越橘果实总RNA提取方法比较研究

越橘成熟果实富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢物质,严重影响果实总RNA的提取.试验以越橘成熟果实的果肉和果皮为试材,采用适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒及试剂和改良的CTAB法提取越橘果肉和果皮中总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测.结果表明,改良的CTAB法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高.通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆等分子生物学试验的要求.     

大豆种传南方菜豆花叶病毒和烟草环斑病毒的GICA-RT-PCR检测

南方菜豆花叶病毒(south bean mosaic virus,SBMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)是我国重要的进境检疫性有害生物,两种病毒均为种传病毒,可随大豆种子实现远距离传播.本研究以这两种病毒的大豆病种子为试材,先用胶体金免疫层析试纸条(GICA)检测,将检测完病毒后的胶体金免疫层析试纸条上的T线和C线剪下,再用RT-PCR的方法将T线和C线上捕获的病毒直接进行扩增,这种将血清学与分子生物学相结合起来所建立的GICA-RT-PCR检测方法,省去了烦琐的总RNA提取的环节,简化了病毒检测的步骤,提高了检测的灵敏度.     

利用内标为基础的RT-PCR技术检测草莓皱缩病毒(SCV)和草莓镶脉病毒(SVBV)

[目的]通过对反应条件和参数的摸索与优化,建立多重RT-PCR检测方法,实现2种病毒的同时高效快速检测。[方法]通过CTAB法与试剂盒提取RNA,以优质的总RNA为模板,进行梯度PCR,结合扩增内标的检测体系,建立多重RT-PCR检测方法。[结果]建立了优化的SCV和SVBV的多重RT-PCR检测体系,可以对草莓田间植株进行快速稳定的病毒检测。[结论]该研究为草莓病毒检测提供一种方便、高效的分子生物学方法,为草莓无病毒苗的实际生产提供技术支撑。     

冬种马铃薯卷叶病田间调查及RT-PCR检测技术研究

对惠州市冬种马铃薯卷叶病发病情况进行调查研究,建立了马铃薯卷叶病毒(PLRV)RT-PCR检测技术。结果表明,马铃薯卷叶病发病率为3.0%～29.7%。比较LiCl、异硫氰酸胍和试剂盒3种方法提取马铃薯卷叶病毒总RNA,以异硫氰酸胍和试剂盒提取效果较好,LiCl次之;根据卷叶病毒外壳蛋白基因序列设计引物,从感染马铃薯卷叶病毒的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,合成cDNA并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约336bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而健康叶片RNA扩增未得到任何产物。应用RT-PCR技术对马铃薯试管苗和种薯进行了卷叶病毒检测。     

同步检测为害非洲菊3种病毒的多重RT-PCR方法研究

以接种番茄斑萎病毒(TSWV)的烟草和侵染烟草脆裂病毒(TRV)及烟草花叶病毒(TMV)的非洲菊为试验材料,建立了同步检测非洲菊上述3种病毒的多重RT-PCR方法.结果表明,建立的多重RT-PCR方法可一次性扩增出 3 种病毒的DNA条带,可以从RNA含量1 mg的带毒叶片中检测到混合病毒;同时对单一病毒RT-PCR的灵敏度检测表明:最低可以从RNA含量分别为1 mg、10μg和100 ng的带毒材料中检测到TSWV、TRV和TMV.     

菊花叶片总RNA提取方法的比较研究

以菊花C008的叶片为试材,分别采用CTAB法、Trizol法、改良Trizol法和试剂盒法等进行总RNA提取试验,并对提取质量进行分析比较。结果表明:CTAB法提取的总RNA存在DNA污染。Trizol法提取的总RNA条带复杂,有蛋白等杂质污染。改良Trizol法提取的总RNA条带清晰,但RNA存在降解。试剂盒法提取的总RNA条带清晰,纯度更高,D_(260nm)/D_(280nm)为1.889,浓度为144.000μg/m L,是适于菊花叶片总RNA提取的简单、高效的方法。     

