条斑紫菜自由丝状体扩增的意义及影响因子

紫菜的生活史由两个形态截然不同的阶段组成,即宏观的叶状体阶段和微观的丝状体阶段.条斑紫菜(Porphyra yezoensis Ueda)的丝状体是其生活史中的一个重要阶段.通常果孢子是粘附在含钙的贝壳等基质上萌发,并钻入壳内生长、发育成贝壳丝状体(conchocelis),如果不钻壳,在培养液中悬浮生长,这种丝状体称为自由丝状体(free-living conchocelis)[1,2].     

条斑紫菜自由丝状体的形态结构观察

以光镜和电镜观察条斑紫菜（Porphyra yezoensis）自由丝状体生长过程中，从营养藻丝、壳孢子囊枝到成熟的壳孢子囊枝细胞形态结构的变化，结果表明，光镜下自由丝状体在生长过程中细胞外部形态、色素体位置和颜色均发生变化；电镜观察显示了3个不同时期细胞的超微结构，主要包括细胞壁、细胞核、色素体、类囊体、内质网、蛋白核、线粒体、液泡、红藻淀粉和质体小球等。在自由丝状体的生长过程中细胞超微结构的主要变化为细胞壁增厚并产生脊突；色素体数量减少、分布位置从连续排列在细胞两侧到分散排列在细胞边缘，并且在类囊体膜之间出现空隙；红藻淀粉量增多并充满细胞间质。对这些变化与自由丝状体生长环境水温、光照强度和光照时间发生变化之间的关系进行探讨，综合分析认为，条斑紫菜自由丝状体在生长过程中，生长环境经由夏季高温、光照时间长、光照强度高到秋季温度下降、光照时间缩短、光照强度下降的变化，丝状体细胞发生细胞壁增厚、疏松，色素体数量减少，内质网面积增加，液泡、线粒体数量增多，红藻淀粉量大大增加等结构的变化。     

条斑紫菜自由丝状体良种的保存

随着条斑紫菜养殖业的不断发展,出现了藻体变小、生长变慢、衰老变快、产量变低、种子严重退化等问题,为了摆脱困境,寻求出路,选择、培育适合当地的优良品种并保住良种,我们在上海水产大学陈国宜副教授的指     

条斑紫菜丝状体培育技术

近年来紫菜养殖业发展迅猛,苗种需求量很大。如何提高育苗数量并确保质量,稳定养殖业,已成为普遍关心的问题。 1.选种 用作种菜的紫菜宜在其生长旺期从单孢子苗长成的叶状体中挑选那些藻体完整、细长,条斑明显,呈紫褐色的叶状体。这样的叶状体具有生长快,弹性强,光泽好,幼苗适应不良环境、气候能力强,不易脱落等性     

植物激素对条斑紫菜丝状体生长发育的影响

用添加不同浓度的植物激素(NAA、6-BA和KT)的f/2培养液对条斑紫菜自由丝状体进行培养,观察植物激素对条斑紫菜丝状体生长和发育的影响.结果表明:本实验所用3种植物激素的各种浓度对条斑紫菜丝状体的生长和发育都具有一定的促进作用,其中0.2 mg/L的NAA、2 mg/L的6-BA和2 mg/L的KT对条斑紫菜丝状体生长的促进作用最大.同时还发现,不同的植物激素对丝状体发育的影响也是不同的.     

条斑紫菜丝状体悬浮培养研究

通过光强、光时的实验、比较了在悬浮培养条件下，光对条斑紫菜丝状体生长的影响，探讨并初步确定了丝状藻丝悬浮培养适宜的光强，光时条件。与此同时，还比较了悬浮培养和静置培养的实验结果。显示前者的丝状藻丝有比后者高得多的生长率，更适合于生产性应用。     

不同生态因子对坛紫菜自由丝状体早期生长和光合作用活性的影响

本文研究了光照、温度、pH和比重对实验室采集的果孢子和室温自然光下培养的丝状体光合作用活性的影响。发现果孢子和丝状体的光合作用活性，在7000Lux以下，随着光照的增强而提高；水温在10—25℃之间，光合作用活性随温度上升而提高；pH8．0和比重1．025时，光合作用活性分别达到最高值。这与同期测定的果孢子萌发势和丝状体的长势的培养结果一致。     

