用于检测小鹅瘟抗体的Dot-ELISA建立

以小鹅瘟病毒(GPV)VP1-VP3非重叠序列重组原核表达多肽为检测抗原,建立了鉴别GPV全病毒抗体与VP3亚单位抗体的Dot-ELISA.该方法中检测抗原包被浓度为70ng/斑点,兔抗鹅IgG-HRP标记抗体的最适稀释度为1:200,被检血清最佳稀释度为1:400.特异性试验的结果中,检测抗GPV抗体的阳性率为100%,而抗GPV-VP3禽痘重组病毒抗体的阳性率为0,表明其有很好的特异性与灵敏度.     

鹅细小病毒单抗双夹心ELISA检测方法的建立

为建立鹅细小病毒(GPV)检测方法,本研究以兔抗GPV IgG为捕获抗体,抗GPV单克隆抗体为检测抗体,通过方阵试验确定了兔抗GPV IgG最适包被浓度为16 mg/L,抗GPV单克隆抗体最佳工作浓度为10.8 mg/L,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000,建立了检测GPV单抗双夹心ELISA方法,对GPV检测灵敏度达0.312 mg/L.用该法对延边某养鹅场疑似发生小鹅瘟病的252只病死鹅进行检测,结果阳性率为75.79%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率迭91.11%.本研究建立的单抗双夹心ELISA方法为GPV的检测和区城流行病学调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法.     

番鸭和鹅细小病毒PCR鉴别方法的建立

根据基因库中番鸭细小病毒(MDPV)FM株和鹅细小病毒(GPV)的B株的基因序列设计了3个引物PVC、MDPVdn、GPVdn，分别用MDPV—DNA、GPV—DNA、MDPV尿囊液、GPV尿囊液、鸭瘟病毒尿囊液、传染性喉气管炎病毒尿囊液和无离子水对照，以PVC／GPVdn和PVC／MDPVdn特异引物在同一条件下进行PCR扩增，产物经10g／L的琼脂糖凝胶电泳分析。在PVC／GPVdn系统中，MDPV—DNA、MD—PV尿囊液、DP、ILT和无离子水对照无条带，其余样品均出现约460bp的条带，在PVC／MD—PVdn系统中，只有MDPV—DNA、MDPV—GPV混合DNA、MDPV尿囊液中出现约900bp的条带，其余无特异性核酸带，对MDPV—DNA的敏感性达O．5pg，对MDPV尿囊液敏感性为1000ELD50／5弘L，对GPV—DNA的敏感性为0．5pg，对GPV尿囊液敏感性为10ELD50／5μL。分别将不同时间提取0．5ng／μL MDPV—DNA、0．5ng／μL GPV—DNA、MDPV尿囊液、GPV尿囊液和无离子水对照样，以PVC／GPVdn和PVC／MD—PVdn特异引物进行PCR扩增3次，结果稳定。表明该PCR检测技术可灵敏、快速鉴别番鸭和鹅细小病毒。     

抗鹅细小病毒单克隆抗体的制备及其免疫荧光检测方法的建立

为建立免疫荧光检测鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）的方法，本研究利用超速离心纯化的GPV作为免疫原，制备了3株抗GPV特异性单克隆抗体，依次命名为GPV-Mab-6C8、GPV-Mab-1B9、GPV-Mab-2H8。试验结果表明，3株抗GPV抗体特异性良好，并能够中和GPV对鹅胚成纤维细胞的感染能力。利用抗GPV单抗作为一抗，FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测GPV的间接免疫荧光方法（indirect immunofluorescence assay, IFA），该方法不仅能够检测鹅胚成纤维细胞中的GPV，还能够检测发病鹅组织冰冻切片中的GPV。本研究制备的抗GPV特异性单克隆抗体和建立的检测GPV的免疫荧光方法，为今后GPV细胞活疫苗的检测评价和临床诊断提供了技术手段。     

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原，通过优化ELISA反应条件，初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法，监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5．0μg／mL，血清最佳稀释倍数为1：100，ELISA阳性反应的临界值为D490nm≥0．219，批内和批间重复试验的变异系数均小于10％。应用该方法对试验小鼠血清进行检测，结果表明，建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性，适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。     

大田软海绵酸单克隆抗体ELISA检测方法的建立

利用BALB／c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸（okadaic acid，OA）的单克隆抗体，并以此抗体为探针建立了0A的快速、灵敏、简便的ELISA检测方法——直接和间接竞争抑制性ELISA方法，2种检测方法的回归方程和相关系数分别为：y=-38．678χ＋130．01，R^2=0．9886和y=-34．212x＋83．49，R^2=0．9784，线性范围为1.56～75μg／L和0.4425μg／L，对OA的最低检出质量浓度为0．6μg／L和0．18μg／L。并利用所建立的2种ELISA方法对贝类模拟样品及实际样品进行了检测，样品回收率分别为84．72％和98．38％。结果表明，此方法可满足海产品中贝类样品0A限量标准检测。     

