Ghrelin对鸡等级前卵泡发育的影响

旨在研究Ghrelin对产蛋鸡等级前卵泡发育的调节作用.通过RT-PCR方法检测卵泡Ghrelin受体(GH-SR)的表达情况,采用组织学和免疫组化方法探讨Ghrelin和促卵泡素(FSH)单独或联合处理对鸡等级前卵泡形态学的变化以及层粘连蛋白(LN)和缝隙连接蛋白43(Cx43)的标记率.结果表明,GHSR在颗粒层和膜层上均有表达,其表达量随着卵泡的发育分别至大白卵泡(LWF)和小黄卵泡(SYF)达到最高,随后逐渐降低.悬浮培养的卵泡经Ghrelin和FSH处理24 h后,LWF和SYF的颗粒层和膜层厚度及颗粒细胞密度均显著增加(P＜0.05).同时,颗粒细胞中LN和Cx43的标记率显著提高(P＜0.05),且以Ghrelin与FSH联合处理组最为显著.结果提示,Ghrelin可通过提高LN和Cx43的表达以增强颗粒细胞的连接功能,促进鸡等级前卵泡颗粒细胞的增殖,并可协同FSH调节卵泡的发育.     

促卵泡素对鸡等级前卵泡细胞发育的影响

实验研究了鸡等级前卵泡颗粒细胞和膜细胞的发育及促卵泡素(FSH)对其增殖的调控作用。形态学观察显示小白卵泡只有1层颗粒细胞,大白卵泡出现2层颗粒细胞,而小黄卵泡和大黄卵泡中则有多层颗粒细胞。结果表明:卵泡颗粒细胞和膜细胞的密度和细胞层厚度随着卵泡发育的等级而增加。卵泡体外悬浮培养表明,FSH显著刺激小黄卵泡和大黄卵泡中颗粒细胞的增殖,但对膜细胞无显著促增殖作用。由此推测,FSH通过刺激颗粒细胞的增殖促使等级前卵泡进入等级发育。     

鸡RAC1基因真核表达载体的构建及其在颗粒细胞中的表达验证

为构建鸡RAC1基因真核表达载体并观察该载体是否在鸡卵泡颗粒细胞中表达,试验采用PAS方法合成RAC1基因,先将其克隆至pUC57-simple载体中,然后再亚克隆至表达载体pYr-adshuttle-4上,将重组载体瞬时转染至鸡卵泡颗粒细胞中,通过荧光定量PCR和Western Blot进行验证。结果表明,RAC1基因正确地插入到了载体pYr-adshuttle-4的多克隆位点,且重组载体转染成功。试验成功构建了鸡源pYr-adshuttle-4-RAC1真核表达载体,并成功将其转入到鸡卵泡颗粒细胞中。该载体的构建为进一步研究RAC1的生物学功能提供了重要工具。     

CDKN1A、CDKN1B基因在蛋鸡等级前卵泡组织中的时空表达模式研究

为了探讨CDKN1A、CDKN1B在蛋鸡卵泡中的表达规律和模式,采用半定量RT-PCR和免疫组织化学的方法分别检测CDKN1A、CDKN1B mRNA及其蛋白在蛋鸡卵泡中的表达模式分析。结果表明:CDKN1A、CDKN1B基因在等级前卵泡中mRNA整体表达水平显著高于等级卵泡表达水平。CDKN1A、CDKN1B蛋白主要在等级前卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中表达。研究结果揭示了CDKN1A和CDKN1B基因有可能参与蛋鸡卵泡的发育调控过程。     

