蛇足石杉组培快繁体系的研究

通过对蛇足石杉(Huperzia serrata)的组织培养进行系统研究,建立蛇足石杉的快速繁殖体系。结果表明,100 mg/L AAS+0.5 mg/L孔雀石绿组合对蛇足石杉外植体内生菌的抑制效果较好,外植体存活率为20%。蛇足石杉初代培养的最佳培养基为MS+蔗糖20 g/L+琼脂4.59 g/L+IBA 0.05μg/L+KT 1.4μmol/L+谷氨酰胺0.1 g/L+山农一号0.05%+TDZ 0.3 mg/L,诱导率达80%;继代培养中愈伤组织诱导在MS+1.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D的条件下,愈伤组织诱导率可达70%;诱导生根的最佳培养基为1/3MS+1.5 mg/L IBA+2.0 mg/L谷氨酰胺,生根率可达90%。     

山梨酸钾在红豆杉开放式组织培养中的应用

[目的]确定山梨酸钾作为开放式组织培养抑菌剂的最佳浓度。[方法]通过在培养基中添加不同浓度的山梨酸钾代替高压灭菌,研究了山梨酸钾在红豆杉开放式组织培养中的抗菌作用。[结果]0．02和0．04g/L山梨酸钾的抑菌效果较好,抑菌时间最长,在红豆杉的开放式组织培养中未出现青霉和黑曲霉,且菌块生长较慢。在含0．02g／L山梨酸钾的培养基上培养的红豆杉外植体在第16天出现愈伤组织。在含0．02和0．04g/L山梨酸钾的培养基上外植体的存活率分别为13％和3％,其余培养基上的外植体全部死亡。在含0．02和0．04g／L山梨酸钾的培养基上外植体的污染率分别为87％和97％。0．02g／L山梨酸钾的抑菌效果明显好于其他浓度。[结论]山梨酸钾可以作为红豆杉开放式组织培养的前期抑菌剂。     

蛇足石杉孢子离体繁殖技术研究

蛇足石杉是一种古老的蕨类植物,具有非常重要的药用价值,该试验以蛇足石杉的孢子为外植体进行离体繁殖以提高繁育速度,通过孢子不同接种方式及不同初代、增殖、生根培养基配方比较,最后得出,接种时最佳的接种方式是将1cm大小的孢子叶直接接到培养基上;初代诱导阶段选用MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L配方最好;增值阶段选用MS+KT 1.0mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA3 1.0mg/L配方最好并能降低玻璃化;生根阶段选用1/2 MS+IBA 0.5 mg/L配方效果最好。希望该试验的结论能为整个蛇足石杉快繁提供依据,加速其工厂化育苗。     

麝香草酚对13种植物病原微生物的抑制作用

[目的]探讨石香薷主要成分麝香草酚对植物病原菌的影响。[方法]采用管碟法研究麝香草酚对13种致病微生物的抑制作用。[结果]麝香草酚对13种受试菌均有不同程度的抑制作用,其中对水稻恶苗病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜炭疽病菌、油菜菌核病菌4种植物病害真菌的抑制效果极显著,抑菌效果与麝香草酚浓度呈正相关,对这4种真菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.125、0.063、0.063、0.250 mg/mL,最低杀菌浓度(MBC)分别为0.125、0.125、0.063、3.000 mg/mL。[结论]试验结果可为麝香草酚的进一步研究提供理论依据。     

苗药吊石苣苔的抑菌活性研究

[目的]研究苗药吊石苣苔的抑菌活性.[方法]采用体外微生物敏感试验,测定吊石苣苔不同溶剂提取物的体外抑菌活性.[结果]正丁醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌均有抑制效果,其中对大肠杆菌的抑制活性显著,其抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)分别为10.39 mm和3.2 mg/ml;乙酸乙酯提取物对受试细菌均具有抑菌效果,特别对金黄色葡萄球菌的抑制活性显著,其抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)分别为12.31 mm和0.8 mg/ml;而石油醚提取物仅对金黄色葡萄球菌有较弱抑制作用;水浸提物除对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌有抑制作用外,对其他菌株也无抑制作用.[结论]吊石苣苔具有较强的抑菌作用,其体外抑菌活性部分主要分布在正丁醇、乙酸乙酯相.     

