定性、均一性进行测定,组织协作标定对参考疫苗候选物进行赋值,用协作标定的方法统计参考疫苗候选物在18个月的保存期,将参考疫苗初步应用于仔猪副伤寒活疫苗活菌计数的检验。结果表明,参考疫苗的性状、纯粹检验、剩余水分和真空度测定均符合《中国兽药典》的规定,均一性试验结果显示10瓶参考疫苗候选物计数结果的变异系数小于10%,说明其均一性良好。协作标定统计出参考疫苗候选物的赋值范围为(3.0,4.0)×109CFU/头份,保存期试验结果显示参考疫苗候选物在-70℃以下保存18个月菌数稳定。参考疫苗的初步应用显示本参考疫苗不仅可以为沙门氏菌类活疫苗活菌计数提供参照物,而且还可用于控制普通琼脂培养基的质量。     

猪丹毒疫苗效力检验攻毒冻干培养物的制备与应用研究

为提高猪丹毒疫苗效力检验结果的稳定性、一致性及工作效率,冻干制备了效力检验攻毒用猪丹毒丝菌培养物,对性状、纯粹、真空度、剩余水分、活菌计数、均一性等进行检测,测定在不同温度下短期存放的活菌数,监测在低温下长期保存的活菌数和毒力,并将其应用于猪丹毒活疫苗和灭活疫苗的效力检验。结果显示,该攻毒培养物性状良好,纯粹生长,真空度合格率98.2%,剩余水分小于3.5%,活菌数均值为3.8×10~9 CFU/瓶,瓶间活菌数变异系数(C.V)为10.0%,37℃以下温度存放2.5～3.0 h活菌数稳定,变异系数(C.V)为4.9%,-20℃保存36个月活菌数为3.0×10~9 CFU/瓶,每只小鼠注射6 CFU活菌5/5死亡,应用于猪丹毒灭活疫苗和活疫苗效力检验结果与常规方法一致。结果表明,该猪丹毒丝菌冻干培养物状态良好,活菌数和毒力较为稳定,能够满足猪丹毒疫苗效力检验攻毒使用,且提高了检验结果的一致性、稳定性及工作效率。     

仔猪副伤寒活菌计数参考疫苗保存期试验

为了解仔猪副伤寒活菌计数参考疫苗候选物在18个月内的稳定性,对其活菌数用协作标定的方法进行统计,结果表明,仔猪副伤寒参考疫苗候选物在2℃～10℃冷藏条件下运输48 h,活菌数无明显下降,说明运输稳定性良好,随机抽取10瓶参考疫苗候选物进行均一性检验,菌数的变异系数小于10%,说明参考疫苗的均一性良好,协作标定统计的活菌数中位数为3.5×10~9CFU/头份。参考疫苗候选物在18个月的保存期内菌数中位数为3.4～3.75×10~9CFU/头份,未随保存时间的延长而下降,证明在18个月保存期内稳定性良好。本研究为仔猪副伤寒活菌计数参考疫苗的研究提供依据。     

鸡毒支原体灭活疫苗效力检验气囊注射攻毒方法的研究

鸡毒支原体灭活疫苗效力检验采用的喷雾攻毒方法所需菌液量大,结果易受喷雾时间和器械设备影响。为了探索一种简便、易行且结果稳定的新方法,本研究冻干了一批攻毒用菌株鸡毒支原体R株,对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、培养特性、特异性、活菌计数和均一性等进行检定,结果全部符合规定。将其稀释成不同活菌数,采用气囊注射方式攻毒,观察试验结果并与《中国兽药典(三部)》中的喷雾方法进行比较。结果表明,建立的气囊注射攻毒法稳定、准确,通过5批次疫苗效力检验试验比较,与喷雾方法结果无显著差异,可为该类疫苗攻毒方法优化提供新思路。     

禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制

按照国家一级标准物质求,研制了一批禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原国家参考品,批号为200901。对其物理性状、无菌、效价、特异性、水分、真空度、均一性、稳定性等进行了测定,各项指标均符合求。经过8家单位对其协作标定,并经统计学分析,该批抗原血凝效价为1：（460±80）,最终定值为1：400。该禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原可以作为国家参考品。     

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制

按照国家一级标准物质要求和禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程规定的抗原制备方法,研制了一批禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原国家参考品,用于检测禽流感病毒（H5亚型）制品生物效价和血凝抑制操作过程中的校验。该批抗原经过8家单位对其协作标定后对结果进行统计学分析,确定该批禽流感抗原的血凝效价为1：80。另对所研制的禽流感抗原均一性、稳定性、无菌检验、剩余水分测定、真空度测定等各项指标进行检测,结果均符合禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程和国家一级标准物质要求。说明该禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原可以作为国家参考品。     

猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)保存条件的研究

为研究猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)在-15℃和2～8℃保存的稳定性,本试验选择了 6批试制疫苗以12个月有效期为基础,延长保存至21个月(即有效期后9个月)后按照质量标准进行性状观测、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、病毒含量测定、安全检验、效力检验、剩余水分测定、真空度测定.检测结果显示:6批猪伪狂犬...     

