牦牛性激素结合蛋白基因克隆及组织表达研究

试验旨在阐明牦牛性激素结合蛋白（SHBG）基因CDS序列及其在母牦牛生殖轴中的表达特点,为探讨该基因在牦牛繁殖中的调控作用奠定基础。试验分别采集5头健康成年母牦牛和母黄牛的下丘脑、脑垂体前叶、输卵管、卵巢和子宫组织,根据NCBI公布的黄牛SHBG基因设计特异性扩增引物,分别采用RT-PCR技术、生物信息学方法和实时荧光定量PCR技术进行牦牛SHBG基因克隆、序列分析和组织表达检测。结果显示,牦牛SHBG核苷酸序列的编码区（CDS）全长为1 206 bp,共编码401个氨基酸,其中,亮氨酸（L）、甘氨酸（G）、脯氨酸（P）和丝氨酸（S）较多,含量分别为16.5%、9.7%、8.7%和9.0%。蛋白质分子式为C₁₉₄₄H₃₀₆₁N₅₃₅O₅₆₆S₁₀,分子质量为43.30 ku,理论等电点5.63,与黄牛核苷酸和氨基酸同源性分别为99.0%和97.5%。SHBG蛋白为亲水不稳定蛋白,存在跨膜结构和信号肽;二级结构中主要包含无规则卷曲和延伸链,与三级结构分析一致。系统进化树表明牦牛与黄牛亲缘关系最近。SHBG基因在牦牛输卵管的表达量显著高于其他组织（P<0.05）,其他组织之间差异不显著（P>0.05）。SHBG基因在黄牛输卵管表达量极显著高于牦牛（P<0.01）,在黄牛卵巢表达量显著高于牦牛（P<0.05）,两物种的其他组织中表达量差异不显著（P>0.05）。本研究探讨了牦牛SHBG基因序列及其在生殖轴的表达特性,为进一步研究SHBG基因对牦牛繁殖调控作用提供了一定理论依据。     

6月龄去势对延边黄牛生长性能、血液睾酮及生长激素水平的影响

为研究6月龄去势对延边黄牛生长性能及血液激素的影响,试验选用20头6月龄体重、体况相近的延边黄牛,随机分成2组,每组10头,试验组黄牛6月龄去势,对照组不去势,试验期12个月。试验期间在试验牛6、8、10、12、14、16及18月龄的当月12号称重并测量体尺,每次称重前一天早上空腹经颈静脉采血,检测血清睾酮和生长激素的含量。结果显示,试验期间试验组黄牛去势后体重均低于对照组,其中8月龄时差异显著（P < 0.05）;试验组延边黄牛体高、胸围、体斜长均低于对照组,但差异均不显著（P > 0.05）,6~8月龄时,试验组去势黄牛体高的增长显著低于对照组（P < 0.05）,12~14月龄时,试验组显著高于对照组（P < 0.05）,其他月龄间两组差异不显著（P > 0.05）。试验组黄牛去势后血清睾酮水平极显著或显著低于对照组（P < 0.01;P < 0.05）,试验组黄牛血液生长激素水平低于对照组,其中8月龄时差异显著（P < 0.05）。综上所述,6月龄去势能够降低延边黄牛体重的增长,但对体尺影响不大,且能降低延边黄牛血清睾酮及生长激素水平。     