SMS、SRM和SMOX基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表达

为研究精胺、亚精胺和腐胺对鹅等级前卵泡发育的作用,通过荧光定量PCR对其合成代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM),精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表达情况进行检测分析。结果发现:SMS,SRM和SMOX基因mRNA在鹅等级前卵泡中均有表达,通过差异分析发现SMS基因mRNA在PE等级卵泡中的表达量最高,且表达量显著高于其他4个等级卵泡(P0.05);而在SY,L,M和S这4个等级卵泡中表达量差异不显著(P0.05)。SRM基因mRNA在PE和L等级卵泡中的表达量较高,差异不显著(P0.05),但显著高于其他3个等级卵泡(P0.05);而在SY,M和S等级卵泡中SRM基因mRNA的表达量差异不显著(P0.05)。SMOX基因mRNA在5个等级卵泡中表达差异显著(P0.05)。     

氯前列烯醇对鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的促进作用

探讨了前列腺素PGF2α类似物氯前列烯醇（Cloprostenol,CLO）对鸡等级前小黄卵泡颗粒细胞增殖的作用及其信号转导途径。颗粒细胞经16 h预培养后用CLO处理24 h,测定细胞的增殖情况。结果显示：0.1～10μg/L的CLO促进了颗粒细胞的增殖,10μg/L时刺激效果最为明显。蛋白激酶A（PKA）激活后颗粒细胞数量增加,PKA抑制剂H89抑制了CLO的促增殖作用。PKC的激活或抑制对CLO的促增殖作用无显著影响。这表明,CLO可通过PKA途径促进鸡等级前小黄卵泡颗粒细胞的增殖。     

鹅等级前卵泡中TGF-βⅠ和TGF-βRⅡ基因mRNA的表达分析

为了探究两种可能引起卵泡闭锁的基因转化生长因子βⅠ(TGF-βⅠ)、转化生长因子受体βⅡ(TGF-βRⅡ)在鹅等级前卵泡内是否表达,试验选择处于产蛋高分期的籽鹅,采集其等级前卵泡并提取总RNA,采用荧光定量PCR的方法计算目的基因在等级前卵泡中的相对表达量。结果表明:目的基因在鹅的各个等级前卵泡中均有表达,且在M等级卵泡中表达量相对最高,在pe等级卵泡中表达量相对最低。提示TGF-βⅠ、TGF-βRⅡ对鹅的卵泡闭锁现象可能起到一定作用。     

鸡Lats1基因在卵泡不同发育期的半定量表达研究

本实验以150日龄的海兰褐蛋鸡为试验材料,采用半定量RT-PCR方法检测海兰褐蛋鸡不同等级卵泡发育时期Lats1基因的mRNA表达水平,实验结果得出Lats1基因存在于海兰褐蛋鸡卵泡发育各个时期,并呈现一定表达规律,说明Lats1基因参与家禽开产时卵泡发育的调控,有促进细胞生长的作用.本实验为进一步研究Hippo信号通路在鸡卵泡不同发育时期控制细胞增殖时空表达模式打下基础.     

鹅等级前卵泡中FOXO3及细胞凋亡和自噬相关基因mRNA的表达分析

为探明不同产蛋阶段鹅等级前卵泡中FOXO3基因与凋亡和自噬相关基因的mRNA表达情况,采用荧光定量PCR方法检测开产前、产蛋初期和产蛋高峰期鹅等级前卵泡中FOXO3基因及Bcl-2、Bax、Caspase3、Fas、Fasl、LC3、Beclin1等凋亡和自噬相关基因mRNA的表达情况。结果显示:凋亡和自噬相关基因在鹅产蛋周期不同阶段等级前卵泡中均有表达;产蛋高峰期FOXO3、Bcl2、Bax、Caspase3、Fas和Fasl的mRNA表达量随卵泡直径变大呈增加趋势,LC3和Beclin1的表达量随卵泡直径变大呈减少趋势;产蛋初期各基因的表达变化不一致。由此可见,鹅等级前卵泡中FOXO3基因的表达随着卵泡的发育而增加,且其表达变化趋势与凋亡相关基因基本一致,但与自噬相关基因的变化趋势相反,推测FOXO3基因可能与鹅卵泡颗粒细胞的凋亡和自噬有一定关联。     

