织纹螺的毒素成分分析

近年来,我国常有食用织纹螺中毒事件发生,由于织纹螺在世界各地海区分布广泛,种类繁多,所含的毒素成分也不完全相同,目前对织纹螺的毒素组成还存在较大的分歧.国内学者认为织纹螺毒素主要成分是麻痹性贝毒(PSP),认为织纹螺毒素可能是通过食用赤潮中有毒的藻类在体内蓄积产生.通过动物实验、液相色谱方法对福建沿海的有毒织纹螺的毒素进行比较分析,发现织纹螺的毒素中的主要成分是河豚毒素(TTX).再用液质联用的方法对织纹螺的毒素成分作进一步分析研究,发现液质联用的条件可以很好地分离和确定样品中的TTX及其衍生物.实验研究表明织纹螺的毒素主要成分是TTX,同时还含有TTX的4位空间异构体(4-epiTTX)、脱水河豚毒素(anhydroTTX)、脱氧河豚毒素(deoxyTTX)、单加氧河豚毒素(11-oxoTTX)等TTX的衍生物.     

节织纹螺毒力的季节变化规律

为了解节织纹螺的毒性,利用生物法对节织纹螺毒素的变化规律进行研究。实验结果表明：节织纹螺毒素的毒力呈季节性变化,每年的4月至9月是毒力较高的时期,毒力最高达56 MU/g。进一步分析表明,节织纹螺肌肉和中肠腺部分毒力变化略有不同：肌肉部分毒力较高时期是5月至9月,最高达49 MU/g;中肠腺部分毒力较高时期是4月至8月,最高达78 MU/g。从节织纹螺毒素总体分布来看,除4月外,中肠腺所含毒素总量都低于肌肉毒素总量,节织纹螺中的毒素主要存在于肌肉中。由于节织纹螺属大型织纹螺,毒素主要存在可食部分中,一定量食用仍然会引起中毒,广大群众应尽量避免食用节织纹螺。     

浙江沿海织纹螺科的分类学研究

对浙江沿海采集的标本进行了整理、鉴定,共有织纹螺科动物1属13种,其中1个新种,1个未定种。     

拟南芥和小菜蛾相互作用的差异蛋白分析

以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)和专食性害虫小菜蛾(Plutella xylostella)为研究系统,运用蛋白质组学方法分析了拟南芥在小菜蛾取食诱导条件下叶片蛋白的差异表达情况。结果表明:有52个蛋白点在小菜蛾取食诱导条件下发生显著变化,其中28个蛋白点表达量上调,24个蛋白点表达量下调。运用质谱技术对其中的部分差异蛋白进行了鉴定,发现富含甘氨酸的RNA结合蛋白,3-磷酸甘油醛脱氢酶,ATP合酶的α亚基和β亚基在植物诱导防御中具有重要的作用,为揭示植物在昆虫取食条件下的化学防御机制提供蛋白质水平方面的理论基础。     

低温下寒地冬小麦差异蛋白表达比较分析

以抗寒性不同的两个冬小麦品种“东农冬麦1号”和“济麦22”为试验材料,以包含生长点的分蘖节为研究对象,分析低温驯化、封冻初期及深度封冻期两份材料细胞膜受损差异,检测分蘖节处细胞活力,对两个品种分蘖节进行蛋白质双向电泳,筛选差异表达蛋白后作质谱分析。结果表明,低温下东农冬麦1号细胞膜受损程度小于济麦22,分蘖节处细胞活力显著高于济麦22。共鉴定出品种间21个差异蛋白点,低温驯化期济麦22参与能量代谢、蛋白合成、光呼吸及抗性蛋白表达量较高,东农冬麦1号参与糖代谢、细胞壁合成的蛋白表达量高;封冻后东农冬麦1号抗性蛋白、参与能量代谢、物质合成及维持细胞稳定的蛋白表达量增强。研究明确抗寒品种东农冬麦1号耐低温蛋白表达情况,丰富寒地冬小麦安全越冬理论基础,为采用分子手段开展抗寒性遗传改良提供理论依据。     