广西3个地方黄牛品种mtDNA D-loop区序列多态性及起源分析

【目的】探究广西3个地方黄牛品种线粒体DNA控制区（mtDNA D-loop区）序列的多态性及其母系起源,为广西地方黄牛品种的选育、系统分类和开发利用提供科学依据。【方法】利用PCR扩增、测序和生物信息学方法对广西3个地方黄牛品种（南丹黄牛、隆林黄牛和涠洲黄牛）mtDNA D-loop序列进行多态性分析与系统发育进化树构建。【结果】从广西3个地方黄牛品种127个个体mtDNA D-loop区序列中检测到27种单倍型,其核苷酸多态位点65个,多态位点占所测核苷酸总长（908~912 bp）的7.143%,其中有61个转换、3个颠换和1个转换/颠换共存。广西3个地方黄牛品种mtDNA D-loop区单倍型多样度（H）为0.339~0.795,核苷酸多样度（π）为 0.31%~2.54%,表明广西3个地方黄牛品种mtDNA D-loop区的遗传多样性存在较大差异,其中,南丹黄牛具有更丰富的遗传多样性,隆林黄牛次之,涠洲黄牛的遗传多样性较贫乏。聚类分析结果表明,广西3个地方黄牛品种具有普通牛和瘤牛2大母系起源,受瘤牛起源影响更明显。【结论】广西3个地方黄牛品种具有瘤牛和普通牛两大母系起源,但受瘤牛影响更明显。隆林黄牛与南丹黄牛为瘤牛和普通牛的混合母系起源,而涠洲黄牛为纯正的瘤牛母系起源,因此,应加强对广西地方黄牛品种资源,尤其是对涠洲黄牛品种资源的保护力度。     

我国黄牛改良的效果与方向

我国黄牛改良的效果与方向雷雪芹，陈自刚，徐廷生（洛阳农业高等专科学校）１我国黄牛的种类我国黄牛遍布全国，头数最多（１９９３年末为８７１６．７万头），约占全国各类牛总头数的（１２６１３．６４万头）的６９．１％，居世界第四位。关于中国黄牛类型的划分问题，...     

湘西黄牛杂交组合育肥及肉质性能研究

选取18月龄湘西黄牛、西本（西门塔尔牛×湘西黄牛）、利本（利木赞牛×湘西黄牛）、西西本（西门塔尔牛×西本）、利西本（利木赞牛×西本）共24头,于舍饲条件下补饲精料,进行70d的育肥试验。结果表明：利西本三元杂交牛的增重水平和育肥效益明显优于其他组合和湘西黄牛,利西本三元杂交牛的日增重1.21 kg;屠宰率58.44%,净肉率47.68%;胴体质量与产量等级评定表明：利西本三元杂交牛牛肉指标达到了特级标准;产量达到了国内优质高档牛肉的重量标准。肉质特性测定表明：利本杂交牛肉品大理石纹较为丰富,利西本杂交牛肉品较细嫩、柔软;各组合间氨基酸含量差异不显著（P〉0.05）,而利西本和湘西黄牛臀肌总氨基酸含量、必需氨基酸含量显著高于背肌（P〈0.05）,其他组合间差异不显著（P〉0.05）。     

不同水平植物油对延边黄牛瘤胃内环境参数的影响

试验研究了添加不同比例的混合植物油对延边黄牛瘤胃内环境参数的影响。采用4&#215;3不完全拉丁方设计试验,选择4头安装永久性瘤胃瘘管的延边黄牛母牛（体重275&#177;20 kg）,试验日粮是在基础日粮中分别添加4%、5%、6%（以精料为基础）的混合植物油。试验结果表明：pH值变化范围为5.65-7.03,各组间各时间点的差异均不显著（P〉0.05）;添加植物油有降低纤毛虫数量的趋势,但各试验组与对照组无显著差异（P〉0.05）;NH3-N含量和BCP含量各组间均无显著差异（P〉0.05）。结论：在精料基础上添加6%水平以下的混合植物油对延边黄牛瘤胃发酵无影响。     