鸢尾属植物花器官总RNA不同提取方法的比较分析

【目的】为了探索更适合鸢尾属植物花朵总RNA的提取方法。【方法】以新鲜的鸢尾(Iris tectorum Maxim.)和冷冻的西南鸢尾(I. bulleyana Dykes)的花蕾为材料,分别采用Trizol法、Trans Zol Plant试剂盒法和EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法等3种方法提取它们的花蕾总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,利用超微量紫外分光系统检测RNA的纯度和浓度,比较3种不同试剂提取得到的总RNA的质量和浓度。【结果】对于冷冻的西南鸢尾花蕾组织,只有Trans Zol Plant试剂盒法可以提取出纯度好、浓度高的RNA。而对于新鲜的鸢尾花蕾,3种方法提取出的RNA均可用于后续试验,但质量和浓度有一定差异,EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法提取出的RNA质量最好且产量较高; Trans Zol Plant试剂盒法提取出的RNA质量较好但产量最高; Trizol法提取出的RNA品质较好但产量最低。【结论】综合植物样品材料、RNA纯度和得率及费用等因素,EasyPure Plant RNAKit试剂盒法适合需要获得高质量的RNA和有新鲜的植物材料时使用; TransZol Plant试剂盒法适合在需要大量RNA但对RNA的质量要求不是很高时使用,且较适合应用于冷冻的鸢尾花朵。研究结果为鸢尾属植物的分子生物学深入研究提供一定研究基础,也为其它植物花朵总RNA的提取提供必要的参考。     

三种梨果皮总RNA提取方法的比较研究

以西洋梨品种‘早红考密斯’、‘香红蜜’和白梨品种‘华酥’成熟果实为试材,采用Plantol总RNA提取试剂盒法、改良CTAB法和SDS法提取果皮中总RNA,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR检测所提取总RNA样品的质量.结果表明,Plantol试剂盒法和改良CTAB法提取的RNA,经RT-PCR后得到的条带清晰,与目的片段大小一致,可以满足基因表达分析等试验的要求;而SDS法所提取的部分RNA,RT-PCR扩增不到目的片段,难以达到进一步试验的要求.     

利用内标为基础的多重RT-PCR技术检测草莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒

草莓斑驳病毒(SMoV)和草莓轻型黄边病毒(SMYEV)分布较广,危害较重。应用CTAB法提取草莓总RNA,以优质的草莓总RNA为模板,结合扩增内标的检测体系,建立了SMoV和SMYEV的多重RT-PCR检测体系,可以对草莓田间植株和试管苗进行快速稳定的病毒检测。     

延边黄牛体细胞克隆囊胚中总基因组RNA的提取

以延边黄牛体细胞克隆囊胚为试验材料,采用试剂盒GMS12106的使用方法提取试材的总基因组RNA,在琼脂糖凝胶电泳检测后,得到最适的囊胚数为5个。通过试验发现,生殖细胞的特殊生理结构限制了RNA提取的效果。为提取完整、纯度高的RNA,采用链蛋白酶对囊胚的透明带进行了消化处理,最终得出链蛋白酶处理的最适时间为10min,提取的RNA质量好,可为后续试验奠定基础。     

高效液相色谱法检测饮料中阿斯巴甜的含量的不确定度评估

[目的]评估高效液相色谱法检测饮料中阿斯巴甜含量的不确定度。[方法]用高效液相色谱法测定饮料中阿斯巴甜的含量,对整个测量过程的不确定度来源进行分析,并对不确定度各分量进行了评估和合成。[结果]用GB／T22254—2008《食品中阿斯巴甜的测定》方法重复6次测定饮料中阿斯巴甜平均含量为（0．806±0．038）g／kg,k=2。影响过程不确定度的主要来源为样品称量过程、样品定容体积所引入标准溶液的配制过程、拟合标准曲线所引入的不确定度。①标准工作液的不确定度。标准工作液的合成不确定度为0．0139,包括标准样品纯度引入的不确定度0．0058、标准物质称量引入的标准不确定度1．49×10^-4、阿斯巴甜标准储备液配制过程中玻璃器具校准产生的相对不确定度0．00788、标准工作溶液配制过程中玻璃器具校准产生的不确定度0．0099。②样品试样制备过程引入的不确定度。包括样品称量过程的相对标准不确定度0．009和样品定容过程引入的不确定度0．00078。③标准曲线拟合过程不确定度。曲线拟合的相对不确定度为0．00246。阿斯巴甜测定结果的不确定度为0．0170,合成总的相对标准不确定度为0．0239,扩展标准不确定度为0．019。[结论]标准溶液、标准曲线和重复性的不确定度分量是不确定度的主要来源,待测样品的称量和定容的不确定度分量占的比例不大。     