二氧化锗对坛紫菜自由丝状体生长发育的影响

本文研究了二氧化锗(GeO_2)对我国特有的坛紫菜自由丝状体的生长发育,及对一些附生性硅藻类和绿藻的影响,论证了二氧化锗在本实验浓度范围内,对坛紫菜自由丝状体无叨显毒理影响,而能抑制一些附生性硅藻和绿藻的生长;并探讨了二氧化锗对硅藻、绿藻的毒性机理。由于在培养坛紫菜自由丝状体时很容易附生硅藻 因而研究结果将为坛紫莱自由丝状体及其他藻种的培养和保存提供依据。     

条斑紫菜贝壳丝状体培育中的几项技术措施

紫菜栽培生产中的苗种培育，其实质是对紫菜贝壳丝状体生长发育进行调控管理的过程 ，包括了由果孢子发育到丝状藻丝生长、壳孢子形成与放散的管理。近年来，在紫菜贝壳丝 状体培育中普遍遇到了果孢子采苗缺种藻、病害及壳孢子采苗不顺利等问题。本文根据多年 的研究与生产实践，针对上述问题所应采取的技术措施及方法作一介绍。1 果孢子采苗　　选择优良品系，获取良种种质进行种苗培育，是紫菜良种化栽培的关键之一。目前条 斑紫菜果孢子采苗有两种途径：由成熟的叶状体(种藻)获取果孢子接种贝壳；由自由丝状体 接种贝壳。1.1 果孢子接种…     

条斑紫菜叶状体细胞的发育与分化

条斑紫菜壳孢子经室内10～80d培养后长成的叶状体分别被酶解成单个细胞，后者在液体培养基中发育成正常叶状体、畸形叶状体、细胞团、性细胞囊等10种不同类型的再生体，它们的形态与结构、细胞排列与大小，放散单孢子难易程度及最终发育结果等均不同。来自日龄不同的种藻的细胞，其再生体类型的数目和各类再生体的百分数不同。当种藻日龄为10～30d时，在它们的单离细胞再生体中出现了极少的细胞团，正常叶状体和具假根畸形叶状体的百分数随着种藻日龄的增加，急剧减少，但不具假根．的畸形叶状体百分数却随着种藻日龄的增加而增加。当种藻日龄大于40d以后，它们的单离细胞就几乎不能直接再生成正常叶状体。随着种藻日龄的增加，细胞再生体中不具假根的畸形叶状体百分数也显著减少，而细胞团的百分数急剧上升，精子囊和果胞子囊的数量也逐渐上升。来自同一藻体不同部位的细胞，在它们的再生体中，随着细胞所处藻体部位的上移，正常叶状体和畸形叶状体的百分数急剧减少，而细胞团百分数却不断增加。上述结果说明，在离体条件下，条斑紫菜叶状体的单离细胞发育成不同类型的再生体，是由于它们在种藻里处于不同分化阶段的缘故；同时，初步得出在条斑紫菜叶状体的发育过程中，从壳孢子细胞分化成性原细胞的过程可分为8个不同的分化阶段。     

条斑紫菜凝集素的化学修饰

为探索条斑紫菜凝集素(Porphyra yezoensis Ueda Lectin PYL)的作用机理,对纯化的条斑紫菜凝集素分子进行化学修饰,测定与其活性相关的氨基酸残基。结果表明,经碘乙酸、NEM、DTT修饰后的PYL,其凝集活性均未发生任何改变,表明分子中的自由巯基、二硫键与凝集活性无关。PYL经NEM修饰,有2.6个分子表面的自由-SH被修饰。在5mmol.L-1的NAI下,PYL凝集活性不变,但在10、20mmol.L-1 NAI时凝集活性分别丧失50%,75%,经羟胺处理后恢复部分活性,说明Tyr和氨基在PYL的凝集活性中起一定的作用;Glu和Asp的化学修饰,其凝集活性丧失93.75%,说明酸性氨基酸谷氨酸和天冬氨酸是PYL凝集活性的重要组成部分。     

条斑紫菜谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆与表达分析

谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)是一类多功能蛋白家族,主要参与解毒和抗氧化防御过程。为了研究GST在条斑紫菜叶状体解毒过程中的作用,克隆并分析了条斑紫菜一个可溶性谷胱甘肽S转移酶基因(命名为PyGST)的基因组DNA序列和cDNA序列,采用实时荧光定量PCR研究了其在铅胁迫下的表达规律。PyGST包含一个长624 bp的完整开放阅读框,编码区内含有一个长248 bp的内含子。PyGST具有GST蛋白家族的保守碱基和保守结构域。PyGST与藻类GST的亲缘关系最近,与动物Sigma型GST的亲缘关系次之;在进化树上PyGST等大多数藻类GST与动物Sigma型GST聚为一簇,表明PyGST属类Sigma型GST。铅胁迫能显著诱导PyGST表达,说明在叶状体细胞内PyGST参与了重金属铅的解毒过程。     

