影响体细胞核移植效率的因素

哺乳动物体细胞核移植 (克隆 )是近年来迅速发展起来的一项新技术 ,对濒危动物保护、优良种畜快速扩群以及核质关系的研究、药物试验等诸多领域都具有重大意义。但体细胞核移植是一项程序繁杂的工作 ,每一步操作所采用的试剂、材料和方案等都会影响到核移植效率 ,因而其影响因素十分众多。文章根据目前已有资料 ,论述了卵母细胞来源、卵母细胞与供体细胞的胞质容量、卵母细胞的去核方案、体细胞供体动物的年龄、供体细胞的组织来源与传代次数及供体细胞的冷藏、冷冻和所处的细胞周期阶段对核移植效率的影响。另外 ,对重组胚的融合 -激活方案、核移植方案及重构胚的培养方案对核移植效率的影响也作了简要论述。     

细胞核移植技术在研究太湖猪高繁殖性能核外基因效应中的应用

细胞核移植技术细胞核移植技术 ,根据核供体细胞的不同 ,有胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植和体细胞核移植。以核移植为核心技术的动物克隆技术 ,其基本技术环节除基本显微操作外 ,主要包括供核的分离、受体细胞的去核、核卵重组、重组胚的融合、核移植胚的培养与移植或重复克隆。供体核的分离胚胎细胞用 0 2 %链霉蛋白酶预处理胚胎 ,去胚胎的胶膜及透明带 ,离出单个卵裂球。目前在胚细胞核分离技术中有两大重要进展 :①胚胎干细胞系建立──胚胎干细胞在发育阶段上类似于内细胞团细胞 ,胚胎干细胞系是早期胚胎经…     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对牛羊体细胞核移植影响的研究进展

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)是一类蛋白酶抑制剂,通过干扰组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的功能从而在染色体重塑、基因表达调控等方面发挥重要作用。近年来,关于HDACi促进供体细胞及体细胞核移植重构胚重编程的相关研究受到越来越多的关注。本文主要综述了HDACi对牛羊体细胞核移植的影响,旨在为提高牛羊体细胞克隆胚胎的生产效率提供参考。     

不同供体细胞代数对兔体细胞核移植效率的影响

将兔成纤维细胞分为5～10低代数组和20～25高代数组进行核移植研究。结果显示,2试验组供体细胞核移植的效率存在差异。通过对供体细胞进行核移植后的重构胚胎的融合率、卵裂率、囊胚率以及体内发育的比较,发现低代数相对来说更有效率,但是高代数组也能获得正常的克隆后代。结果表明,兔不同代数体外培养细胞对克隆效率存在影响,并为制备转基因打靶兔提供基础。     

供体细胞低温冷藏处理对水牛体细胞核移植效果的影响

自1997年《自然》杂志报道克隆羊“多莉”以来,多种哺乳动物的体细胞核移植相继取得了成功。然而,体细胞核移植的技术环节繁多,各种各样的因素影响着核移植的效果,核移植的效率仍然很低(牛,<5%)[1]。核移植效率的提高有赖于各个技术环节的完善,供体细胞的准备与处理是核移植中的一个关键环节,它直接影响到核移植的效果。低温冷藏供体细胞可以减少染色体变异的可能性,亦有利于重构胚的发育。研究探讨了水牛胎儿成纤维细胞经低温冷藏处理后对核移植效果的影响。1材料与方法1.1试剂及培养液的配制研究所用的试剂除TCM-199购自G ibco公司外,其…     

体细胞核移植生产转基因牛胚胎的研究

为了优化利用体细胞核移植生产转基因牛早期胚胎的体系,以携带绿色荧光蛋白-新霉抗性双标记基因的pMSCV质粒转染的胎牛耳成纤维细胞为供体,以体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚,研究供体细胞的传代次数对转基因胚的影响和重构胚在不同电场条件下（电场强度、直流电脉冲次数）融合效率及其在不同体外培养系统中的发育效果。结果表明：传代5次的细胞做核供体较有利于转基因胚的发育;在电场条件为电场强度1.6 kV/cm、直流脉冲1次的融合率最高;负压单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率较好,与未转基因体细胞核移植胚的发育相比无显著差异（P〉0.05）。     

供体细胞对哺乳动物体细胞核移植的影响

哺乳动物体细胞核移植技术(克隆)在农业、生物技术、医药生产和濒危动物保护等方面具有很大的潜力和应用价值,已成为目前发育生物学研究的重要方法.文章依据近年来国内外在动物克隆技术方面的资料,分析了供体细胞类型、供体细胞动物年龄、供体细胞所处细胞周期、体外传代次数以及供体动物性别等因素对克隆动物效率的影响及可能原因.     