猪丹毒丝菌生产用菌种CVCC43005株最高扩繁代次的确定及疫苗佐剂的筛选

为研究猪丹毒丝菌CVCC43005株作为生产用菌种的最高扩繁代次以及新型佐剂对该菌种免疫原性的影响,在对猪丹毒丝菌CVCC43005株形态、生化特性、培养特性、纯粹性、血清学特性、真空度、剩余水分含量、毒力及免疫原性等研究的基础上,建立了猪丹毒丝菌CVCC43005株种子批。将CVCC43005株(1986年冻干)用培养基进行了20次传代(F1~F20),并对其中的F5、F10、F15、F20代进行冻干并抽检测定。结果显示:抽检的各代次菌种均纯粹,形态、生化特性、培养特性均符合猪丹毒丝菌的特性,血清型为2型,真空度检查均呈现白色、粉色或紫色辉光,剩余水分含量均<3.0%,9~10CFU活菌皮下注射体重18~22g小白鼠,均于7日内5/5死亡。将抽检的各代次菌种制成铝胶佐剂灭活疫苗,免疫16~18g小白鼠后均能产生10/10保护。以F5代菌株制备菌液,甲醛灭活后,分别用铝胶佐剂、矿物质白油佐剂、洛阳赛威公司的水溶性佐剂、水性复合免疫佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETMIMS1313VGNST、GEL01PR6种佐剂制备灭活疫苗,经无菌及安全检查合格后进行16~18g小白鼠免疫效果对比实验,最终确定猪丹毒丝菌CVCC43005株基础种子代数为F1~F10代,生产用菌种的最高扩繁代次宜控制在5代以内,法国赛比克公司的GEL01PR佐剂为猪丹毒灭活疫苗的最佳佐剂。该菌种作为生产用菌种最高扩繁代次的确定及疫苗佐剂的筛选,为修订菌种检定依据奠定了基础。     

兔体中和试验用猪瘟病毒阴、阳性血清国家参考品的研制

为制备和标定兔体中和试验用猪瘟病毒阴、阳性血清国家参考品,本试验制备了猪瘟病毒阴性、弱阳性和强阳性血清,通过过滤、分装、冻干、熔封,获得3亚批候选物,并进行了检验、协作标定和定值。结果显示：物理性状、无菌检验、安全检验、支原体检验、真空度测定、均匀性检验和保存有效期试验均合格;剩余水分均小于4％;特异性检验结果均为口蹄疫、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病、牛病毒性腹泻／粘膜病抗体阴性,并且弱阳性和强阳性血清能中和猪瘟兔化弱毒而阴性血清不能中和;残余猪瘟病毒免疫荧光和套式RT—PCR核酸检测结果均为阴性;经协作标定定值,其兔体中和效价分别为：阴性、1：100.928±0.103、1：102.928±0.103,表明该候选物可以作为国家参考品。     

家禽的免疫接种②

六、疫苗的质量评价疫苗质量的优劣包括多方面内容:安全性、免疫保护率、免疫有效期、稳定性、SPF、纯粹度、物理性状、含菌量(含毒量)、稀释剂、保护剂、佐剂、冻干苗的真空度及剩余水分,还有包装是否美观,使用是否方便等,疫苗制造厂均需全面考虑。但是,疫苗的质量除了与制造厂有关之外,贮存、运输及使用过程是否妥当也关系极大。以下是贮存、运输及使用过程中影响疫苗质量的一些因素:1.保存条件:不同类型的疫苗要求的保存条件是不一样的。只有按规定的条件保     

马丁琼脂培养基质量控制标准研究

为建立马丁琼脂培养基质量控制标准,系统评价马丁琼脂培养基适应性和促生长能力,运用多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌和链球菌类活疫苗活菌计数参考品,通过活菌计数统计分析,对新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂或改良马丁琼脂进行适应性和促生长能力系统测试。结果显示：新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂和改良马丁琼脂均对多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌、链球菌的适应性和促生长能力差异显著,需同时选择巴氏杆菌类、丹毒杆菌类、链球菌类活疫苗计数参考品评价马丁琼脂培养基的适应性和促生长能力,表明活菌计数参考品用于建立马丁琼脂质量控制标准是可行的。     

猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌选择性显色培养基的研发和应用

为研制便于检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原含量的选择性显色计数琼脂(以下简称猪三联显色培养基)以代替传统的马丁琼脂,对比研究了干粉马丁琼脂、新鲜马丁琼脂和猪三联显色培养基的理化特性和生长特性,并通过活菌计数方法平行对比了猪丹毒单价苗、猪肺疫单价苗和猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗的抗原含量.结果显示,猪三联显色培养基在活菌...     