干旱胁迫下红麻叶片的差异蛋白表达分析

【目的】研究耐旱性高的红麻品种在干旱胁迫条件下的蛋白质表达,揭示红麻耐旱性的生理机制。【方法】以鉴定出的耐旱性红麻品种GA42为材料,在苗期（五叶期）设置正常供水与控水比较试验,运用双向电泳分析红麻在干旱胁迫和正常供水条件下叶片蛋白质组的动态变化。【结果】对2-DE图谱分析后发现,在干旱胁迫下出现65个差异表达蛋白质点,选用表达量明显上调的9个蛋白质点,通过MALDI-TOF-TOF MS分析和数据库检索,鉴定出6个差异表达蛋白的功能,分别是2个核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶（Rubisco）或其大亚基（所有植物进行光合碳同化的关键酶）、1个Rubisco活化酶（广泛存在于植物中调节Rubisco活性的酶）、1个二甲基萘醌甲基转移酶（一种参与甲基转移反应的辅酶）、1个推定的胞质型谷氨酰胺合成酶（参与高等植物氨同化过程的关键酶）、1个ATP合酶β亚基（在活性细胞中起着将其它能量合成为生物能量通货-ATP的能量转换作用）。【结论】揭示了红麻GA42表现出较强的耐旱性与上述6个差异表达蛋白质点明显上调有关。     

低磷胁迫下杉木针叶蛋白的提取与表达差异分析

采用TCA-丙酮沉淀高速离心法,对杉木针叶蛋白质组双向电泳技术中全细胞蛋白的提取、蛋白的裂解、电泳条件等环节进行了优化改良,获得了高重复性、高清晰度的杉木针叶响应低磷胁迫的差异蛋白图谱。在此基础上对低磷处理5 d的杉木进行针叶蛋白提取,并使用ImageMaster 2D Platinum 7.0软件分析比较杉木针叶在对照与低磷处理下的蛋白表达谱。研究表明,图谱中有59个蛋白点存在显著差异,可能与低磷胁迫有关,其中,上调表达点52个,下调表达点7个。     

冷藏条件下鲢鱼肌肉蛋白的变化

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法分析比较了鲢鱼在0和4℃下冷藏14 d过程中肌肉蛋白的变化情况.结果表明:在2种温度下冷藏,肌浆蛋白降解均不显著,其变化趋势基本一致;肌球蛋白重链在0℃下冷藏14 d,4℃下冷藏11 d后发生明显降解;α-辅肌动蛋白和肌动蛋白在2种温度下冷藏均呈逐渐降解的趋势,且在4℃下冷藏降解更为显著;原肌球蛋白在0和4℃下冷藏2 d后均开始降解,此后于0℃冷藏蛋白无明显变化,但于4℃冷藏11 d后降解速度加快.     

虹鳟鱼肌肉营养成分的分析

采用国际所规定的方法，对虹鳟鱼肌肉的营养成分进行了测定，其粗蛋白为２０．５％，粗脂肪为３．３４％，水分为７３．６％；用氨基酸自动化分析仪测定了１８种氨基酸含量，并与青鱼、草鱼、兴国红鲤、链鱼、鳙鱼的营养含量进行对比分析，结果表明；虹鳟鱼的蛋白含量、脂肪含量以及必需氨基酸的含量均高地上述几种淡水鱼类。     