夏南牛脏器的食用品质和营养品质分析

[目的]为开发利用夏南牛脏器提供科学依据.[方法]以夏南牛肝脏和心脏为试验材料,普通黄牛为对照,对其心脏和肝脏的食用品质和营养品质进行分析.[结果]显示：夏南牛肝脏亮度（L＊）为29.62,比普通黄牛高7.29％,但差异不显著,心脏的L＊值略高于普通黄牛;夏南牛肝脏红色度（a＊）极显著低于普通黄牛（P＜0.01）,心脏红色度（a＊）显著低于普通黄牛（P＜0.05）;夏南牛肝脏黄色度（b＊）为5.38,显著低于普通黄牛（P＜0.05）,心脏黄色度（b＊）比普通黄牛低16％.夏南牛肝脏pH为5.96,略高于普通黄牛,心脏pH略低于普通黄牛,但均在正常范围内.夏南牛肝脏和心脏的熟肉率均极显著高于普通黄牛（P＜0.01）.夏南牛肝脏和心脏中的水分含量均略高于普通黄牛,灰分含量均显著高于普通黄牛（P＜0.05）;脂肪含量方面,夏南牛肝脏中的含量比普通黄牛高25.5％,心脏中含量显著高于普通黄牛（P＜0.05）;蛋白质方面,夏南牛肝脏和心脏中的含量均显著高于普通黄牛（P＜0.05）.[结论]夏南牛心脏、肝脏具有蛋白、脂肪含量高,矿物质丰富的特点,是一种优质的肉品资源.     

水牛甲状旁腺素基因克隆与生物信息学分析

本研究参考黄牛甲状旁腺素（parathyroid hormone,PTH）基因序列设计引物,运用PCR扩增技术对水牛PTH基因进行克隆,并用生物信息学方法对序列进行分析。结果显示,成功克隆了水牛PTH基因完整编码区序列（CDS）348 bp,可编码115个氨基酸。该基因编码区序列与黄牛、猪、马、山羊、绵羊和骆驼的同源性分别为99%、93%、91%、97%、96%和92%,表明PTH基因在不同物种间高度保守。系统进化树分析表明,水牛与黄牛PTH基因亲缘关系最近。此外,在水牛PTH基因CDS上共发现了3个碱基突变,其中两个属于同义突变,一个属于错义突变。氨基酸序列分析表明,该蛋白属于碱性、亲水、稳定型蛋白质,其分子式为C₅₇₀ H₉₄₁ N₁₆₇ O₁₆₄ S₈,分子质量为13.01 ku。二级结构分析显示,水牛PTH蛋白以α-螺旋和无规则卷曲为主,与三级结构预测结果相一致。亚细胞定位分析显示,水牛PTH蛋白分布在细胞质（26.1%）、线粒体（21.7%）、细胞外（包括细胞壁）（17.4%）、内质网（13.0%）、细胞核（8.7%）、高尔基体（4.3%）和其他部位（8.7%）,推测PTH蛋白可能在运输、结合及细胞被膜等方面发挥信号转导和转录调控作用。     

西藏地区改良黄牛和本地黄牛血液代谢指标和肉品质的差异比较

试验的目的是比较高海拔地区改良黄牛与本地黄牛血液生化指标和肉品质的差异。从血液中氨基酸的含量来看．本地黄牛蛋氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸5种氨基酸的含量均显著高于改良黄牛（P〈0．05）；色氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、亮氨酸、组氨酸和精氨酸10种氨基酸的含量，本地黄牛均高于改良黄牛，但差异不显著（P〉0．05）；苏氨酸、谷氨酸和脯氨酸3种氨基酸的含量，本地黄牛均低于改良黄牛的含量，但差异不显著（P〉0．05）；本地黄牛的总氨基酸、必需氨基酸、非必需氨基酸和鲜味氨基酸的含量均高于改良黄牛（P〉0．05）。从血液生理生化指标上来看，总胆固醇、尿素氮、总抗氧化能力3项指标，本地黄牛显著大于改良黄牛（P〈0．05）；低密度脂蛋白胆固醇的指标含量，本地黄牛高于改良黄牛，且极显著（P〈0．01）；补体第四成分、甘油三酯、葡萄糖、IgA、IgG、IgM、丙二醛、过氧化氢酶、脂蛋白胆固醇9项指标．本地黄牛均高于改良黄牛，但不显著（P〉0．05）；极低密度脂蛋白、C3、总蛋白、超氧化物歧化酶4项指标，本地黄牛均低于改良黄牛．但差异不显著（P〉0．05）。从肉品质上来看，改良黄牛和本地黄牛的大理石纹评分、眼肌面积、剪切力、蒸煮损失等指标均无显著差异（p〉0．05）。     