马立克病肿瘤相关抗原间接ELISA检测方法的建立

用自制并纯化的马立克病肿瘤相关表面抗原（MATSA）免疫SPF级BALB／c小鼠制备阳性对照抗体，以SPF级BALB／c小鼠血清为阴性对照抗体，筛选间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。结果，包被液为0．1mol／L pH9．6的碳酸盐缓冲液，抗原包被浓度为4μg／mL，封闭液为含10g／LBSA的PBST，抗血清稀释比例为1：800，酶标抗体稀释比例为1：1200，酶标抗体作用时间为37℃温育45min，底物作用时问为37℃温育15min，终止液为2mol／LH2SO4，洗涤4次，每次1min为最佳反应条件。将建立的方法应用于MATSA单克隆抗体研制过程中阳性克隆的筛选，成功获得了MATSA的单克隆抗体，表明该优化条件为间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。     

以免疫活性串联片段FB为抗原检测FMDV抗体的间接ELISA方法

将口蹄疫病毒免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD／TOPO中，得到重组质粒pBAD-FB，将此重组质粒转化到受体茵TOPIO中，以不同浓度的阿拉伯醛糖进行诱导，并在不同诱导时间进行采样，经处理后做SDS-PAGE、Western-blotting分析。结果发现以终浓度为0．02g／L的阿拉伯醛糖进行诱导，4h后表达量可达高峰，其大小约为26ku，扫描结果显示，FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的28．9％，能与抗FMDV抗体发生特异性反应，融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。将融合蛋白的可溶性组分用500g／L Ni-NTA树脂过柱纯化后作为包被抗原，成功地建立了检测血清中FMD抗体的间接ELISA方法。融合蛋白的最佳包被浓度是40μg／mL；标准阳性血清的最适稀释倍数为1：160；最佳封闭液为50g／L脱脂奶粉和PBS；最佳封闭时间为1h。用建立的ELISA方法对采集的118份样品进行检测，并与全病毒包被抗原ELISA、间接血凝诊断试剂盒和UBI VP1抗体检测ELISA试验盒的检测结果比较，证明所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性。     

用地高辛标记核酸探针检测鹅细小病毒的研究

从带有鹅细小病毒(GPV)NSI基因的重组质粒pMD18T-NS1用限制性内切酶EcoRI和BamH1双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0．01pg／μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交,而与对照的DPV、GPPV等病毒的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对GPV的最低检出量为0．0224pg。该探针对不同方法处理的GPV感染病料进行检测,均出现杂交阳性。表明所研制的标记探针用于GPV的检测足可行的。     

柔嫩艾美球虫间接ELISA检测方法的建立

将已构建的原核表达载体pET—Mzp5—7在大肠埃希氏菌中诱导表达，以融合重组蛋白为包被抗原，以HRP标记的鼠抗鸡IgG为二抗，建立了检测柔嫩艾美球虫抗体的间接ELISA方法。经筛选，该方法的最佳反应条件是：AMzp5-7重组蛋白最佳包被量为1．0μg／孔，100mL／L胎牛血清封闭，二抗的最佳工作浓度为1：160，用正常大肠埃希氏菌裂解上清液稀释待检血清。结果表明，建立的间接ELISA方法可用于监测柔嫩艾美球虫抗体，且具有快速、简便、成本低等优点。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Comparison of four techniques of arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint of the horse

Reasons for performing study: Clinical experiences indicate that centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint is often unsuccessful. Objective: To determine the accuracy of 2 published and 2 unpublished techniques of centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint. Hypothesis: It was hypothesised that a drug can be administered into the lateral compartment of the femorotibial joint via a diverticulum of this joint that surrounds the medial aspect of the long digital extensor tendon and that this technique is more accurate than described techniques of centesis of this compartment. Methods: Twenty‐four stifles of 12 horses were divided equally into 4 groups and a radiocontrast medium injected into the lateral compartment of the femorotibial joint of each group using a hypodermic needle inserted: 1) caudal to the lateral patellar ligament and proximal to the tibial plateau, 2) caudal to the long digital extensor tendon and proximal to the tibial plateau, 3) between the long digital extensor tendon and bone of the extensor groove of the tibia or 4) directly through the long digital extensor tendon until it contacted bone. Twelve veterinary students who had no experience using any of these techniques performed the injections. Accuracy of each technique was determined by examining radiographs obtained after injecting the contrast medium. Results: The most successful technique for arthrocentesis was by inserting a needle through the long digital extensor tendon. This approach was successful in all attempted cases, whilst other techniques had lower rates of success. Conclusions: The lateral compartment of the femorotibial joint can be accessed accurately by inserting a needle through the long digital extensor tendon as it lies within the extensor groove. Other techniques may not be as accurate for clinicians inexperienced in arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint.     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