湖南永州尖吻蝮蛇蛇毒的蛋白组分及毒性分析

采用Nano–LC–ESI–MS/MS蛋白鉴定技术对湖南永州尖吻蝮蛇蛇毒蛋白组分进行质谱分析,应用常规体外试管法对尖吻蝮蛇蛇毒体外溶血值进行检测,采用改良寇式法对尖吻蝮蛇蛇毒LD_(50)进行测定。结果显示:尖吻蝮蛇蛇毒含有50种蛋白,蛋白相对分子质量集中在1.0×10~4～2.0×10~4(46.9%)、4.0×10~4～5.0×10~4(22.4%)、2.0×10~4～3.0×10~4(10.6%)和7.0×10~4～8.0×10~4(7.6%),其中代表性的高丰度蛋白有蛇毒金属蛋白酶A(11.7%)、蛇毒金属蛋白酶H1(9.8%)、蕲蛇类凝血酶–2(7.3%)、抗凝血酶A–A亚基(6.8%),低丰度蛋白(0.1%)有Ecto–5'–核苷酸酶、碱性磷脂酶A2 DAV–N6、生长分化因子11;蛇毒引起红细胞溶血的最低质量浓度为60.00μg/mL,尖吻蝮蛇蛇毒对KM小鼠的LD_(50)为7.1796mg/kg,攻毒小鼠出现呼吸急促、躁动不安、注射部位出现奇特瘙痒和大面积溃烂,至死亡。     

Extraction of Proteins from Apple Leaves for Two-Dimensional Electrophoresis Analysis

In order to develop an efficient method about protein extraction which is suitable for apple proteomic analysis, four protocols of total protein extraction from apple leaves, which are trichloroacetic acid/acetone precipitation method （TCA）, phenol extraction methanol/ammonium acetate precipitation method, Tris-HCl extraction method and modified Tris-HCl extraction method were compared. The results showed that the modified Tris-HCl extraction method was the most suitable method in protein extraction for two-dimensional electrophoresis （2-DE） from apple leaves based on the highest resolution and more informative spots of 2-DE gels with no apparent vertical or horizontal streaking.     

甘蓝型油菜抗菌核病近等基因系和感病亲本蛋白差异的初步研究

【目的】建立适合于提取油菜叶片全蛋白的三氯乙酸/丙酮沉淀法,为今后油菜蛋白质组学的研究提供参考,明确菌核菌诱导抗、感菌核病油菜后的蛋白差异表达情况,为寻找抗菌核病基因提供线索。【方法】以油菜抗菌核病近等基因系98C40(抗原来自湘油15)和感菌核病亲本98C40为材料,在其生长的苗期阶段,接种菌核菌72 h之后,分别提取其叶片全蛋白。运用双向电泳技术、PD-quest软件、质谱技术对其进行差异蛋白质组分析。【结果】检测到抗病98C40(抗原来自湘油15)与感病亲本98C40之间有4个差异蛋白点,蛋白点a,线粒体ATP合酶F1β亚基(mitochondrial F1 ATP synthase beta subunit);蛋白点c,磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinas);蛋白点d,噻唑生物合成酶(THI1);这3个蛋白只在抗病98C40(抗原来自湘油15)上表达,而在感病亲本98C40上不表达。蛋白点b,1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase);按5倍差异表达量计算,在抗病98C40(抗原来自湘油15)上高表达,而在感病亲本98C40上低表达。【结论】这4个蛋白都是油菜代谢相关蛋白,它们可能在油菜抗菌核病的反应中发挥作用。     

水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析

采用双水相分配法和离心法对水稻叶片的细胞质膜进行了纯化.选用聚合物Dextran T 500/PEG 3350质量分数分别为6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5%的双水相体系,对3次分配后的细胞质膜纯化效果进行了研究,并进行了细胞质膜标志酶H+-ATPase的活性测定、柠檬酸铅-醋酸铀双染色及电镜检测.结果表明:聚合物质量分数为6.3%的双水相体系可以获得高纯度的质膜微囊,且随分配次数的增加,可以有效减少其他内膜的污染,其质膜标志酶VO34--ATPase的相对活性高达93.5%.粗质膜经过3次两相分配后的蛋白质产率为2.73%.非离子型去垢剂Brij 58对质膜H+-ATPase的活性变化影响结果表明,纯化的质膜微囊封闭性较好,主要为正向型质膜微囊.质膜蛋白质经增溶缓冲液溶解及1-D SDS-PAGE的结果表明,纯化后的质膜有效减少了特定蛋白质条带的丰度,使蛋白质条带的分布更为均匀.双向电泳结果表明,纯化后的质膜双向电脉图谱具有低背景、高分辨率和重复性的优点,为进一步的水稻质膜蛋白质组研究提供了可靠的试验材料.     