转录组学分析鹅等级前卵泡中多胺代谢关键酶的差异表达

为了解多胺代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM)、精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)在鹅等级前卵泡中的表达情况,本研究基于高通量测序技术对鹅等级前卵泡进行转录组测序分析,并通过荧光定量PCR对结果进行验证。通过FPKM值计算分析,这3个基因在鹅等级前卵泡中均有表达,且随着卵泡的发育,SRM和SMS的表达呈现先降低后增加再降低的趋势,在初级卵泡中的表达量达到最高值,在中白卵泡中的表达量最低;SMOX的表达则呈现先增加后降低的趋势,初级卵泡中的表达量最低,中白卵泡中的表达量最高。荧光定量PCR结果与转录组测序结果基本相同。结果证实SRM和SMS对卵泡的发育有促进作用,而SMOX可能参与卵泡闭锁过程。     

利用转录组测序分析GRB2和SOS基因在籽鹅等级前卵泡中的mRNA表达

为研究生长因子受体结合蛋白2(Growth factor receptor-bound protein 2,GRB2)和SOS(Son of sevenless)基因组在籽鹅等级前卵泡中的表达情况,本研究采用高通量测序技术对籽鹅等级前卵泡进行转录组测序分析,之后通过荧光定量PCR进行验证。通过FPKM值进行分析,GRB2和SOS在籽鹅等级前卵泡中均有表达。随着卵泡的发育,GRB2在小白卵泡中表达量最低,在初级卵泡中表达量最高;SOS在大白卵泡和中白卵泡中的表达量最低,在初级卵泡中的表达量最高。荧光定量PCR结果与转录组测序结果基本一致。     

牛卵泡颗粒细胞中生长相关基因的表达研究

随着卵巢卵泡的生长,卵泡内雌激素分泌量逐渐上升,雌激素通过其受体(Estrogen Receptors,Esrs)对卵泡的调节作用也在发生改变。该研究通过手术法获取牛卵巢上不同直径的卵泡颗粒细胞,对颗粒细胞中雌激素受体及相关基因表达进行研究。结果表明:Esr1和Esr2都能在牛卵泡颗粒细胞中表达,且随着卵泡的生长而显著下降(P0.05);Fshr的表达随着卵泡的生长而显著上升(P0.05),但在中、大型卵泡颗粒细胞中差异不显著(P0.05);Lhr在大型卵泡颗粒细胞中的表达量极显著高于小、中型卵泡(P0.01);随着卵泡的生长,Cox2在颗粒细胞中的表达显著上升(P0.05),而Hsd17b1的表达则显著下降(P0.05)。综上所述,随着卵泡生长,卵泡颗粒细胞对Esr1、Esr2作用的依赖性逐渐减弱;大卵泡在排卵前Lhr表达量急剧上升,同时诱导Cox2表达量显著上升而Hsd17b1表达量显著下降,表明大卵泡已启动排卵反应。     

鸡胸肌中特异表达的基因-Tx-TnT

鸡的快骨骼肌Ｔｘ－ＴｎＴ基因特异性地在胸肌中表达Ｔｘ－ＴｎＴ异构体，本文对Ｔｘ－ＴｎＴ的结构组成、特异性的及生理功能的研究现状进行了综述，并且讨论了对Ｔｘ－ＴｎＴ基因作进一步研究的必要性。     

鹅卵泡选择过程中差异表达基因的初步探索

采用银染mRNA差异显示技术筛选并克隆鹅卵泡选择过程中差异表达的基因片段,测序后在Genbank中进行Blast检索分析其同源性.共获得5个差异片段(EST,表达序列标签),经Blast同源性分析发现1个与人甲硫氨酸腺苷基转移酶Ⅱβ亚基(MAT Ⅱβ)同源,同源性为95%,另一个与鸡mKIAA0840基因同源,同源性为94%,其余3个与已知基因或序列无任何同源性,可能是尚未发现的新基因.本研究结果显示鹅卵泡选择过程中的基因表达存在差异,筛选出的5个EST的全序列和功能有待于进一步深入研究.     