高效液相色谱法检测饮料中阿斯巴甜的含量的不确定度评估(摘要)(英文)

[目的]评估高效液相色谱法检测饮料中阿斯巴甜含量的不确定度。[方法]用高效液相色谱法测定饮料中阿斯巴甜的含量,对整个测量过程的不确定度来源进行分析,并对不确定度各分量进行了评估和合成。[结果]用GB/T22254-2008《食品中阿斯巴甜的测定》方法重复6次测定饮料中阿斯巴甜平均含量为(0.806±0.038)g/kg,k=2。影响过程不确定度的主要来源为样品称量过程、样品定容体积所引入标准溶液的配制过程、拟合标准曲线所引入的不确定度。①标准工作液的不确定度。标准工作液的合成不确定度为0.013 9,包括标准样品纯度引入的不确定度0.005 8、标准物质称量引入的标准不确定度1.49×10-4、阿斯巴甜标准储备液配制过程中玻璃器具校准产生的相对不确定度0.007 88、标准工作溶液配制过程中玻璃器具校准产生的不确定度0.009 9。②样品试样制备过程引入的不确定度。包括样品称量过程的相对标准不确定度0.009和样品定容过程引入的不确定度0.000 78。③标准曲线拟合过程不确定度。曲线拟合的相对不确定度为0.002 46。阿斯巴甜测定结果的不确定度为0.017 0,合成总的相对标准不确定度为0.023 9,扩展标准不确定度为0.019。[结论]标准溶液、标准曲线和重复性的不确定度分量是不确定度的主要来源,待测样品的称量和定容的不确定度分量占的比例不大。     

不同提取工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量的比较

[目的]测定不同提取工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量。[方法]设计试验比较重量法和非水滴定法的准确度,并采用重量法测定了不同工艺制备的海藻肥中甜菜碱的含量。[结果]不同工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量最高为18.76 mg/m L,碱提取工艺制备的海藻肥中甜菜碱含量最低为10.60 mg/m L。[结论]生物方法提取的海藻肥中甜菜碱活性成分损失少,而化学方法提取的海藻肥中甜菜碱活性成分损失大。     

气相色谱法检测宁夏枸杞中联苯菊酯残留量

以宁夏中宁枸杞为研究对象,建立了检测枸杞中联苯菊酯残留量的毛细管气相色谱法.试样用乙腈提取,过CARB/NH2固相萃取柱,经丙酮/二氯甲烷净化洗脱,再过Florisil柱,经正己烷/二氯甲烷淋洗除杂,乙酸乙酯洗脱,正己烷定容,采用DB-1701毛细管色谱柱分离,GC-ECD进行分析.结果表明,中宁枸杞中联苯菊酯含量为0.002 2 μg/g,RSD为3.55％,样品加标回收率为92.47％,RSD为1.70％.该方法简便、快速、灵敏、准确,符合农药残留分析要求,研究结果为枸杞质量控制提供了一定的参考价值.     

镉·汞胁迫对豌豆种子的毒害效应

[目的]缓解重金属离子对豌豆种子的毒害作用。[方法]采用水培方法,研究镉、汞单一胁迫及复合胁迫对豌豆种子萌发、幼苗叶绿素含量及过氧化物酶活性的影响。[结果]镉、汞单一胁迫及复合胁迫对豌豆种子萌发均有抑制作用,单一汞胁迫对豌豆幼苗的毒害作用最大,镉、汞复合胁迫次之,单一镉胁迫最小。幼苗叶绿素含量最高的是单一镉胁迫,其次是镉、汞复合胁迫,单一汞胁迫的叶绿素含量最低。单一汞胁迫的灰度值是单一镉胁迫的67.00%,镉、汞复合胁迫的灰度值是单一镉胁迫的91.32%;单一汞胁迫的酶带迁移率最大,镉、汞复合胁迫次之。[结论]汞胁迫对豌豆种子的毒害作用大于镉胁迫,镉、汞复合胁迫的毒害作用介于两者之间。     