胡杨异形叶蛋白质表达的电泳分析

[目的]研究胡杨异形叶发育的细胞与分子调控机制,揭示胡杨的生态适应性。[方法]利用SDS-PAGE及2-DE技术提取及分离同一株胡杨成年树异形叶片的蛋白质,建立适合胡杨叶片蛋白质分离的电泳技术。[结果]发现异形叶蛋白质的表达存在明显差异。由SDS-PAGE图谱可以看出,分子量为57.2,13.2,30.2,23.9,35.9及33.3 kD处的蛋白谱带差异明显。双向电泳图谱表明,胡杨叶蛋白多为分布在pH值5.0~6.5,20~40 kD之间的酸性低分子量蛋白质;共发现73个差异点,其中在锯齿卵圆形叶片中表达丰度上调的为51个点,下调的为22个点。[结论]推测在长期的进化过程中,胡杨叶片基因的调控表达发生改变而长出不同形状的叶片,以更好地适应环境。     

绵羊精子冻融前后差异蛋白质组学研究

 【目的】检测和分析绵羊精子冻融前后的差异蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离精子蛋白,凝胶用考马斯亮蓝染色,用PDQuest8.0软件检测分析差异蛋白质斑点并经液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】鲜冻精凝胶图谱分析后得到 14个差异蛋白斑点,在国际生物信息学中心数据库搜索到相对应的5种蛋白质：推定的热休克蛋白70.1、转录因子AP-2α蛋白、烯醇酶、烯醇酶1和血清白蛋白前体。在解冻精子中,推定的热休克蛋白70.1、烯醇酶和烯醇酶1含量减少,转录因子AP-2α蛋白含量增加,血清白蛋白前体来源于精浆。【结论】绵羊精子经冷冻、解冻后,蛋白质存在差异,对差异蛋白质的研究有利于探索绵羊精子在冷冻过程中的生理状态,为进一步研究绵羊精子蛋白质组学及揭示精子冻伤机理提供依据。     

T型雄性不育小麦种子蛋白的电泳分析

以梯度SDS－PAGE方法分析了T型小麦雄性不育系及其保持系种子醇溶蛋白和谷蛋白组分，发现两系间有明显差异，而且四个不同品种小麦不育系均有各自与保持系区别的谱带出现，表明T型雄性不育小麦醇溶蛋白基因的表达有品种特异性。用单、双向电泳结合银染技术进一步分析了胚乳醇溶蛋白，发现不育系11A和14A，分别有24kD和36kD的特异蛋白。     

铅胁迫对黄瓜幼苗叶片蛋白质的影响

黄瓜幼苗经不同质量浓度铅处理后,叶片中可溶性蛋白质含量均发生了明显的变化.100 mg/L铅处理时,黄瓜幼苗叶片中可溶性蛋白质含量高于对照值,且随处理时间的延长,与对照比增加的值逐渐减少;500 mg/L和900 mg/L铅处理的叶片中可溶性蛋白质含量随着处理时间的延长表现为下降趋势,并且铅质量浓度越高,随着处理时间的延长,蛋白质含量下降量增加.不同质量浓度铅处理不同时期黄瓜幼苗叶片可溶性蛋白质组分的变化在谱带数和表达量上有明显的差异.     

木本植物叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

以2种木本植物的成熟叶片为材料,对传统的双向电泳进行改进和优化,得到1种适合于木本植物叶片蛋白质电泳分析的方法,此方法大大降低了木本植物叶片中次生代谢物质对双向电泳结果的干扰,明显改善了分析效果。     

柱状黄杆菌外膜蛋白的比较蛋白质组学研究

为了鉴定柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)的毒力相关因子,利用蛋白质组学方法分析了强毒株G4R3和弱毒株G18的外膜蛋白。双向电泳结合图像分析,共发现了8个差异表达的蛋白点。经过胶内酶解和质谱分析,其中的1个蛋白点被鉴定为LemA蛋白,它可能是柱状黄杆菌的一种毒力因子。