Prevalence of diseases of the spinal cord of cats

A retrospective review of records of 205 cats with histologically confirmed disease of the spinal cord was performed to identify the prevalence of disease in this nonrandomly selected population of cats. Clinical records were reviewed, and age, duration of neurologic illness, and clinical and histopathologic findings in cats with spinal cord disease were abstracted. Disease processes were classified into 7 categories and 23 groups. The most common diseases affecting the spinal cord of cats were feline infectious peritonitis (FIP), lymphosarcoma (LSA), and neoplasia of the vertebral column secondarily affecting the spinal cord. Information on age, onset and duration of clinical signs, and lesion localization at the postmortem examination in cats belonging to the 7 categories of disease were analyzed to create a practical list of differential diagnoses. Cats were also subcategorized into 3 groups based on their age at death. FIP was the most common disease of cats younger than 2 years of age. LSA and vertebral column neoplasia were the most common diseases affecting cats between 2 and 8 years of age. Vertebral column neoplasia was the most common disease affecting cats older than 8 years of age. Results of this histopathologic study showed that FIP and LSA were the most common disease processes affecting the spinal cord of cats. However, at least 21 other groups of diseases and their relative prevalence were identified.     

高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素残留量的不确定度评定

根据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》建立了高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素残留测量的不确定度评定方法,评定过程包括建立测量程序、分析不确定度来源、对不确定度分量进行量化。将不确定度归类为两大类。随机效应导致的不确定度可以通过一系列具有统计意义的重复观测值进行A类评定;系统效应导致的不确定度通过各测量器具、设备的说明书、校准证书提供的参数进行B类评定。本方法鸡肉中土霉素残留量的相对合成标准不确定度约为3.9%。     

几个柑橘品种实生苗的抗旱性评价研究

以5个金柑属品种、枳壳、软枝酸橘及广西土柠檬实生苗为材料,进行复水成活率、旱害指数、叶片相对含水量、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、脯氨酸等生理指标及隶属函数的综合分析,为柑橘抗性砧木品种选育提供参考。结果表明：胁迫20d复水后的成活率融安滑皮金柑和长寿金柑最高,为100%,软枝酸橘最低,为88.9%;随着干旱胁迫加剧,各品种的旱害指数呈上升趋势,长寿金柑的旱害指数最低,为0.25,软枝酸橘的旱害指数最高,为0.61;从叶片相对含水量的结果来看,长寿金柑的变化幅度最小,软枝酸橘的变化幅度最大,在第18d时分别为61.19%和37.85%;3种保护酶之间相互协同作用减轻植株受害程度,其活性变化幅度与丙二醛和脯氨酸的含量变化相似。利用隶属函数法综合分析,得出各品种的抗旱性强弱依次为长寿金柑>枳壳>融安滑皮金柑>融安金柑>山金柑>广西土柠檬>金枣>软枝酸橘。     

两种绿头鸭肌肉营养成分分析及评价

本试验旨在研究两种绿头鸭（白羽绿头鸭和绿头鸭）肌肉营养组成和价值,为绿头鸭肉产品的开发利用提供基础数据和理论依据。选择白羽绿头鸭和绿头鸭60只（每个品种各30只,公母各半）,依照国家标准测定胸肌粗蛋白质、粗脂肪、胆固醇含量及氨基酸、脂肪酸、微量元素和维生素的组成和含量,并对胸肌进行氨基酸评价及脂肪酸营养价值评价。结果显示,白羽绿头鸭肌肉粗蛋白质含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;两种绿头鸭肌肉中均检测到17种含量大于0.01%的氨基酸,其中白羽绿头鸭肌肉苏氨酸、组氨酸、丝氨酸和脯氨酸含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,赖氨酸、谷氨酸和精氨酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到13种含量均大于0.01%的脂肪酸,其中白羽绿头鸭硬脂酸和油酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到9种矿物质元素（钠、镁、钾、钙、锰、铁、铜、锌和硒）,两种绿头鸭差异不显著（P>0.05）;检测到8种维生素,白羽绿头鸭肌肉维生素B₁含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,维生素D和维生素E含量显著低于绿头鸭（P<0.05）。两种绿头鸭肌肉氨基酸比例接近世卫组织推荐的理想模式,富含人体所需的矿物质元素和维生素,具有广阔的开发利用前景。