亚麻转基因植株的再生及生根培养的研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体 ,利用抗除草剂 Basta的目的基因和 GUSINT基因 ,采用农杆菌介导法进行了亚麻转基因过程中植株再生及生根适宜培养基的筛选试验。经试验得出 :在附加少量 BA和 NAA的 Ms培养基上愈伤组织的再分化率可达31.8%～ 40 .2 %。经 GUS基因检测在脱菌后 3天亚麻下胚轴初步形成的愈伤组织的转化率可达 72 .2 %;四周后的转化率为 2 5 %;再生植株的转化率为 2 0 %。在 1/2 Ms培养基中附加 0 .0 0 1mg/L NAA可使再生植株的生根率达到 87.4%。通过试验初步建立起了根瘤农杆菌介导法亚麻转基因系统。     

亚麻转基因植株的再生及生根培养的研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体,利用抗除草剂Basta的目的基因和G USINT基因,采用农杆菌介导法进行了亚麻转基因过程中植株再生及生根适宜培养基的筛选试验.经试验得出:在附加少量BA和NAA的Ms培养基上愈伤组织的再分化率可达31.8%～40 .2%.经GUS基因检测在脱菌后3天亚麻下胚轴初步形成的愈伤组织的转化率可达72.2%;四周后的转化率为25%;再生植株的转化率为20%.在1/2Ms培养基中附加0.001mg/L NAA 可使再生植株的生根率达到87.4%.通过试验初步建立起了根瘤农杆菌介导法亚麻转基因系统.     

利用农杆菌介导法进行亚麻转基因的培养基研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体进行了卡那霉素选择压力的试验。确定5 0mg/L为适宜的选择压力。同时采用农杆菌介导法 ,利用EHA1 0 5菌株进行了亚麻转基因适宜培养基筛选试验。经试验认为MS培养基是亚麻转基因的适宜培养基。在附加IAA3.5mg/L、KT2mg/L、LH1 5 0mg/L的MS选择培养基上转化外植体的愈伤组织的诱导率可达 77.4%。     

利用农杆菌介导法进行亚麻转基因的培养基研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体进行了卡那霉素选择压力的试验.确定50mg/L为适宜的选择压力.同时采用农杆菌介导法,利用EHA105菌株进行了亚麻转基因适宜培养基筛选试验.经试验认为MS培养基是亚麻转基因的适宜培养基.在附加IAA3.5mg/L、KT2mg/L、LH150mg/L的MS选择培养基上转化外植体的愈伤组织的诱导率可达77.4%.     

AGPase基因转化木薯获得转基因植株的研究

通过农杆菌介导法将一个提高淀粉含量的AGPase基因在块根特异启动子的调控下成功导入木薯华南8号(SC8)基因组,并获得转化抗性再生植株25株,转化率为1.20%。经生根初筛有19株转化植株能在抗性生根培养基生根,经PCR、Southern等分子检测证实这19株转化植株为转基因植株。     

紫罗兰愈伤组织诱导及植株再生的研究

以紫罗兰幼苗子叶、子叶柄、下胚轴作外植体接种MS附加不同激素的培养基诱导愈伤组织，并进一步诱导分化出芽及再生植株。子叶和下胚轴外植体在MS＋0.1mg/LNAA培养基上愈伤组织发生率达100％，下胚轴愈伤组织转移MS 0.1mg/L 6-BA培养基上易诱导分化出小苗，分化频率达67％，再生小苗在1／2MSA＋0.2mg/L IBA培养基上生根率达86％。     

“热研11号”黑籽雀稗植株再生体系的建立

以热带牧草"热研11号"黑籽雀稗(Paspalum atratum cv.Reyan No.11)种子为材料,对其外植体植株的再生过程进行系统研究.结果表明,以MS无机盐 9.0mg/L维生素B1 9.5mg/L维生素B6 4.5mg/L尼克酸 1.0mg/L水解酪蛋白 30.0g/L蔗糖 8.0g/L琼脂为基本成分(MSM),附加植物激素类物质2.0mg/L2,4-D时,适合种子的愈伤组织形成,愈伤诱导率可达65%:继代培养基附加1.0mg/L2,4-D和0.1mg/LKT:分化的培养基附加6.0mg/L6-BA,分化率可达50%;生根培养基附加0.5mg/L激素类物质NAA,生根率100%.完成植株再生约需13周.     

农杆菌介导的小麦幼胚遗传转化体系的优化

为了优化农杆菌介导的小麦幼胚转化体系,通过对4个小麦品种河农827、石新828、河农825、良星99的幼胚组织培养及再生系统的研究表明,在改良培养基MSW1和MSW2中,小麦幼胚胚性愈伤组织诱导率与MSW0培养基相比分别提高了6.0%和5.4%,并且显著提高了植株再生能力。采用混合正交试验设计,对农杆菌遗传转化过程中小麦幼胚的诱导培养基、诱导时间、农杆菌侵染浓度、侵染时间进行了优化。结果表明,在诱导培养基MSW2,诱导培养6d,OD660=1,侵染时间3h时,愈伤GUS瞬时表达率及抗性愈伤成活率最高,对河农827成活的抗性再生植株进行PCR检测,获得了候选转基因植株。     

