鸡免疫球蛋白基因结构与抗体多样性产生的分子机制

鸡具有独特的免疫球蛋白基因结构,抗体多样性产生机制有别于啮齿动物和灵长类动物。种系基因重排产生了有限的抗体基因类型,抗体多样性的产生机制主要源于体细胞的基因转变,一种由胞嘧啶核苷脱氨酶(AID)启动的同源重组,V基因上游的假基因取代了重排后有同源序列的可变区基因片段。基因重排和基因转变过程受启动子、增强子和沉默子序列的调控,通过碱性螺旋-环-螺旋结构的转录因子E2A进行调节。     

鸡Igλ轻链基因克隆、序列分析及其在COS7细胞膜上的定位表达

为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基酸构成轻链信号肽,随后是2个Ig样结构域。运用融合PCR的方法将该基因与牛IgG Fc受体γRⅡ跨膜区序列嵌合形成重组跨膜分子,构建真核表达载体pcDNA-λR2T,转染COS7细胞,荧光抗体染色及流式细胞术检测到重组鸡Igλ轻链在细胞膜上的表达。所扩增的鸡Igλ轻链基因以及构建表达于细胞膜上的重组鸡Igλ轻链跨膜分子,为研究鸡免疫系统中的抗体轻链基因,探索Igλ轻链和B细胞膜免疫球蛋白的功能奠定技术基础。     

家蚕蚕丝蛋白基因表达调控研究进展

家蚕蚕丝蛋白是由家蚕丝腺特异合成的,蚕丝蛋白主要由丝素和丝胶组成。其中,丝素包括丝素重链(Fib-H)、丝素轻链(Fib-L)和P25共3种蛋白,其基因的表达主要是在转录水平上受到一系列反式作用因子与相应顺式作用元件的共同调控。蚕丝蛋白基因的表达具有组织和时期特异性,但是这种特异性并不是十分严格。     

NF-κB在癫痫中的作用研究进展

核因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)是一种重要的转录因子,能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子出序列特异性结合,具有广泛生物学活性,在癫痫形成中介导了炎症反应过程。该文就NF-κB在癫痫中的研究进展进行了综述。     

鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达

将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡Igλ轻链/GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察,重组鸡Igλ轻链/GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达,而载体pEGFP-C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明,牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。     

鸡Igγ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达

将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igγ轻链基因中，并将鸡Igγ轻链信号肽与Pegfp—C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp—C1-SP。鸡Igγ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点，构建了带有信号肽的鸡Igγ轻链／GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后，荧光显微镜观察，重组鸡Igγ轻链／GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达，而载体pEGFP—C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明，牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。     

五龙鹅IgY、IgM分子特性研究

为丰富和完善鹅Ig分子特性的研究,以层析、离子交换等方法分离纯化五龙鹅的免疫球蛋白及重链、轻链、Fab段、Fc段,进行鹅Ig的多态性、分子质量、氨基酸组成、稳定性等分子特性研究。结果表明:五龙鹅IgY存在几个亚类,总分子质量为166ku,重链约为60ku,轻链约为23.5ku;鹅IgM的重链分子质量分别为51.72、48.30和44.09ku,轻链20.30ku,所以,总分子质量约为660~740ku;五龙鹅Ig重链的分子质量均小于鸡、鸭;IgY的Fab段分子质量为48.67ku,Fc段为68.62ku。IgY的重链和轻链中碱性氨基酸摩尔分数小于酸性氨基酸,为酸性蛋白质,而IgM则为碱性蛋白质;IgY中Cys摩尔分数为2.25%,IgM为3.26%;鹅IgY的重链和轻链中Pro的摩尔分数相差较大,分别为7.69%和0.10%;鹅IgY在pH3.5~11.5的范围内十分稳定,IgM在pH4.0~10.5的范围内稳定,IgM的酸碱稳定性小于IgY,但在pH3.5~4.5时活性增加5%~8%;研究表明五龙鹅IgY热稳定性较差,热变性反应级数为1.2。     

欧洲鳗鲡免疫球蛋白M重链基因的原核表达与不同组织中表达变化的定量分析

通过RT-PCR技术从欧鳗(Anguilla anguilla)脾脏总RNA中获得了编码成熟免疫球蛋白(Ig)重链的基因序列(GenBank accession No.GQ249838),该序列长1 686 bp,编码562个氨基酸残基,分子质量为62.2 ku.将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明新增的66 ku蛋白条带与预期值相符,且能够与兔抗欧鳗IgM血清发生强烈的特异性反应,证实了欧鳗免疫球蛋白重链(IgH)基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;利用荧光定量PCR检测了Ig基因在欧鳗背肌注射山羊IgG前后不同组织的表达水平,结果显示欧鳗在免疫前后其肾脏与脾脏Ig基因的表达量均明显高于其它组织,在鳃、肌肉中的表达量也较高,而在肝脏、心脏中的表达量较低.此外,对同一组织免疫前后的Ig基因表达量比较发现,除肝脏外,其它组织Ig基因表达水平在免疫后均上升,在鳃和肌肉中达到显著水平,而在脾脏中达到极湿著水平.     

