小鹅瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

为了建立快速、简便的番鸭小鹅瘟病诊断方法,用纯化的小鹅瘟病毒（Goose parpovirus,GPV-PT）免疫BABL/c鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和间接免疫荧光检检（indirect immunofluorescence assay,IFA）筛选,获得3株能稳定分泌抗GPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株（分别命名为D11、7-7和E16）。三株单抗的免疫球蛋白亚类分别为IgM、IgG3和IgM,3株单抗均具有ELISA、IFA和中和特性;其中两株（D11和E16）具有致敏胶乳特性;特异性测定显示3株单抗仅与GPV反应,而与番鸭细小病毒（Duck parpovirus,MPV）、番鸭呼肠孤病毒（Muscovy duck reovirus,MDRV）、禽呼肠孤病毒（Avian reovirus,ARV）、鸭副粘病毒（Paramyxovirus,PMV）、鸭肝炎病毒（Duck hepatis virus,DHV）、正常细胞和胚液等均无交叉反应;在-20℃保存期为18个月。结果表明3株单抗均具有良好的特异性,为研制免疫学快速诊断奠定了基础。     

小鹅瘟病毒荧光PCR检测方法的建立

依据GenBank小鹅瘟病毒(GPV)的NS基因保守区设计一对特异性引物,利用PCR扩增NS区片段,克隆、测序,采取Taqman探针法,构建小鹅瘟病毒的荧光PCR检测方法.结果表明,该方法检测GPV具有很高的特异性和敏感性,可以用于小鹅瘟病毒的检测.     

鸡抗小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与应用

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒(GPV)感染引起的雏鹅的一种急性传染病。近年来,在养鹅生产中,采用抗血清或卵黄抗体给雏鹅注射进行被动免疫预防本病,取得了较好的防治效果。抗血清或鹅源卵黄抗体生产的成本高、产量低,尚不能满足养鹅业快速发展的需求。为此,试制鸡抗小鹅卵黄抗体(IgY)并进行了防治效果试验和现地应用效果观察。1材料与方法1.1材料海兰蛋鸡40只,由黑龙江省生物制品一厂监察室试验动物室提供;2日龄雏鹅40只,购于哈尔滨市道里区某孵化场,供试验用。GPV免疫用抗原、GPV琼扩抗原及阳性血清和抗小鹅瘟鹅源血清琼扩抗体(效价416),均由…     

直接荧光法快速检测小鹅瘟病毒

本试验利用直接荧光标记单克隆抗体对１１例自然病死的小鹅和正常小鹅内脏组织进行了检测。结果１１例自然死亡的小鹅的心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、盲肠、回肠、空肠十种脏器均出现阳性，而且以肠道的检出率最高，检出效果最好，鹅肝分离出的病毒经浓缩后进行琼脂扩散试验，均证明ＧＰＶ的存在，与试验结果一致。     

番鸭小鹅瘟病直接荧光诊断试剂的研制

将抗番鸭GPV单抗腹水采用透析法标记异硫氰酸荧光素（FITC）,制备成抗GPV荧光抗体,研制检测GPV抗原的直接免疫荧光诊断方法。结果显示GPV荧光抗体仅与GPV阳性的组织切片或细胞呈现特异性荧光,与番鸭细小病毒（MPV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、鸭副粘病毒（DPMV）、鸭病毒性肝炎病毒（DHV）和正常番鸭组织切片不反应;与间接荧光方法的符合率为92．9％。表明GPV荧光抗体具有较好的特异性、敏感性和准确性,可用于临床快速诊断番鸭小鹅瘟病。     

小鹅瘟病毒分离与初步鉴定

取死于具有小鹅瘟典型症状的 7日龄吉林白鹅脾脏 ,制成乳剂 ,接种于未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产种蛋的 12日龄鹅胚尿囊腔。结果当盲传至第 3代 ,鹅胚死亡 ,电镜负染尿囊液观察到细小病毒样粒子。雏鹅接种试验结果表明 ,试验组雏鹅表现出小鹅瘟临床症状和剖检特征。由此证明 ,该雏鹅死于小鹅瘟     

小鹅瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立

小鹅瘟是由鹅细小病毒（Goose Parvovirus，GPV）引起的雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、败血性传染病。该病主要侵害3～20日龄小鹅，以渗出性肠炎、肝脏、肾脏、心脏等实质器官炎症为主要特征。该病传播快，发病率和死亡率高，是严重危害养鹅业的重要传染病。     

小鹅瘟病毒地方株的分离与鉴定

对安徽省六安地区疑似小鹅瘟病死雏鹅进行剖检,对具有典型症状和病变的病死雏鹅脏器进行病毒的分离培养.用接种鹅胚的病毒增殖法,从病死雏鹩的脏器中分离到一株病毒.通过鹩胚致病性试验、鹅胚中和试验、雏鹅感染试验和琼脂扩散试验,初步鉴定所分离的毒株为小鹅瘟病毒,且该病毒具有较强的致病性.     