真菌抑菌剂在马铃薯开放式组织培养中的应用

[目的]研究马铃薯开放式组织培养中的最佳抑菌剂及其浓度。[方法]利用平板生长抑制法对多锰锌、甲基托布津2种抑菌剂的抗性进行筛选,将筛选出的最佳抑菌剂作为马铃薯开放式组织培养抑菌剂,研究其污染控制效果及其对组培苗生长的影响。[结果]培养基中添加不同浓度的多锰锌及甲基托布津对真菌的抑制与对照相比均差异显著,多锰锌抑菌效果优于甲基托布津。[结论]培养基添加0.10 g/L多锰锌(多菌灵含量16%,代森锰锌含量34%,可湿性粉剂)抑菌效果好且苗的生长状况最佳,可作为马铃薯开放式组织培养中的抑菌剂。     

野生牛蒡根提取物的抑菌作用研究

[目的]研究野生牛蒡（Arctum lappa L.）根提取物的抑菌作用,为其开发应用提供理论依据。[方法]采用琼脂打孔扩散法和最低抑菌浓度法研究了野生牛蒡根水提物和70%乙醇提取物的抑菌活性。[结果]2种提取物对供试金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus.）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）和大肠杆菌（Escherichia coli）都具有抑菌效果。70%乙醇提取物的抑菌效果优于水提取物,其对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的最低抑菌浓度皆为31.25 mg/ml,对普通变形杆菌的最低抑菌浓度为62.50mg/ml,对大肠杆菌的最低抑菌浓度为250.00 mg/ml;水提物和乙醇提取物对啤酒酵母（Saccharomyces erevisiae）和白色念珠菌（Monilia albican）均未表现出抑菌作用。[结论]野生牛蒡根水提物和乙醇提取物都具有较好的抑制细菌的作用,但无抑制酵母菌的作用,70%乙醇提取物抑制细菌的效果优于水提物。     

蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取研究

[目的]筛选蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳提取条件。[方法]采用纤维素酶酶解细胞壁,从而溶出更多的蛇足石杉细胞中的物质,并设计正交试验选出酶法提取的最佳提取条件。[结果]蛇足石杉中石杉碱甲的酶法提取的最佳工艺条件为纤维素酶用量0.125 g,酶解pH4.5,酶解温度60℃,酶解时间2.5 h;在此条件下,蛇足石杉中石杉碱甲的提取率为0.589‰;各因素中温度对纤维素酶的酶解效果影响最大。与酸提法相比,酶法提取的石杉碱甲的提取率提高了40.3%。[结论]该方法简便快捷、提取率高,可用来提取蛇足石杉中石杉碱甲。     

液相色谱-串联质谱法快速测定蛇足石杉中的石杉碱甲

[目的]利用液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术建立一种快速测定蛇足石杉中石杉碱甲含量的分析方法。[方法]采用Shim-pack VP-ODS(150 L×2.0 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇与0.1%乙酸水溶液,梯度洗脱15 min,流速为0.3 m L/min,柱温保持在40℃,在质谱正离子模式下用多反应离子监测(MRM)模式来进行定量测定。[结果]在4.38~70.00μg/L的浓度范围内线性良好(r=0.998 9),回收率为96.0%~102.3%,RSD为2.18%;重现性好,变异系数为1.50%;定量检出限为0.438μg/L。[结论]该方法快速灵敏、结果准确、重现性好,对批量检测分析蛇足石杉中石杉碱甲含量有积极的参考意义。     

一辛基代二亚乙基三胺抑菌活性初步研究

采用菌丝生长速率法测定了一辛基代二亚乙基三胺对12种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:当一辛基二亚乙基三胺的浓度为100mg/L时,对小麦根腐病菌、葡萄白腐病菌有较高的抑菌活性,抑菌率分别为89.95%、100%。当浓度达到200mg/L时,对番茄绵腐病菌、小麦赤霉病菌也有较高的抑菌活性,抑菌率分别为79.86%、100%。化合物对番茄绵腐病菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、葡萄白腐病菌都有较高的抑菌活性,有效中浓度(EC50)分别为81.68mg/L、24.45mg/L、90.63mg/L和44.00mg/L。对柑橘炭疽病菌和黄瓜枯萎病菌的抑制效果不明显,有效中浓度(EC50)分别为210.46和262.69mg/L。与对照药剂多菌灵相比,对番茄绵腐病菌、小麦纹枯病菌和小麦根腐病菌具有明显的抑制效果,有效中浓度(EC50)分别为81.68mg/L、44.00mg/L和93.74mg/L,大大优于多菌灵的4.96×108、1.37×105和551.01mg/L。     

