实验室污染对氯霉素残留检测的影响

分析实验室氯霉素污染来源及其对氯霉素残留检测的影响.以乙腈为溶剂,对实验台面、实验器具表面的污染物进行收集,应用液相色谱-质谱法(HPLC-MS/MS),对收集液中的氯霉素含量进行测定;以浸泡过氯霉素的实验器具为阳性对照,考察实验器具的清洗方法对氯霉素去除效果.结果表明:大部分实验器具的污染物提取液检出了氯霉素,阳性实验器具清洗后仍检出氯霉素.实验室污染可能造成实验结果假阳性,因此,建立有效的预防体系避免实验室污染,对减少痕量分析中假阳性的出现具有重要意义.     

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测假阳性的原因与预防措施

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)荧光PCR检测是防控非洲猪瘟(African swine fever,ASF)的关键环节。江苏省动物疫病预防控制中心对两家具备ASF检测资质的实验室,进行了阳性样品复核,发现检测结果存在假阳性。为避免实验室检测中出现检测失误,本文分析了导致ASFV检测假阳性结果的原因:实验室检测功能区域设置以及人员、物品流向不合理;检测人员操作不规范、不熟练,未在独立的生物安全柜中进行样品提取与试剂配制;实验室通风不良、清洁消毒不彻底,样品或提取模板间产生交叉污染,PCR试剂、产物、阳性质粒发生污染。为此,从实验室结构、环境、操作等方面提出控制建议:严格实验室功能分区与管理,规范各种试验操作与流程,加强实验室通风和消毒,控制试验中产生PCR污染的相关因素;同时省级实验室要加强对基层实验室的培训、指导和监督,使其在ASF防控中发挥应有的关键作用。本文为从事ASF等重大动物疫病PCR检测的实验室,在提高检测结果准确性和可靠性方面提供了参考。     

奶牛场荧光定量PCR检测实验室建设实践与思考——以原生态牧业奶牛场实验室建设为例

荧光定量PCR技术用于病原微生物基因表达、基因组变异和多态性检测等,具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,已广泛用于临床诊断和畜禽疫病诊断。本文以黑龙江原生态牧业奶牛场荧光定量PCR检测实验室建设为例,从设计规划、配套设备、人员配备、环境控制及存在问题解决五大方面进行论述,提出PCR实验室建设要根据奶牛场场地实际情况,规划适合PCR实验检测区域;根据PCR检测需求及奶牛场费用预算配置实验设备;根据奶牛场预计检测样品量配备检测人员及培养储备人员;在建立严格的操作规范基础上,严格执行实验分区管理及检测过程中消毒流程,避免实验过程中产生气溶胶污染环境。     

巢式PCR在动物疫苗支原体污染检测中的应用

在动物疫苗研制过程中,应用巢式PCR方法,设计两套引物,扩增支原体16S与23SrRNA基因间隔区序列,可以检测造成细胞污染的常见支原体种类。本试验应用该方法检测三批样品和阴性对照均无特异性目标条带,即三批疫苗样品支原体检测均为阴性。阳性对照样品在200-400bp之间出现特异性目标条带,实验表明所建立的巢式PCIL方法是一种快捷、灵敏、准确的检测方法,可以用于检测动物疫苗细胞培养物中支原体污染。     

鸡毒支原体MG荧光定量PCR技术评估实验室MG核酸污染方法

为了评估鸡毒支原体(MG)非免疫鸡群的MG感染,常采用MG荧光定量PCR技术进行监测;而在鸡群的MG净化监控前,需要对实验室进行MG核酸污染评估,无污染后才能进行后续的净化检测工作.本实验采用MG荧光定量PCR技术评估实验室各区域的MG核酸污染情况,如果存在核酸污染,需要采取一系列的消毒措施,直至实验室MG核酸污染监控...     

猪链球菌2型荧光PCR检测方法与常规检测方法的比较

为验证猪链球菌2型荧光PCR检测方法对临床样品检测的敏感性和适用性以及该方法所拥有的独特优点,分别用荧光PCR法、常规PCR法和细菌分离法对人工感染猪链球菌2型的小鼠肝脏和发病猪的心、肝、脾、肾等实质器官和血液、喉拭子进行抗原检测。结果显示,荧光PCR法检出率为70.8%,明显高于普通PCR法（检出率为20.8%）,也高于常规细菌分离法（检出率为45.8%）。由于临床样品常常会被其他细菌污染,细菌分离法很难准确分离到链球菌。但荧光PCR法不受其他细菌污染的影响,对实验室培养的猪链球菌2型菌液,该方法检测滴度可达10-6/0.1mL（42～52 CFU/0.1 mL）,而普通PCR方法检测滴度仅为10-4。     