海北州黑白花奶牛和黄牛唾液钠、钾含量的测定

对青海省海北州西海镇的30头黑白花奶牛和20头黄牛的唾液钠、钾含量进行了测定。结果表明：（1）黑白花奶牛唾钠为98．63mmol/L，唾液钾为16．87mmol／L, 钠／钾之比为6．68／1；（2）黄牛唾液钠为121．6mmol/L，唾液钾为16．41mmol/L，黄／钾之比为10．97／1；（3）黑白花奶牛和黄牛的唾液钠含量之间有显著性差异（P＜0．05）。     

低磷、高氟、低硒性黄牛跛行的病因学研究

以饲料和土壤低磷、高氟、低硒为线索，检测跛行黄牛血清中碱性磷酸酶（ALP）、羟脯氨酸（HYPRO）、维生素D以及甲状旁腺素（PTH）等钙、磷代谢的相关指标的动态变化，探讨低磷、高氟、低硒对黄牛骨骼和肌肉的影响，以及这些致病因素之间的相互关系，为黄牛跛行病的病因学诊断和防治提供依据。结果显示：（1）土壤和饲料低磷，导致黄牛血清低磷及钙磷比例失调是引起黄牛跛行的直接因素。（2）土壤、饲料高氟是加重钙磷代谢障碍引发跛行的主要因素。（3）黄牛硒缺乏导致的肌肉损伤，是引发跛行的并发因素。     

牦牛CRH基因克隆及其在生殖轴中的表达研究

为了探讨促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin-releasing hormone，CRH）基因在牦牛繁殖中的调控作用，试验分别采集5头成年母牦牛和5头成年母黄牛的下丘脑、脑垂体前叶、输卵管、卵巢和子宫等组织，通过RT-PCR技术及生物信息学软件对牦牛CRH基因编码区进行扩增、克隆及序列分析，并构建系统进化树；采用实时荧光定量PCR法检测CRH基因的组织表达。结果表明，牦牛CRH基因编码区全长573 bp，编码190个氨基酸。牦牛与黄牛、猫、鸡、人、小鼠、大鼠和猪的CRH基因核苷酸同源性分别为99.8%、43.3%、36.1%、46.2%、39.0%、38.5%和56.4%。系统进化树表明，牦牛与黄牛亲缘关系最近，并与其他物种类聚，符合物种进化规律。CRH蛋白分子式为C₉₂₀H₁₅₀₃N₂₇₉O₂₆₃S₃，分子质量为20776.95 u，理论等电点为10.95，其氨基酸组成中亮氨酸（L）、脯氨酸（P）、丙氨酸（A）和精氨酸（R）所占比例较高，分别为15.8%、12.6%、12.1%和10.5%。CRH蛋白为不稳定亲水蛋白，存在信号肽和跨膜结构。CRH蛋白二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占41.05%、1.05%、8.42%和49.48%，三级结构分析结果与其相一致。CRH基因mRNA在牦牛下丘脑中表达量最高，显著高于其他组织（P<0.05），在子宫中表达量最低。牦牛脑垂体前叶CRH基因mRNA表达量极显著高于黄牛（P<0.01），在卵巢、输卵管中表达量显著高于黄牛（P<0.05），而两个品种在下丘脑、子宫中的表达量差异不显著（P>0.05）。提示CRH基因在牦牛繁殖调控中具有重要作用。     