高温胁迫下条斑紫菜叶状体HSP70基因的表达谱分析

采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了条斑紫菜叶状体在25℃高温胁迫下PyHSP70-1基因的相对表达量变化。定量分析显示PyHSP70-1基因表达受到高温胁迫的显著诱导。在持续高温胁迫下,PyHSP70-1表达量在8 h时达到最大,此后一直维持在较高水平,且与对照差异显著。在短暂高温胁迫结束后PyHSP70-1表达量最大,随着恢复时间的增加,其mRNA量逐渐减少,在恢复的24 h时间内,mRNA量仍然显著高于对照。结果表明PyHSP70-1是诱导型HSP,受热激诱导表达,在热激胁迫中维持细胞蛋白与膜的稳定,对细胞具有重要的保护作用。     

条斑紫菜色彩突变体的诱导_分离和特性分析

条斑紫菜叶状体的原生质体经化学诱变剂－Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理后,在它们的再生叶状体中,出现了少量色彩发生变异的点状异体。它们的色彩变异细胞呈点状无规则地与野生细胞或其它变异细胞镶嵌在一起。这类变异体的单孢子萌发成单色变异（或野生色）叶状体以及与母体相似的点状变异体。利用单色变异叶状体分离出绿色（ｙｅｌ）,浅桔黄色（ｏｃｈ）以及深桔红色（ｂｕｓ）等三个突变株。突变株的叶状体活体吸收光谱以及藻红蛋白和藻蓝蛋白的含量与野生型相比均存在着明显的差异。经突变体支生型杂交实验证明,突变体ｙｅｌ和ｏｃｈ均含一个与色彩变化有关并且符合孟德尔遗传规律的隐性变异基因。相关变异基因的着丝粒距离,在突变体ｙｅｌ和ｃｏｈ中分别为１１．５和１５．８图距。     

条斑紫菜叶状体附生菌及病原菌的初步调查

对条斑紫菜叶状体进行微生态学调查,结果表明：在健康的叶状体上附着异养菌数量为106c．f.u／g,优势菌菌落为黄色和桔红色两种。具有降解琼脂特性的病原菌在健康叶状体上数量很少,它们主要附着于网绳上,这可能是引起紫菜脱落,特别是苗期严重脱落的主要原因。     

条斑紫菜缩曲症的研究↑（*）

本文通过对海区调查,运用切片染色技术等实验方法和电镜观察,研究了条斑紫菜的缩曲症,并对患缩曲症的条斑紫菜进行了初步的品质分析,结果表明,缩曲症虽然在外形上与癌肿病十分相似,但是其病变部位没有出现巨大细胞或多核现象等癌肿病的特有病症。研究还表明,由于缩曲症普遍存在于栽培紫菜的中、后期,且造成紫菜品质低劣,因而对紫菜质量的影响较大。     

抗生素抑制农杆菌的效果及对条斑紫菜生长发育的影响

用头孢霉素和卡那霉素抑制农杆菌(LBA4404和EHA105)生长,同时测定在液体培养条件下条斑紫菜组织块对2种抗生素的敏感性,以期找到适合用于农杆菌介导条斑紫菜遗传转化的脱菌剂及农杆菌转化用于条斑紫菜的可行性.试验结果表明,2种抗生素对2株农杆菌菌株有较强的抑制作用,对条斑紫菜叶状体组织块的生长作用效果不同,头孢霉素≥300 mg/L抑制叶状体组织块长度的增加,而卡那霉素≥400 mg/L对组织块的增长有一定的促进作用.头孢霉素对条斑紫菜的发育抑制作用较卡那霉素更大.在培养液中添加头孢霉素≥300 mg/L或卡那霉素质量浓度≥600 mg/L组织块不能发育形成丝状体.头孢霉素和卡那霉素可作为农杆菌介导条斑紫菜遗传转化的抑菌剂,使用较适宜的质量浓度分别为200 mg/L和400 mg/L.