应用聚合酶链式反应检测细胞培养物和细胞培养用小牛血清支原体污染

支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题，直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示，3种细胞系的第一次PCR扩增结果为全部为阳性，检出率为100％；11种细胞培养用小牛血清第一次PCR扩增后8种样品为阳性，对第一次PCR扩增为阴性的血清样品进行第二次PCR扩增结果全部为阳性．检出率100％。传统的支原体检测繁琐、费时、周期长而受到限制，本试验使用的套式PCR法为细胞培养工作中检测支原体污染提供了一种敏感、快速、特异的方法。     

青海省2017—2019年州县级兽医系统实验室检测能力比对

为全面了解和提升兽医系统实验室检测能力,2017—2019年青海省动物疫病预防控制中心连续3年组织州县级兽医实验室开展检测能力比对工作.根据每年疫病的流行态势,设置PCR、ELISA以及传统类检测等比对项目.结果显示:2017—2019年实验室总体准确率分别为50.00％、56.82％、74.47％,样品总正确率分别为...     

动物疫病监测样品采集的注意问题

实验室检测是目前动物疾病诊断的重要内容,特别是传染性疫病更离不开实验室检测,实验结果的准确性、有效性除实验方法、检测试剂、实验操作等因素影响外,从一开始就受到样品的采集、保存、运输等因素的影响。特别是在开展动物疫病的监测工作,监测结果是否具有代表性,是否能够真实反映出疫病的真实情况都与监测样品的采集有重要关系。     

猪病防控中实验室检测的应用与注意事项

近年来,猪发生的疾病种类不断增多,病情复杂,死亡率增加,给我国养猪业造成巨大的经济损失,仅靠流行病学和病理变化等有时很难对病因做出正确的判断,因此,必须借助实验室方法对猪病进行诊断,以便做出相应的防控措施,使养殖场的损失降到最低,文内就实验室开展的检测工作、检测对猪病防控的意义、送检样品的要求和检测结果的评价等进行论述,旨在为今后广大兽医工作者在猪病防控中能更好的开展实验室检测工作提供参考。     

霍乱弧菌及肠出血性大肠杆菌多重PCR检测方法的建立

针对霍乱弧菌肠毒素和肠出血性大肠杆菌志贺毒素基因（ctx、stx1和stx2）设计引物,扩增大小不同的特异性片段,优化反应条件,建立多重PCR方法,对人工污染的水样品进行模拟检测。结果显示,多重PCR扩增系统针对目的菌具有高度的特异性。敏感性试验证实,当多重PCR反应体系中模板含量在10CFU时仍能检出。模拟水样品多重PCR检测的敏感性试验证明,人工污染的河水直接集菌检测敏感性为100～1 000CFU/mL,增菌培养后多重PCR检测敏感性可达1CFU/mL。本试验于同一PCR体系检测霍乱弧菌和肠出血性大肠杆菌的毒素基因,可用于这2种致腹泻性病原菌的快速检测。     

2018年全国省级兽医系统实验室检测能力比对结果分析

实验室检测能力比对是农业农村部加强兽医系统实验室管理的主要抓手,也是评价和提高实验室管理水平和检测能力的重要手段。按照《农业农村部办公厅关于开展2018年兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》[1]要求,中国动物疫病预防控制中心组织实施了2018年兽医系统省级实验室能力比对,全国32个省级兽医实验室参加,在规定时间内完成了比对样品制备、分发、检测和结果回收。     

动物疫病监测样品采集应注意的事项

实验室检测是目前动物疾病诊断的重要内容,特别是传染性疫病更离不开实验室检测.实验结果的准确性、有效性除受实验方法、检测试剂、实验操作等因素影响外,从一开始就受到样品的采集、保存、运输等因素的影响.特别是在开展动物疫病的监测工作,监测结果是否具有代表性,是否能够真实反映出疫病的真实情况,都与监测样品的采集有重要关系.     

2022年湖南省兽医实验室检测能力比对及非洲猪瘟检测能力验证

实验室检测能力比对与能力验证是评估实验室检测质量的重要手段。2022年4月,按照农业农村部关于检测能力比对的工作部署和要求,湖南省组织全省14个市级77个县级兽医系统实验室开展了检测能力比对,267个实验室开展了非洲猪瘟能力验证。市级开展禽流感病毒H5/H7亚型核酸鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、O型口蹄疫病毒抗体检测3个项目,县级开展非洲猪瘟病毒核酸、O型口蹄疫病毒抗体以及布鲁氏菌抗体检测3个项目,非洲猪瘟检测实验室开展非洲猪瘟病毒核酸检测项目,每个项目各5份盲样。结果显示:12个市级和59个县级系统实验室所有比对项目检测结果全部准确,实验室整体准确率为78.02%,1 355份样品中1 317份样品检测结果准确,样品整体准确率为97.20%;267个参加非洲猪瘟能力验证的实验室中,224个实验室核酸检测结果准确,实验室整体准确率为83.90%,1 335份样品中1 265份样品结果准确,样品整体准确率为94.76%,其中屠宰企业样品准确率最低(93.30%)。结果表明:湖南省兽医实验室检测能力整体良好,但部分县级兽医系统实验室及屠宰企业实验室检测能力有待加强。各地应继续加强实验室检...     