牦牛Bcl-2、Bax基因克隆及其在生殖轴上的表达分析

试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性，并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点，为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品，通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因，并采用生物信息学软件进行序列分析；利用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2与Bax基因在牦牛与黄牛不同组织中的表达差异。结果表明，牦牛Bcl-2编码区全长690 bp，编码229个氨基酸；与黄牛Bcl-2基因核苷酸序列同源性最高，为99.86%，其次是山羊、绵羊，同源性分别为98.41%、97.97%；系统进化树表明，牦牛与黄牛亲缘关系最近。牦牛Bax基因编码区全长579 bp，编码192个氨基酸，与黄牛、藏山羊和金堂黑山羊同源性较高，分别为99.83%、99.48%和99.48%，其次是绵羊、马、人，同源性分别为99.14%、95.34%、94.30%；系统进化树表明，牦牛与黄牛亲缘关系最近。Bcl-2和Bax蛋白不存在信号肽，均为酸性不稳定的疏水蛋白。Bcl-2与Bax基因在黄牛及牦牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达，其中牦牛卵巢、子宫中Bcl-2基因表达量分别显著和极显著高于黄牛（P<0.05；P<0.01）；牦牛子宫、输卵管中Bax基因表达量显著高于黄牛（P<0.05），牦牛卵巢中Bcl-2/Bax比值极显著高于黄牛（P<0.01），子宫和垂体中显著高于黄牛（P<0.05）。表明Bcl-2与Bax在动物进化中非常保守且在繁殖活动中起重要作用，牦牛卵巢、子宫、输卵管和垂体中的高表达量可能与牦牛处于极端恶劣环境的细胞抗凋亡作用有关。     

我国黄牛肉用性能研究报告（下）

我国黄牛肉用性能研究报告（下）蒋洪茂（北京市农林科学院肉牛研究所，１０００８１）３我国黄牛牛肉品质评定牛肉品质优劣的指标很多（如牛肉的嫩度、多汁性、牛肉色泽、牛肉的大理石花纹、系水性等等），但可以用数量化的指标却不多，我们研究工作中作了量化的指标只有...     

鲁西黄牛体细胞克隆保种技术的研究

以体外培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞作核供体，研究利用体细胞克隆技术保存我国地方黄牛优良品种的技术方法。通过组织块培养法建立的鲁西黄牛（1♂，4♀）成纤维细胞系，作为核移植供体细胞，利用屠宰场母牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后作为核受体进行核移植，试验结果表明：重构胚的融合率为62．5％（242／387），分裂率为63．6％（154／242），体外培养第7天囊胚发育率为42．9％（66／154）。体外培养第7天的囊胚的内细胞团细胞（ICM）与滋养层细胞数平均为37和47，ICM占44．2％。体外发育到7d的囊胚新鲜胚胎的移植妊娠率（新鲜胚胎）移植受体10头，60d妊娠率为20％（2／10）。     

3个中国地方黄牛品种遗传结构及其遗传分化的研究

利用12对微卫星引物对中国3个地方黄牛品种（鲁西黄牛、渤海黑牛及闽南黄牛）及2个对照群体（中国荷斯坦牛和青海牦牛）的群体遗传结构、遗传分化及基因流水平进行研究，结合聚类分析，结果表明：5个牛群体总近交系数（Fit）为58．5％，群体内近交系数（Fis）为43．2％，群体间基因分化系数（Fst）为26．9％，3个指标均达到极显著水平（P〈0．001）。5个牛群体内近交系数（R）鲁西黄牛最高（0．640），青海牦牛最低（0．231）。鲁西黄牛与荷斯坦牛间每世代群体间有效迁移个体数（Nem）最大（1．149），牦牛与鲁西黄牛间最小（0．509）。5个牛群体每个体属于所属群体的平均概率从91．4％到98．5％不等。结合聚类分析、基因流分析及STRUCTURE分析结果，5个牛群可分为3大类：鲁西黄牛和中国荷斯坦牛为一类，渤海黑牛和闽南黄牛为一类，牦牛自为一类，这说明在鲁西黄牛和渤海黑牛的形成过程中，鲁西黄牛受普通牛影响较大，而渤海黑牛受瘤牛影响较大，同时探讨了以上品种的演化与形成过程。     