蛇足石杉茎尖灭菌方法与组织培养的研究

[目的]研究蛇足石杉组织培养的灭菌方法和培养条件。[方法]以野生孢子体茎尖为外植体,先用不同灭菌液单独或配合使用对外植体进行表面灭菌,将表面无菌外植体转到添加多种抗生素和孔雀石绿的培养基上杀灭内生菌,然后将外植体分别接种到不同的培养基上,筛选茎尖培养的最佳灭菌方法和培养条件。[结果]最佳表面灭菌方法为70%乙醇灭菌40 s,0.1%升汞溶液灭菌8 min,70%双氧水溶液灭菌10 min,培养2周,表面无菌率为63%。适宜的杀灭内生菌方法为表面无菌的外植体在附加0.5 mg/L孔雀石绿和100 mg/L抗生素AAS的培养基上培养4~6周,无菌率达52%。适宜的培养基为1/4MS矿质元素+1/2MS有机元素+2%蔗糖+4.5 g/L琼脂,pH5.8。在此培养基上茎尖外植体可生长出新枝,并可再生根。[结论]建立了蛇足石杉茎尖组织培养的灭菌方法且筛选出适合其生长的适宜培养基,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供实验基础。     

蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离

[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌。[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性。[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测;共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2%～80.5%。其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株。[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一。     

海南蛇足石杉天然居群结构与生境因子研究

【目的】了解海南蛇足石杉居群特征和生长环境,掌握其生长所需的环境条件,为蛇足石杉规范化和产业化栽培研究提供技术支撑。【方法】2009年2～12月,对海南霸王岭自然保护区的蛇足石杉自然居群结构、原生境土壤养分、酸碱度及空气温湿度等进行调查测定。【结果】海南蛇足石杉居群分集中分布居群和分散分布居群,集中分布居群平均密度为83.1株/m2,以幼苗和幼株为主,占居群植株总数的78.2%,其土壤养分含量明显高于分散居群;分散分布居群密度远小于集中分布居群,且幼苗较少;两居群均为酸性土壤;测定期间样地除湿度有较大变化外,温度基本维持在20℃左右。【结论】海南蛇足石杉集中分布居群以幼苗为主,属于更新能力较强的种群;而分散分布居群幼苗较少,更新能力弱。酸性土壤、丰富的土壤养分及20℃左右的气温和90%以上的高湿度环境条件有利于蛇足石杉生长。     

蛇足石杉的芽胞特性和芽胞繁育技术

[目的]研究蛇足石杉的芽胞特性及芽胞繁育技术。[方法]用植物解剖学方法对芽胞的结构进行了观察和描述,在充分了解蛇足石杉芽胞特性的基础上,建立了芽胞繁育体系。[结果]蛇足石杉芽胞有5胞片和1幼芽构成,极易萌发成新植株。[结论]以芽胞为繁殖材料进行规范种植是切实可行的,同时对缓解其资源压力有重要意义。     

金边富贵竹黑腐病病原鉴定及防治方法研究

[目的]明确金边富贵竹黑腐病病原菌种类,筛选出对该病害有防治作用的杀菌剂。[方法]采集具有典型症状的病害标本,根据柯赫氏法则分离病原物,在显微镜下观察病原物形态特征;分别测试2种不同浓度下的9种供试杀菌剂对该病原菌的抑制作用。[结果]引起金边富贵竹黑腐病的病原为半知菌亚门曲霉属的黑曲霉（Aspergillus nigerN.Tiegh）。杀菌剂甲基托布津、恶霉灵、代森锰锌、维鲜、烯酰吗啉、福.福锌等对该菌菌丝生长有较强的抑制作用,有效浓度为500 mg/L时,抑菌率为100%。人工接种试验表明,有效浓度为1 000 mg/L的维鲜或烯酰吗啉溶液喷施叶片防治效果为100%。[结论]防治金边富贵竹黑腐病推荐选用50%维鲜乳油或69%烯酰吗啉可湿性粉剂。     

