一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析

裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。     

1株可裂解肠道内和肠道外大肠杆菌的宽宿主谱噬菌体的分离与特性分析

本试验从猪粪中分离得1株大肠杆菌的烈性噬菌体ФNJ14。用实验室保存的大肠杆菌对其裂解谱进行检测,发现ФNJ14能裂解27株大肠杆菌,是一株对肠道内和肠道外大肠杆菌均有效的宽宿主谱的噬菌体。电镜观察结果表明,ФNJ14头部呈狭长的六面体,有一个可伸缩的尾部,属于肌尾噬菌体科成员。ФNJ14的生物学特性鉴定结果显示,其效价为1.28×1010PFU/m L,最佳感染复数(MOI)为100;对60℃以下的温度具有较好的耐受力,在70℃培养20min后活力显著下降;ФNJ14对碱的耐受力较强,在p H4~11之间都能保持较高的活力;一步生长曲线检测结果显示,ФNJ14潜伏期为20 min,复制周期为140 min。提示噬菌体ФNJ14对致病性大肠杆菌具有一定的防控潜力。     

猪肠道大肠杆菌噬菌体对产肠毒素大肠杆菌的抑菌作用

此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体,发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌（ETEC）,本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力,以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌（其中包括5株ETEC）,采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱,利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力,并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC,但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体,但在感染复数（MOI）为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体,其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体,虽然无法感染ETEC,但仍可裂解ETEC,其中,7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。     

噬菌体治疗的另一种策略——转基因噬菌体

许多研究已论证噬菌体作抗菌剂使用的可行性,并有一些噬菌体制剂已获批,可用作抗菌性饲料添加剂。但直接采用分离自环境中的天然烈性噬菌体防控细菌感染,面临诸多问题和发展障碍。基因工程和合成生物学技术的发展为解决这些问题提供了新的思路,本文综述了近年来转基因噬菌体治疗相关研究进展。     

鸡大肠杆菌宽谱噬菌体的分离及裂解性研究

为了解鸡宽谱大肠杆菌噬菌体的裂解特性,本试验以30株大肠杆菌为宿主菌,从8份粪便中成功分离出5个噬菌体,并从中筛选出1个强裂解性宽谱大肠杆菌噬菌体,命名为Z-SN5,宽噬率为70%,热稳定性相对良好,60℃作用1 h,尚有活性;耐碱性强于耐酸性,在pH值=7时活性最高,经PCR鉴定后,成功扩增出目的基因片段。本试验为今后研究噬菌体治疗鸡大肠杆菌病奠定基础。     

致病性鸡大肠杆菌噬菌体的分离

培养菌种A、B、C、Se制成悬液后与污水样品a、b、c共同培养。增殖后将混合培养液离心。制备裂解液,取上清液过滤除菌后,得到较纯噬菌体样品。通过单层平板法鉴定是否有噬菌体的存在。用双层平板法纯化噬菌体,制成噬菌体制剂。     

噬菌体对鸡肠炎沙门氏菌的防治研究

肠炎沙门氏菌是全球食源性疾病暴发的主要病原菌之一,可引起禽类发病死亡,造成巨大的经济损失.噬菌体是一种细菌病毒,具有严格的宿主特异性.在耐药菌日益增长、抗生素使用受限的情况下,可考虑将噬菌体作为消除病原体的替抗药物.因此,文章就噬菌体对肠炎沙门氏菌的防控及其应用前景展开综述,同时为其他耐药菌的治疗防控提供新的策略.     