农村沼气主要成分简易快速测定方法

[目的]寻找适宜在农村应用的简易快速测定沼气主要成分的方法。[方法]用1 ml注射器抽取发酵沼气,利用KOH或NaOH溶液吸收沼气中的CO2,可测定出沼气中CO2含量,并与气相色谱仪法测定的沼气中CO2含量进行比较,然后换算出沼气中CH4含量。[结果]利用NaOH、KOH溶液都能较准确地测定沼气中CO2的含量,且差异不显著(P>0.05)。该简易快速测定法与气相色谱法测定的CO2含量存在极显著相关(P<0.01)。利用KOH溶液测定沼气中CO2含量的变异系数为1.19%,在气相色谱仪允许范围内。[结论]该研究建立的测定方法简便、快速,测定沼气中CO2含量的精确性较高,适合在目前农村沼气池运行管理中应用。     

防虫帐防控杨梅果蝇及改善果实品质的研究

为了明确防虫帐对杨梅果蝇发生以及产量品质、贮藏性、安全性和经济效益的影响,从2012—2013年连续2年对浙江临海东魁杨梅进行防虫帐单株挂帐试验。结果表明,东魁杨梅挂防虫帐对防治果蝇效果显著,有虫果率与对照相比降低了5714～9524个百分点。挂防虫帐杨梅单果重与对照相比平均增加218 g,果实硬度提高了014 kg·cm-3,果实成熟期也分别比对照推迟3～4 d以上,贮藏期延长,色泽更亮丽。挂防虫帐处理单株产值与对照相比平均增加7719元。防虫帐作为一种新型的绿色防控措施,具有防虫效果好、显著延长贮存期、提高杨梅果实品质和经济效益等优势,具备在生产上规模化应用的良好前景。     

纳米增效肥料对冬小麦产量及品质影响的研究

[目的]探索纳米增效肥料对冬小麦的应用效果。[方法]通过不同地域的田间试验,研究纳米增效肥料对冬小麦产量及品质的影响。[结果]施用纳米增效肥料,小麦的增产幅度在12.34%~19.76%。纳米增效肥料使小麦蛋白质含量减少7.52%,脂肪含量增加33%。高量尿素肥料比低量型纳米增效肥料增产2.31%,但低量型纳米增效肥料比高量尿素肥料节省肥料用量为150 kg/hm2,有明显省肥效果;中量型纳米增效肥料为秋季一次性施肥,比高量尿素肥料节省春季两次追肥工序,增产17.0%,还有省工效果。[结论]该研究为纳米材料在肥料应用方面的机理研究奠定了基础。     

阿克苏绿洲农业生态经济系统的能值动态分析研究

[目的]对新疆阿克苏绿洲农业生态经济系统2002～2007年的能值投入产出、能值产出率、环境负载率与能值可持续发展指标等进行系统分析.[方法]应用能值理论分析方法.[结果]该绿洲农业生态经济系统能值总投入、能值总产出均呈逐年增加趋势,2007比2002年能值总投入增加了50.7;,并以不可更新工业辅助能为主;能值总产出增加160.13;,其中以种植业和林果业产出增长较快;种植业结构从以粮食为主转变为以经济作物为主;能值产出率维持在较低水平,历年来均为0.05;环境负载率逐年增大,2007年达到8.32,是全国平均水平的2.97倍,可持续发展能值指标总体呈下降趋势.[结论]该绿洲环境压力较大,应该保护和开发可更新环境资源,合理利用不可更新资源,使系统处于可持续发展态势.     

小麦自噬标志分子ATG6的原核表达及其抗血清制备

克隆小麦(Triticum aestivum L.)品种‘洛夫林10’(L10)中的ATG6(动物同源物为Beclin1)基因,并构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,经纯化后制备其兔抗血清。结果表明:从小麦品种L10中克隆获得1个ATG6的片段,长为1326 bp,利用所构建的大肠杆菌表达载体,经IPTG诱导,实现了对ATG6片段在原核系统的特异性表达。经蛋白纯化后,制备了其兔抗血清并通过Western blot鉴定了其特异性。ATG6抗体制备的成功,为小麦中ATG6基因和自噬功能的研究提供了研究基础。