猪丹毒QL251弱毒株安全性及免疫原性试验

猪丹毒ＱＬ２５１弱毒株是我所保存的猪丹毒强毒菌种Ｃ４３００９的变异株，对其进行了毒力和免疫原性的测定，该菌株毒力原来是３－５个活菌可致死小白鼠，现在对小白鼠皮下注射７．４×１０~８活菌，小白鼠全部健活，对敏感猪皮下注射９．４×１０~（１０）活菌均健活且无任何反应；小白鼠免疫９－１２个活菌７２％保护，对猪免疫２９０－５９０×１０~４活菌１００％保护。     

猪丹毒杆菌C43005株的制备及检定

为研究猪丹毒杆菌C43005株的菌种特性,制备了一批猪丹毒杆菌C43005株并对菌种的真空度、剩余水分、形态、培养特性、生化特性、血清学特性、毒力、免疫原性等参数进行检定,重点对该菌种的毒力进行重复试验并对影响毒力的因素进行分析。结果表明,菌种的真空度、剩余水分、形态、培养特性、生化特性、血清学特性、免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版相关质量标准的规定,毒力试验结果明显受培养基质量和动物个体差异的影响。本研究可以为猪丹毒杆菌C43005株的制备和检定提供参考依据。     

猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验阳性血清制备

为制备猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验阳性血清,本实验将4头非免疫健康猪进行猪瘟活疫苗基础免疫和猪瘟石门强毒株反复强化免疫后,采血分离血清,过滤、分装、冻干、熔封,获得4批产品,并进行了检验和验证。结果显示:物理性状、无菌检验、安全检验、均一性检验、支原体检验、真空度测定均合格;剩余水分均小于4%;特异性检验表明,口蹄疫病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒抗体均为阴性;残余猪瘟病毒免疫荧光和套式RT-PCR核酸检测结果均为阴性;兔体中和效价分别为1∶800、1∶800、1∶800和1∶1 600;对猪瘟兔化弱毒种毒和5种猪瘟活疫苗的验证结果均良好。该4批血清可以用于猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验。     

猪轮状病毒阳性血清(G5型)制备及初步鉴定

采用常见猪病毒抗体阴性仔猪制备了猪轮状病毒G5型阳性血清,经冻干鉴定,其性状、无菌检验、特异性检验、剩余水分测定、真空度测定结果均符合要求,效价高达1∶11482,为我国猪轮状病毒活疫苗或其联苗成分的外源病毒检验、鉴别检验提供阳性血清,以满足疫苗检验需求。     

鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品的研制

为制备标定HI试验用的鸡新城疫阳性血清国家标准品,以鸡新城疫La Sota株病毒和灭活疫苗免疫SPF鸡制备鸡新城疫高免血清。将检验合格的鸡新城疫阳性血清以鸡阴性血清稀释为HI效价与国际标准血清完全一致后,用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测和稳定性试验,检测结果均符合要求。以国际标准品为参比,测定了该标准品的HI效价为1∶60与协作标定结果基本一致。该标准品以国际标准品溯源的国际单位含量为320 IU/mL,为鸡新城疫的相关研究提供了物质基础。     

羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株的制备与鉴定

为研究羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株的菌种特性,制备了新的菌种批并对其形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性等进行鉴定,对其适宜培养基进行了筛选.试验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民...     

猪霍乱沙门氏菌C79102株的制备与检定

为研究猪霍乱沙门氏菌C79102株的菌种特性,制备了一批猪霍乱沙门氏菌C79102株,并对菌种的真空度、纯粹、剩余水分、培养特性、形态及生化特性、血清学特性、特异性、毒力等进行检定,重点对菌种的毒力进行研究。试验结果表明,该冻干菌种的真空度、纯粹、剩余水分、培养特性、形态及生化特性、血清学特性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定,特异性检验结果显示C79102在含1%醋酸铊的普通肉汤中不生长,毒力试验结果显示,不同制备方法获得的肉肝胃消化汤培养的菌液毒力差异明显。本研究可以为猪霍乱沙门氏菌的制备和检定提供参考依据。