高效裂解性宽谱大肠杆菌噬菌体筛选方法探究

本试验以11株兔源致病性大肠杆菌为宿主菌,利用滴定法和双层平板法从莱芜和青岛规模化兔场污水中分离到2株噬菌体v B-Eco M-t E6和v B-Eco M-tE10。通过透射电镜观察,两株噬菌体均属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。噬菌体v B-Eco M-tE6和v B-Eco M-t E10的效价为5.42×10⁸ PFU/mL和8.26×10⁹ PFU/m L,能够裂解5种以上的兔致病性大肠杆菌,裂解性强、效价高、裂解谱广泛,具有较高的开发和利用价值。     

一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体,对抗多重耐药细菌,试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体,采用双层琼脂平板法纯化、增殖,超速离心法浓缩,利用透射电镜观察噬菌体形态,通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型,同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明：从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体,命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科;核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌,还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌;最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6～11时相对稳定,70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体,宿主谱相对较宽,具有潜在的应用价值。     

新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检测方法的建立

本研究用大肠杆菌标准噬菌体株选择确定的大肠杆菌C-3000作为宿主菌,采用增殖法和噬斑法与双层琼脂平板法,对多个厂家的新生牛血清进行了大肠杆菌噬菌体检测,建立了兽用生物制品细胞培养用新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。     

贵州猪、牛志贺样毒素大肠杆菌的检出与鉴定

以两对全盛的寡核苷酸引物,通过聚合酶链式反应,检测158份猪和牛腹泻粪便分离物,从8份猪源和3份牛源分离物中扩增出大肠杆菌志贺样毒素基因片段,其生化试验符合大肠杆菌特征,经Vero细胞检测均产生志贺样毒素,血清学试验证实分属不同的血清型,与志贺样毒素大肠杆菌血清型范围相符。     

大肠杆菌耐四环素基因的检测

近年来,兽医临床分离的大肠杆菌对许多抗菌素呈耐药性,尤其是对四环素的耐药率为最高。本研究从分子生物学角度探讨了大肠杆菌的耐药性,从耐四环素基因的上下游分别设计了一对引物,两引物间包含耐四环素基因的部分片段,采用多聚酶链式反应,结果扩增出了特异片段（520bp）。该实验从基因水平来确证细菌的耐药性,比药敏试验更精确、更实用。     

鸡源大肠埃希菌抗“O”血清型鉴定及药敏试验研究

大肠埃希菌耐药性的增加及大肠埃希菌血清型众多,加大了药物防治大肠杆菌引发病症的难度。为了减少耐药菌株的产生及养殖者的经济损失,笔者对2011年4月～2012年7月门诊分离的鸡源大肠埃希菌进行抗"O"血清型鉴定及药敏试验,并与2005年11月～2007年4月门诊病死鸡疑似大肠埃希氏菌病例的相关统计数据进行了对比。     

柔嫩艾美耳球虫BJ株SO7基因在大肠杆菌中的表达

采用RT－PCR方法,以Eimeria tenella BJ株7h孢子化卵囊的总RNA为模板,扩增并克隆了SO7基因。然后把SO7基因分别与pGEX-KG,Pet-28b( )和pThioHisB质粒载本连接,构建成了三个表达载体：即pGKG SO7、pET SO7和pThioHis SO7。把构建好的三种表达载体分别转入大肠杆菌Dh5α,经IPTG诱导表达后,用SDS－PAGE检测表达产物。结果表明,含pThioHis SO7质粒的工种菌具有明显的表达产物：一种融合蛋白,其分子量大约为40kDa,与推测的融合蛋白的分子量相吻合。表达效率为17.1%。另二种表达载体（pET SO7和pGKGSo7)可能因表达效率低而未被SDS－PAGE检测出表达产物。     

大肠杆菌和肺炎克雷伯氏杆菌表面抗原的研究

采用热抽提和ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理种方法提取大肠杆菌ＥＬ０－１株和肺炎克雷伯氏杆菌ＥＬ－２株表面抗原,经胃蛋白酶处理,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析表明,ＥＬ－１,ＥＬ－２株主要表面抗原耐热,对胃蛋白酶不敏感,分子量分别是２０ＫＤ,３３ＫＤ和３６ＫＤ,４３ＫＤ,其抗原成分是多糖或多糖－磷脂和蛋白质的复合物。     