溧阳鸡促卵泡激素受体基因多态性分析

以溧阳鸡为素材,设计5对特异性引物,采用PCR-SSCP和测序结合的方法,对165只溧阳鸡(母)促卵泡激素受体(FSHR)基因进行多态性检测。结果共检测到2个突变位点,第4外显子(Exon 4)第33位碱基发生T→C突变,第6外显子(Exon 6)之后第12位碱基(即内含子6第12位点碱基)发生G→A突变,其中在Exon 4区域检测到3种基因型:AA、AB和BB,基因型频率分别为0.539、0.400和0.061;在Exon 6区域检测到3种基因型:CC、CD和DD,基因型频率分别为0.248、0.558和0.194。适应性χ2检验表明各片段的基因频率在群体内分布处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。溧阳鸡FSHR基因存在多态性,为进一步研究FSHR基因对溧阳鸡繁殖性能的遗传效应积累了理论资料。     

黄曲霉素B1可改变鸡肝脏基因的表达

密苏里州立大学的科学家们对可食用性黄曲霉素B1（AFB1）在公鸡肝脏基因中的表达调控进行了研究。他们给试验鸡只分别饲喂AFB1含量为0、1和2mg／kg的饲料，持续饲喂21d。结果显示，黄曲霉素B1可降低试验鸡只的采食量、体重、血浆蛋白、血钙和血磷浓度，但以剂量依赖的方式提高肝重。微点阵分析的结果显示，当饲喂2mg／kgAFB1时，可导致试验鸡只与产能、脂肪酸代谢、生长发育、抗氧化、解毒、抗凝以及免疫保护相关基因下调，而与细胞增殖的基因出现上调趋势。研究人员认为，AFB1的浓度为2mg／kg时，可导致鸡的肝脏出现生理反应，同时将改变肝脏基因的表达。     

母鸡卵巢中不同等级卵泡的闭锁研究

在产蛋高峰期,母鸡的卵巢中含有30~100个卵黄色卵泡,直径在1~8mm之间。一般母鸡体内卵泡数量与卵泡直径成反比,例如鸡体内有约20个直径为1~2mm和1个直径为7~8mm的卵泡,直径8mm的卵泡数约为4~7个。本研究通过苏丹黑B染色法发现:鸡卵泡生长至3~5mm大约需要3d,再生长至5~8mm大约需要2d,生长至8mm到排卵需要6d。由于染料无法进入较小的卵泡,因此本试验没有检测到1~3mm之间的数据。研究也发现鸡体内含有5~25个闭锁卵黄色卵泡,这对于高产鸡是正常现象,但在整个试验中,只观察到一个闭锁的大卵黄色卵泡。因此本试验以这两种闭锁水平来定义不同卵泡的大小。本研究得出,鸡的排卵率经两种互补机制进行调控,一种促进卵泡在起始阶段的生长,另一种使小卵黄卵泡闭锁,抑制卵泡生长。     

番鸭等级前卵泡发育规律及生殖激素变化的研究

为探索番鸭等级前卵泡发育过程中主要生殖激素及卵泡发育的变化规律,试验以同批孵化、饲养条件相同、体况相近的产蛋期番鸭为对象,分别采集小白卵泡(SWF)、大白卵泡(LWF)、小黄卵泡(SYF)、大黄卵泡(LYF)。通过组织形态学方法观测卵泡的发育情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定激素水平。结果表明:在等级前卵泡发育过程中,促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)呈现上升的趋势,且LYF时期浓度最高,差异不显著(P0.05);而孕酮(P4)和雌二醇(E2)均呈现下降趋势,从SWF至SYF时期极显著下降(P0.01),SYF至LYF时期,下降不显著(P0.05)。伴随卵泡的发育,颗粒细胞层和卵泡膜层不断增厚,且卵泡膜厚度在LWF至LYF时期增长极显著(P0.01)。由此可见,FSH、LH、P4、E2在番鸭等级前卵泡发育中起重要作用,且SYF阶段是番鸭等级前卵泡发育的关键阶段。