体细胞核移植技术在粤东黑猪遗传资源保护上的应用

实验旨在通过体细胞核移植技术（Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT）探究不同品种、性别、细胞代数对猪耳成纤维供体细胞建系效果与体外克隆胚胎效率的影响,为我国优良地方猪种或濒危猪种的遗传资源保护提供新的有效途径。本研究对比分析了粤东黑猪、小耳花猪2个广东省地方猪种以及不同性别的粤东黑猪供体细胞的细胞建系效果,并统计分析了粤东黑猪不同细胞代数制备克隆胚胎的体外发育效率。结果表明,粤东黑猪体细胞冻存可能受个体差异与供体月龄的影响,而体细胞核供体猪个体差异也会导致部分克隆胚胎的卵裂率存在显著差异,但对囊胚率无显著影响。同时本研究也证实,至少在3代（F1～F3）内,供体细胞的不同代数对粤东黑猪克隆胚胎体外发育效率无显著影响。本研究为优秀地方猪种的品种改良、保种提供了可行手段,为地方特色猪种的遗传资源保护奠定了技术基础。     

供体细胞种类及性别对猪体细胞核移植效果的影响

本研究通过比较胎儿成纤维细胞、颗粒细胞、卵丘细胞和不同性别猪胎儿成纤维细胞的核移植效果,探讨供体细胞的种类及性别对猪体细胞核移植重构胚胎发育潜力的影响。结果表明:胎儿成纤维细胞的融合率(64.74%)高于颗粒细胞的融合率(51.05%)和卵丘细胞的融合率(56.89%),但3种细胞的卵裂率及囊胚率差异不显著(P>0.05);胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和卵丘细胞均可作为供体细胞用于构建猪体细胞核移植的重构胚。雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的融合率和分裂率与雌性胎儿成纤维细胞重构胚的融合率和分裂率相比差异不显著(P>0.05),但雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率显著低于雌性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率(P<0.05)。     

小白鼠颗粒细胞核移植操作问题的探讨

小白鼠颗粒细胞核移植技术是指将小白鼠的颗粒细胞,通过显微手术和细胞融合的方法,移植到一个去核卵母细胞中,构成重组胚胎(克隆胚胎),然后移植给受体,获得与核供体基因型相同的后代(克隆动物)的生物技术。目前,在核移植操作过程中还存在着许多问题,影响了核移植的效率。1供体和受体细胞的获取1.1超数排卵超数排卵是核移植中获取供体和受体细胞的关键技术。小白鼠的超数排卵常用孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)[1]。由于小白鼠的个体差异以及不同的饲养环境,注射激素的剂量有所不同,剂量过大或过小都有可能影响超数排…     

小鼠体细胞核移植研究进展

体细胞核移植是目前生物技术领域研究的热点之一。小鼠作为一种广泛使用的实验动物模型,具有遗传背景清楚、繁殖周期短、饲养成本较低等优点,因此小鼠体细胞核移植具有较大的研究价值。作者简要回顾了小鼠体细胞核移植的发展史,并对体细胞核移植方法、影响核移植效率的因素,包括供核细胞的类型、供核细胞的体外处理、核质细胞周期协调、重构胚的激活、体外培养体系及核移植分子机制等进行了综述,并展望了小鼠体细胞核移植的应用前景。     

猪体细胞克隆和基因编辑技术研究

体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer，SCNT）是一种将已分化的细胞重编程恢复其全能性，进而生产与供体细胞基因型完全相同后代的无性繁殖技术。     

猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究

本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系.观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70％～80％汇合、血清饥饿法和100％接触抑制法)对重构胚发育能力的影响.结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44 h的卵母细胞以浓度0.4 μg· mL-1作用0.5～1 h为宜.(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11％ vs 9.25％,P＞0.05).(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P＞0.05).(4)用70％～80％汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P＜0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P＞0.05).研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考.     