氧氟沙星对霉形体与大肠杆菌合并感染鸡的药效学研究

以试管两倍稀释法测得氧氟沙星及其对照药物恩诺沙星、洛美沙星和强力霉素对鸡败血霉形体的最小抑菌浓度分别为０．００６２５、０．０２５、０．４和０．４ｍｇ／Ｌ。５０、１００、２００ｍｇ／Ｌ氧氟沙星、５０ｍｇ／Ｌ恩诺沙星、５０ｍｇ／Ｌ洛美沙星和１００ｍｇ／Ｌ强力霉素连续５ｄ饮水给药,对人工合并感染败血霉形体和大肠杆菌病鸡的治愈率分别是９３．３％、９６．７％、９６．７％、１００％、９６．７％和８３．３％,感     

复方抗应激制剂对仔猪下痢的影响

以新生仔猪为实验动物,探讨复方抗应激制剂对哺乳仔猪大肠杆菌免疫状况及对大肠杆菌易感性的影响。结果,疫苗＋抗应激制剂组的发病率为8．33％,低于抗应激制剂组（25．00％、P＜0．05）、疫苗组（41．67％,P＜0．05）和空白对照组（66．7％,P＜0．01）;疫苗＋抗应激制剂组平均净增重为228．60g/d,显著高于疫苗组（187．14g/d,P＞0．05）。并经致病性试验及仔猪回归试验的验证,表明该应激制剂能明显改善哺乳仔猪对大肠杆菌的免疫状况,增强仔猪的免疫力,降低哺乳仔猪对致病性大肠杆菌的易感性。     

氧氟沙星在健康和霉形体与大肠杆菌感染鸡的药动学研究

本文报道氧氟沙星在健康和霉形体与大肠杆菌合并感染鸡体内的药动学研究,健康鸡单剂量内服氧氟沙星（１０ｍｇ／ｋｇ）其药－时数据符合一级吸收一室开放模型,主要动力学参数如下：ｔ１／２α为０．４７±０．２３ｈ,ｔ１／２β为５．９２±１．３４ｈ,ｔｍａｘ为１．８９±０．５２ｈ,Ｃｍａｘ为５．７９±１．０９μｇ／ｍＬ,ＡＵＣ为６０．９２±１７．００ｍｇ／Ｌ,ｈ,Ｔｃｐ（ｔｈｅｒ）为５９．０６±１４．２８ｈＦ,     

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

鸭致病性大肠杆菌病是危害养鸭业的最为重要的细菌性传染病之一。本研究分离鉴定了65株鸭致病性大肠杆菌,并对其O血清型、耐药谱以及毒力相关基因进行了检测。结果表明：大肠杆菌O78,O2和O1为主要流行血清型,各占分离株的75％、11％和5％。对15种常规抗菌素或药物的药敏试验结果表明：100％的分离株对利福平和红霉素耐药;94％以上的分离株对头孢噻吩等10种抗菌素或药物耐受;70％以上的分离株对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素和头孢噻肟敏感。对14种可能的大肠杆菌毒力相关基因的检测结果表明：ompA、pfs和luxS三种基因高度保守,在分离菌株中的检出率为100％;iss、iuCD、tsh、fimC、cvaC和iroC基因的检出率达到72％以上,为重要的鸭致病性大肠杆菌毒力相关基因。     

对FC株猪源性肠毒素型大肠杆菌致病因子的研究

FC菌株是一株从腹泻仔猪粪便中分离的肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)。在MRHA反应中,本菌能凝集人O型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,对人O型和豚鼠红细胞有很高的血凝性,血抗K88和K99血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血凝。在体外小肠上皮细胞吸附试验中,本菌对仔猪小肠上皮细胞具有强烈的吸附作用;透射电镜和扫描电镜观察证实了FC株菌除表面具有一种纤毛样结构外,还能定居在仔猪小肠段。血清学试验结果表明,本菌的O抗原属于O101。K88和987P两种抗血清均不能凝集本菌,而K99和F41抗血清均可凝集。对纯化的FC株菌粘着素抗原作等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果表明,该菌的粘着素是由等电点分别为4.61和9.78,分子量分别为29500和17500的两种蛋白质抗原所组成。此外,用乳鼠胃内投服试验和兔肠结扎试验证明,该菌只产生热稳定肠毒素。总之,本菌是一株能产生ST的K99,F41的肠毒素型大肠杆菌。