荧光定量PCR在非洲猪瘟检测中的常见问题与解决方案

非洲猪瘟的横空出世,极大促进了荧光定量PCR技术在规模猪场疫病检测实验室中的普及,但荧光定量PCR检测对其操作人员的要求很高。CT值显示异常和实验过程操作不够规范是很多实验室在非洲猪瘟检测中经常遇到的问题,为了得到准确的结果,严格控制实验过程中的污染和掌握实验过程中的操作细节尤为重要。     

RT—PCR技术常见问题的分析

聚合酶链式反应（Polimerasechainreaction，简称PCR技术）具有特异性强、灵敏度高、简便快速、对原始材料质量要求低的特点，为兽医分子生物技术实验室中的首选方法之一。但因该技术高度的灵敏性容易导致交叉扩增反应，出现假阳性结果等，现就其常见问题作一探讨。１PCR技术常出现的几个问题１．１假阳性实验中设立的阴性对照出现阳性结果，则实验检测结果可能有假阳性。造成假阳性的原因主要包括监测样品污染、监测试剂污染、扩增产物污染等。１．２假阴性实验中设置的阳性对照未能扩增成阳性结果，则实验可能有假阴性结果。但应注意，…     

单重PCR鉴别犬4种布鲁氏菌检测方法的建立

为建立适合犬布鲁氏菌病临床检测的单重PCR方法,通过对比粗糙型（犬种）与光滑型（羊种、牛种和猪种）布鲁氏菌基因组DNA的序列差异,设计1对引物并优化反应条件,建立了可初步鉴别犬4种布鲁氏菌的PCR方法,然后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对20份犬布鲁氏菌血清学阳性的血液样品进行临床检测。结果显示,利用建立的PCR反应体系对牛种、羊种和猪种布鲁氏菌均能扩增出717 bp的目的条带,对犬种布鲁氏菌能扩增出366 bp的目的条带;最低可检测到犬种、羊种、猪种和牛种布鲁氏菌基因组DNA浓度分别为5.07×10-2、6.20×10-2、7.80×10-3和5.50×10-2 ng/μL;20份血液样品中共检测到3份犬种布鲁氏菌阳性样品,与使用GB/T 18646—2018引物的PCR检测结果一致。结果表明,本试验建立的单重PCR方法简捷、特异、敏感,适合基层兽医实验室对犬布鲁氏菌病的检测与鉴定。     

食品中产单核细胞李斯特菌PCR检测方法的建立

根据产单核细胞李斯特菌hlyA基因设计引物,进行PCR扩增,检测该方法的特异性和灵敏度。人工污染样品经Half-fraser和Fraser增菌后进行PCR检测。结果表明,产单核细胞李斯特菌扩增出234bp的条带,对照菌未扩增出目的条带。该方法的灵敏度为104cfu/mL。人工污染样品的检出限为8cfu/25g,说明PCR方法检测食品中产单核细胞李斯特菌具有快速、特异、敏感等特点,具有较高的实用价值。     

PCR实验常见污染的原因及对策

聚合酶链式反应（PCR）是分子生物学技术的一种,由于其反应特异性强,操作简单、快速,对纯度要求低,且灵敏度高等优点,被广泛应用于兽医实验室的检测、监测等工作中。PCR实验室布局要求严格,需设置四个区域,一是试剂储存和准备区,二是样本制备区,三是扩增反应混合物配置和扩增区,四是扩增产物分析区。进入各个区域进行操作必须遵循单一方向原则,避免交叉污染。虽然PCR实验室布局设计要求严格,但是在基层实验室实际操作中还会遇到一些污染问题。在实验过程中,极其微量的污染都会造成实验结果的不准确以致实验失败。     

乳粉中黄曲霉毒素M1的检测能力验证

设计并实施乳粉中黄曲霉毒素M1（aflatoxin M1,AFM1）的检测能力验证计划,了解和评价实验室检测乳粉中AFM1的检测能力和水平,识别实验室间存在的差异,促进实验室提高检测水平。参照CNAS—CL002《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》制备分割水平对的样品,采用单因素方差分析和t检验对样品均匀性和稳定性进行分析。对能力验证结果进行稳健统计分析,通过Z值比分数评价实验室能力。结果表明：样品通过均匀性和稳定性的检验要求,满足能力验证计划要求;参加实验室49 家,满意结果数为45 家,满意率为9