信号肽对鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白重组分子在COS7细胞上分泌表达的影响

分别将鸡Igλ轻链信号肽、小鼠纤溶酶原信号肽与pEGFP-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合,产生带有信号肽的中间载体pEGFP-SPc和pEGFP-SPm。对鸡Igλ轻链基因的定向克隆,构建了带有纯化标签的鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-SPc-λ和pEGFP-SPm-λ。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察及Western blotting检测融合蛋白的分泌表达,结果显示,鸡Igλ轻链信号肽能引导鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子的分泌表达;而小鼠纤溶酶原信号肽不具备引导该重组蛋白分泌表达的功能。表明信号肽在蛋白分泌表达中的关键作用,重组蛋白的分泌表达要选择合适的信号肽。     

Immunoglobulin structure: amino terminal sequences of mouse myeloma proteins that bind phosphorylcholine

The amino terminal sequences of five light and heavy immunoglobulin chains from myeloma proteins of the BALB/c mouse with binding activity to phosphorylcholine are presented. Except for a single substitution in position 4, all five heavy chains have identical amino terminal sequences through the first hypervariable region. Proteins which share unique (idiotypic) antigenic determinants are identical through the first hypervariable region of their light and heavy chains. Proteins with differing idiotypic determinants have light chains of differing amino acid sequence. These observations suggest that the heavy chain plays a more important role than the light chain in determining the phosphorylcholine binding site.     

Variation and homology in the mu and gamma heavy chains of human immunoglobulins

Sequence analysis of an 1gM immunoglobulin shows that the variable regions of hunman micro and gamma1 heavy chainis may have twice as much homology as their constant regions and that evolutionary divergence of micro and gamma1 heavy chain genes occurred not long after the separation of heavy and light chain genes.     

Transfectomas provide novel chimeric antibodies

Methods have been developed to transfect immunoglobulin genes into lymphoid cells. The transfected genes are faithfully expressed, and assembly can occur both between the transfected and endogenous chains and between two transfected chains. Gene transfection can be used to reconstitute immunoglobulin molecules and to produce novel immunoglobulin molecules. These novel molecules can represent unique combinations of heavy and light chains; alternatively, by means of recombinant DNA technology, genes can be assembled in vitro, transfected, and expressed. The end products of such manipulations include chimeric molecules with variable regions joined to different isotypic constant regions; this is possible both within and between species. It is also possible to synthesize altered immunoglobulin molecules, as well as molecules having immunoglobulin sequences fused with nonimmunoglobulin sequences (for example, enzyme sequences).     

Anti-inflammatory activity of human IgG4 antibodies by dynamic Fab arm exchange

Antibodies play a central role in immunity by forming an interface with the innate immune system and, typically, mediate proinflammatory activity. We describe a novel posttranslational modification that leads to anti-inflammatory activity of antibodies of immunoglobulin G, isotype 4 (IgG4). IgG4 antibodies are dynamic molecules that exchange Fab arms by swapping a heavy chain and attached light chain (half-molecule) with a heavy-light chain pair from another molecule, which results in bispecific antibodies. Mutagenesis studies revealed that the third constant domain is critical for this activity. The impact of IgG4 Fab arm exchange was confirmed in vivo in a rhesus monkey model with experimental autoimmune myasthenia gravis. IgG4 Fab arm exchange is suggested to be an important biological mechanism that provides the basis for the anti-inflammatory activity attributed to IgG4 antibodies.     

牛Sry启动子调控序列的鉴定

【目的】Sry是大多数哺乳动物雄性性别发育的决定基因,但人们仍未找到其表达的调控规律,本试验对牛Sry5′端调控序列作了初步的研究,为深入研究牛Sry的表达调控奠定了基础。【方法】克隆牛Sry5′端侧翼1056bp长的DNA序列,利用生物信息学方法对这一区域内潜在的转录起始位点进行了预测,并构建了10个不同长度的缺失牛Sry5′部分侧翼序列的报告基因载体;进一步分离了胎牛生殖嵴,进行生殖嵴细胞的原代培养,并对胎牛生殖嵴细胞进行了性别和特征鉴定;最后利用荧光素酶双报告基因分析系统,在生殖嵴细胞内检测了牛Sry核心启动子区域的位置。【结果】体外培养的生殖嵴细胞可以表达雄性生殖嵴细胞的特征基因Sry、Sox9、Sf-1和Dax1,牛Sry5′端-93、-419和-722处存在3个潜在的转录起始位点(TSS),-599—-565区域35bp内存在控制Sry基础转录活性的顺式调控元件,其中存在多个潜在的转录因子结合位点。【结论】牛Sry5′端UTR区-599—-565bp区域35bp存在部分调控序列。