小鹅瘟病原分离鉴定及高免卵黄抗体研制

小鹅瘟病是由鹅细小病毒引起的一种鹅急性败血性传染病，其特征病变为渗出性肠炎，其传染快死亡率高，是严重危害鹅业的一种传染病。近年来河南许多鹅场20日龄以下的雏鸡死亡相当严重，怀疑是由于本病的流行引起，为弄清病因，进行综合防治，我们开展了此项研究。     

小鹅瘟病毒胶体金层析检测卡的研究

参照李茂祥等人的方法提纯小鹅瘟病毒（Goose plague virus,GPV）,免疫小鼠,按常规方法获得3株GPV单克隆抗体。用胶体金标记提纯的GPV单克隆抗体288并制备金标棉,马抗GPV多克隆抗体和羊抗鼠抗体喷涂NC膜,组装成胶体金检测卡。特异性试验结果表明,该检测卡只能检测出GPV,其他对照病毒检测结果均为阴性。将GPV做100倍稀释,仍可获得阳性结果。     

小鹅瘟琼扩抗原的制备与应用

1材料和方法1.1材料小鹅瘟病毒株:扬州大学畜牧兽医学院小鹅瘟病毒SYG36株,同时获赠微量的纯化小鹅瘟病毒抗原。阳性血清:本实验室保存备用。鹅胚:无小鹅瘟母源抗体的12日龄健康鹅胚。聚乙二醇(PEG):上海化学试剂厂生产,分子量10000。琼脂糖:电泳纯,由上海东风制药厂生产。PBS:     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体的研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应,与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５～１０－７,琼扩沉淀效价达１２０～１５１２,鹅胚中和效价达１３０～１１２２,鹅体中和效价为１５４～１９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５两株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

小鹅瘟病毒荧光RPA恒温快速检测方法的建立与应用

旨在建立一种以重组酶聚合酶扩增技术（RPA）为基础的快速检测方法,用于小鹅瘟病毒的快速检测。小鹅瘟是一种常见的水禽传染病,严重危害我国养鹅业的健康发展。为了快速准确对小鹅瘟进行诊断,减少该病的危害,本研究以小鹅瘟病毒VP3基因保守片段为靶点,利用重组酶聚合酶扩增技术（RPA）建立了一种准确高效的小鹅瘟病毒RPA恒温快速检测方法,并对检测方法的灵敏度、特异性进行评价,并与传统PCR和传统RT-PCR方法进行比较。结果表明,该检测方法具有较高的灵敏度,可检测到10 copies/μL的病毒核酸;具有良好的特异性,只特异性地扩增鹅细小病毒,而与鹅副黏病毒、鹅源鸭瘟病毒、小鹅流行性感冒病毒、鹅副伤寒病毒、大肠杆菌和曲霉菌均未发生交叉反应;同时该方法重复性检测的变异系数低于6%,具有很好的重复性。阳性符合试验表明该检测方法与荧光定量PCR符合率为99%。该方法可以很好地应用于小鹅瘟的大规模临床样本检测,为小鹅瘟病毒的高通量检测和流行病学调查提供技术手段。     

小鹅瘟病毒贵州株的分离与鉴定

采用鹅胚接种、动物感染、电镜观察及病原核酸与结构蛋白分析等方法对贵州省某养殖场疑似小鹅瘟病例进行了病原的分离与鉴定.结果:该病例组织病料可使鹅胚呈现特征性病变,雏鹅人工感染后能表现出与自然感染病例相似的症状;电镜下病毒粒子直径为20～25 nm,无囊膜,具有典型细小病毒特征;经1%琼脂糖凝胶电泳,病毒核酸扩增片段约为5100 bp;经SDS-PAGE发现,病毒结构蛋白由3条多肽组成,即VP1、VP2、VP3,分子量依次为88、68、57 ku.实验成功分离得到了一株贵州小鹅瘟病毒流行毒株.     

小鹅瘟病免疫的初步探索

小鹅瘟是鹅细小病毒引起的雏鹅的一种急性或亚急性传染病 ,具有高度的传染性和死亡率。目前用免疫接种的方法来控制小鹅瘟病的传播和流行 ,在养鹅生产中已被广泛采用。但如何保证和提高免疫效果是关键的问题。笔者通过对富锦地区小鹅瘟病流行特点的调查和过去几年小鹅瘟免疫效果的观察 ,制定了适合该地区特点的免疫程序 ,经 30余万只鹅的免疫验证 ,取得了明显的预防效果。现将该免疫程序介绍如下。首先 ,对来源不明的种卵孵化的雏鹅在出壳后 4 8h内 ,先注射抗小鹅瘟血清类生物制剂 ,每只鹅雏 0 .5～ 1.0mL ,注射后 8～ 12d再接种 1次小鹅瘟…     

用不同动物制备抗小鹅瘟血清

抗小鹅瘟血清,是防治鹅瘟病最为有效的生物制品之一。目前普遍使用鹅来制造抗小鹅瘟血清,这样不仅增加了相互感染的机会,易引起某些传染病的流行.而且制造成本高,价格贵。为了解决生产实际中的困难,我们试用猪、山羊来代替鹅制造抗小鹅瘟血清,结果山羊、猪的抗体滴度均在1∶16以上。