云南野生大花红景天的组织培养与快速繁殖

[目的]为掌握云南野生大花红景天的组织培养与快速繁殖技术。[方法]将叶片接种于培养基MS＋BA2mg／L＋IAA 0．2mg/L,花芽接种在培养基MS＋KT 2mg/L上,茎尖接种在培养基MS＋BA 2mg/L＋IAA 1mg/L上,幼茎接种在培养基MS＋KT 2mg/L＋IAA 2mg/L上,在培养条件下进行培养。[结果]以叶片为外植体诱导芽效果最好,分化率达100％;幼茎、茎尖与花芽分化时间长,且分化率较低,不宜作为快繁技术的外植体;在培养基MS＋NAA 0．2mg/L上,生根率达100％;通过炼苗后,成活率达70％左右。[结论]为大花红景天的快速繁殖提供了理论依据。     

不同浓度的激素组合对猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的影响

[目的]寻求代替ZT提高猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的最佳激素组合。[方法]以美味猕猴桃离体茎段为外植体,以MS为基本培养基,附加2,4-D0.5、1、2.0mg/L和NAA0.1、0.3、0.5mg/L与6-BA0.5mg/L分别组成诱导愈伤组织的6个激素组合,并以同样浓度的2,4-D和NAA与6-BA1.0mg/L分别组成分化芽的6个组合激素,研究不同浓度的激素组合对猕猴桃愈伤组织诱导及芽分化的影响。[结果]6种不同浓度的激素组合对猕猴桃茎段愈伤组织均有一定的诱导作用,其中2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L的组合有利于愈伤组织诱导,诱导率达86.1%;绿色愈伤组织在MS培养基附加激素2,4-D+6-BA组合中芽的分化率很低,而在附加NAA+6-BA组合中芽的分化率较高,其中,NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L的组合有利于芽分化,芽分化率为75.2%。[结论]2,4-D与6-BA组合对猕猴桃绿色愈伤组织的芽分化有一定抑制作用。     

赤霉素对黑曲霉发酵法生产葡萄糖酸的影响

[目的]探索赤霉素对黑曲霉发酵法生产葡萄糖酸的影响。[方法]还原糖采用3,5-二硝基水杨酸比色法测定,用紫外分光光度计测定菌液浓度。[结果]不同浓度的赤霉素对黑曲霉生长都有促进作用,质量浓度为0.05、0.10、0.50、1.00、1.50 mg/L的5个处理组64h后菌浓度分别比对照组提高了25.12%、35.39%、32.16%、50.44%和31.38%,最佳质量浓度为1.00 mg/L。同时,对各组发酵液进行还原糖测定,表明赤霉素对葡萄糖转化为葡萄糖酸有促进作用,其最佳质量浓度为1.00 mg/L。[结论]在一定的浓度范围内,赤霉素对黑曲霉生长和摇瓶发酵的提高是有效果的。     

鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用研究

[目的]研究鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺和鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用。[方法]以鱼腥草为材料,浓度70%的乙醇为溶剂,设计L9(34)正交试验提取方法,优选出鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺条件;以多粘芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、裂殖酵母和酿酒酵母、黑曲霉为供试菌种,进行抑菌试验,研究鱼腥草叶乙醇提取液的抑菌作用。[结果]优选出的提取方法为乙醇提取法,其较佳的提取条件为温度80℃,料液比1∶20(g/ml),提取2次,每次提取2 h;在此条件下,鱼腥草黄酮类物质的提取率达4.363%。鱼腥草叶乙醇提取液具有广谱抑菌特性,且对细菌的抑菌效果优于对真菌的抑菌效果;鱼腥草叶提取液对多粘芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、裂殖酵母、酿酒酵母和黑曲霉的最小抑制浓度分别为0.06、0.06、0.08、0.08、0.1、0.1和0.1 g/ml。[结论]研究出了鱼腥草叶中黄酮类物质的最佳提取工艺,并确定了其乙醇提取液的抑菌作用,为鱼腥草叶的进一步开发和利用提供了理论依据。