迪庆黄牛血液蛋白多态性及其在中国黄牛中的地位

本研究采用淀粉凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定云南迪庆黄牛血清白蛋白（Ａ１ｂ）、血清运铁蛋白（Ｔｆ）、血清碱性磷酸酶（Ａｂｐ）和血红蛋白（Ｈｂ）等四个位点的基因频率。为分析迪庆黄牛这一高原类型地方牛种在中国黄牛中的地位，利用本研究的迪庆黄牛以及文献报道的中国１０种黄牛的四个多态位点的等位基因频率资料，计算标准遗传传距离，并进行聚类分析。结果表明：迪庆黄牛独自一类，来自于青藏高原的迪庆黄牛在中国黄牛中占有十分重要的地位．结合文物考证资料，推测青藏高原很可能是中国黄牛的发源地。     

按运铁蛋白多态性分析青海黄牛与其它黄牛的遗传关系

按血清运铁蛋白等位基因频率分析了柴达木黄牛和青海东部黄牛与我国其它地方品种黄牛间的遗传关系，如果发现，黄牛与蒙古牛、延中、复 州牛、蒙山牛和安西牛等北方品种黄牛的遗传距离最短（0．00305－0．06131），且与这些品种牛聚成一个树系。由此将青海黄牛归属于诺－蒙古利亚系统的第一大类无峰牛内。     

miR-93对延边黄牛垂体细胞GH分泌的影响

为了分析血液外泌体miRNA对延边黄牛垂体细胞生长激素（GH）分泌的影响,试验选择在延边黄牛和韩延牛血液外泌体中存在显著差异表达的miR-93,分析其对延边黄牛垂体细胞GH分泌的影响机制。试验首先进行延边黄牛垂体细胞的原代培养,之后将miR-93的mimics（miR-93-mi组）、mimics对照品（NC对照组）、inhibitor（miR-93-in组）、inhibitor对照品（iNC组）转染给已建立的垂体原代细胞,48 h后收集细胞,提取总mRNA和总蛋白。试验利用targetscan和RNAhybrid分析软件对miR-93的靶基因进行预测,并利用双荧光素酶报告基因系统对miR-93的靶关系进行验证;利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测靶基因mRNA转录和蛋白的表达情况,结果表明,miR-93靶向了生长激素释放激素受体（GHRHR）的3'UTR;与NC对照组比较,miR-93-mi组的延边黄牛垂体细胞中GH mRNA转录和蛋白表达均极显著低于NC对照组（P<0.01）;miR-93-mi组的GHRH mRNA转录和蛋白表达均极显著低于NC对照组（P<0.01）,而miR-93-in组的GHRHR蛋白表达显著高于iNC对照组（P<0.05）。说明miR-93可通过调节GHRHR的表达而调控延边黄牛垂体细胞GH的分泌,进而调控延边黄牛的生长发育。     

低水平缩合单宁对以豆粕和苜蓿为底物的体外发酵特性的影响

试验旨在研究低水平缩合单宁对以豆粕和苜蓿为底物的体外发酵特性的影响,以期筛选出缩合单宁的最佳添加水平,为缩合单宁作为反刍动物功能性添加剂提供科学依据。试验选用平均体重（405.1±22.9）kg的4头延边黄牛提供瘤胃液,以豆粕和苜蓿干草为底物,分别添加不同水平（0、0.3%、0.6%、0.9%）缩合单宁。采用体外培养法,测定延边黄牛瘤胃体外发酵指标。结果表明：豆粕0.9%缩合单宁添加组（以下简称豆粕0.9%组）pH显著低于豆粕对照组（P<0.05）;豆粕0.9%组和豆粕0.6%组总产气量显著低于豆粕对照组和豆粕0.3%组（P<0.05）,苜蓿0.9%组和苜蓿0.6%组总产气量显著低于对照组（P<0.05）;各苜蓿缩合单宁添加组微生物蛋白（microbial protein,MCP）含量显著低于苜蓿对照组（P<0.05）;豆粕0.9%组和苜蓿0.9%组总挥发性脂肪酸（total volatile fatty acid,TVFA）含量和乙酸含量均显著低于各自对照组（P<0.05）。综上所述,豆粕0.9%组、苜蓿0.9%组显著降低了总产气量,对瘤胃膨胀病的预防有...