影响猪体细胞核移植效果的因素

克隆技术的研究已经取得了丰硕的成果,但猪体细胞核移植还受到众多因素的制约,克隆效率仍然较低,文章针对猪体细胞核移植的各项技术环节及影响因素进行探讨与分析,以期加快猪体细胞核移植技术的研究,提高猪体细胞核移植效率,进一步促进猪体细胞核移植技术的发展和运用。     

表观遗传修饰影响哺乳动物体细胞核移植效率的研究进展

表观遗传修饰是一种不依赖于DNA序列变化的可逆、可遗传修饰，在哺乳动物胚胎发育的整个阶段均可发生，是影响哺乳动物体细胞核移植效率的主要因素之一。其中，DNA甲基化、组蛋白的动态修饰、X染色体失活、端粒与端粒酶活性变化作为常见的表观遗传修饰类型，任一修饰形式的异常都会影响基因的表达，引发体细胞重编程错误导致核移植效率降低。近年来，随着体细胞核移植技术研究的不断深入，表观遗传修饰影响体细胞核移植效率的关键作用机制日益明确。本文通过综述不同类型的表观遗传修饰影响哺乳动物体细胞核移植效率的研究进展，以期在表观遗传修饰层面为提高哺乳动物体细胞核移植效率提供新思路。     

DNA甲基转移酶抑制剂在动物体细胞核移植研究中的应用

甲基化对胚胎发育和机体形成具有重要的调控作用,体细胞核移植胚胎常常表现出异常的DNA甲基化,DNA甲基转移酶抑制剂能抑制细胞的DNA甲基化水平,从而达到提高体细胞核移植效率的作用。作者主要综述了DNA甲基转移酶抑制剂在动物体细胞核移植研究中的应用。     

培养液添加物与去核方法对猪体细胞核移植效率的影响

综述了在卵母细胞的成熟、去核和后期发育过程中添加化学成分对体细胞核移植效率的影响,以期对改进体细胞核移植效率提供参考.     

提高猪核移植效率相关技术的研究进展

1989年,Prather〔1〕首次报道猪胚细胞核移植后代诞生。1997年,Wil mut等〔2〕利用体细胞作核供体克隆出“多莉”羊,在世界范围内掀起了体细胞克隆的热潮。由于猪器官的解剖结构和生理生化特性与人类的相近,其材料来源较为充足、方便,因此,猪有可能成为人类异种器官移植的首选供体动物,引起了科学家的极大兴趣。但是和牛相比,猪的核移植难度较大,大约只有1%的克隆胚胎移植后能完成妊娠(不包括没有获得后代的试验),这主要是因为影响猪核移植效率的因素太多。本文重点综述有关影响猪体细胞核移植几个重要环节的研究进展。1受体细胞及卵母细胞…     

猪体细胞核移植的影响因素

动物体细胞核移植技术对于优良种畜的复制、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培养以及人类疾病的治疗都具有重要的意义;近几年猪体细胞核移植研究取得了一定的进展,但总体看来核移植效率还很低,还需要对一些关键技术的深入研究和不断完善核移植操作程序,通过对猪体细胞核移植的关键技术及影响因素进行探讨与分析,以其加快猪体细胞核移植技术的研究,提高猪体细胞核移植的效率,进一步促进猪体细胞核移植技术在生产中应用。     

昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外培养条件初步研究

本研究旨在探索影响小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)分离培养的因素,建立有效的胚胎成纤维细胞培养体系,为构建饲养层细胞与体细胞核移植技术的细胞核供体建立平台。本研究用组织细胞培养液DMEM作为基础培养液,观察了不同胎龄、不同血清浓度及不同胰蛋白酶作用时间等因素对MEF分离培养的影响。结果显示,在所进行的4个胎龄8.5、10.5、12.5、14.5 d的比较试验中,原代成纤维细胞分离培养的最适胎龄为12.5 d,细胞贴壁迅速,12 h已完全贴壁,增殖速度快;在所进行的不同时间5、10、15、30 min的胰蛋白酶消化中,最佳时间为5~10 min;在所进行的5个血清浓度7%、9%、10%、11%、13%的比较试验中,添加11%胎牛血清浓度培养效果最佳,从3~5代增殖倍数稳定在1.35左右,传代时间也相对较长。以上结果表明,采用12.5 d胎鼠,胰蛋白酶消化5~10 min,在含有11%血清的DMEM培养液中培养MEF细胞时,原代和传代效果最好,传代至第3~5代时细胞生长增殖最旺盛,处于对数分裂期,适宜作为饲养层细胞与体细胞核移植细胞核供体。