小黑豆组织培养的研究

以应县小黑豆的下胚轴、子叶、小真叶为试验材料,研究不同培养基对小黑豆愈伤组织诱导和器官分化的影响.结果表明:NAA和BA单独使用不利用小黑豆的离体培养,细跑分裂素与生长素结合使用有利于小黑豆愈伤组织的诱导和器官分化.下胚轴在Ms BA2mg/L IAA0.5mg/L、Ms BA1.5mg/L IAA0.5mg/L Ms KT2mg/L NAA0.2mg/L培养基中植株再生频率为46%、46%、16%,在前两种培养基中下胚轴外植体分化出丛生芽.小黑豆下胚轴愈伤组织诱导率、再生植株分化率较子叶、小真叶高.     

向大豆导入深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的初步研究

通过农杆菌介导法，将深黄被孢霉△^6-脂肪酸脱氢酶基因导入到栽培大豆吉育43，黑农36，黑农37等品种。采用多种外植体和感染方法，从子叶节和胚轴诱导出丛生芽与再生植株，经过在含50mg/L卡那霉素的筛选培养基中连续筛选，获得一批转基因植株。经PCR检测和DNA分子杂交分子，初步证明外源基因已导入并整合到大豆基因组中。     

甜菜原生质体培养再生植株的研究

以栽培甜菜的未授精胚珠或胚为外植体，在ＭＳ附加ＮＡＡ和ＢＡ的培养基上诱导愈伤组织，选择胚性愈伤组织进行继代培养，从该愈伤组织分离原生质体并以液体浅层法或半固体琼脂糖法培养在一系列培养基上，植板率为０．０１％～１．２％．再生愈伤组织形成后，转入固体培养基（ＭＳＢ）上培养，再转入分化培养基上分化出苗，分化率可达２．５％，由愈伤组织上切下分化苗在生根培养基上很容易诱导生根。     

花生小叶外植体植株再生及农杆菌介导的基因遗传转化

鄂花四号、中花四号和豫花一号萌动４ｄ的小叶作外植体，通过器官再生在ＭＳ培养基加３ｍｇ／ＬＢＡＰ和１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导芽分化，转至ＭＳ加５ｍｇ／ＬＢＡＰ上诱导芽伸长，再生植株。芽诱导率为８６％～１００％，每个外植体平均再生５个植株。在培养基中加入１ｍｇ／ＬＡｇＮＯ３和５００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素能有效抑制愈伤褐化和死亡，并能提高植株再生率。萌动４ｄ的小叶与农杆菌ＡＧＬ１分别共培养２ｄ，通过在再生培养基中加卡那霉素筛选，获得转基因再生植株，转基因植株生根后，移栽网室生长，并已开花结荚。外源基因的表达通过卡那霉素抗性和Ｇｕｓ活性组织化学检测得到证实。     

亚麻体细胞无性系的建立及其植株再生

以亚麻无菌苗（７－１０天培养）切取的茎尖和下胚轴作为外植株，分别接种于Ｎ６、Ｂ５基础培养基，均附加ＩＡＡ４ｍｇ／Ｌ、ＫＴ２ｍｇ／Ｌ和ＬＨ２００ｍｇ／Ｌ，经过四个星期的离体培养，获得具备不定苗发生能力的愈伤组织，诱导率平均达９４．２％。然后把它们转移至继代培养基中进行再分化培养，培养得到绿苗及胚性愈伤组织，分化频率平均达６．３倍。切取下的绿苗植于改良后的Ｂ５培养基上进行生根培养，生根率达９０％以上。     

农杆菌介导的小麦成熟胚遗传转化影响因素分析

为解决农杆菌介导的小麦成熟胚遗传转化效率较低的难题,以春小麦Bobwhite成熟胚为外植体,分析植物激素、愈伤组织预培养时间、侵染时间和共培养阶段干燥处理对小麦成熟胚愈伤组织遗传转化的影响,并在遗传转化处理中辅以3个组织再生相关基因(TaSERK1、TaSERK2、TaNiR)的qRT-PCR分析。结果表明,愈伤组织预培养阶段添加适量的2,4-D和Picloram均可诱导成熟胚愈伤组织的形成,但是2mg·L~(-1)Picloram培养基中愈伤组织的胚萌发率为20.78%,远高于2,4-D诱导的胚萌发率(11.38%);共培养阶段对农杆菌侵染的愈伤组织进行干燥处理能适当提高愈伤组织的转化效率;qRT-PCR分析发现再生相关基因TaNiR相对表达量的增加能适当提高愈伤组织的转化率。     

木质素合成酶基因反义COMT对亚麻的转化及检测

COMT基因主要参与S木质素的生物合成,转基因植物在COMT活性被抑制时,木质素含量减少,利用杨树皮储藏蛋白(BSP)启动子和该基因构建成反义植物表达载体p BSP-antiCOMT-2301,利用农杆菌介导法将其转入亚麻,经过卡那霉素筛选获得了抗性的愈伤组织,诱导分化后获得了亚麻苗。经特异引物的PCR扩增,证明目的基因已经整合到亚麻基因组中,本研究获得的阳性转基因亚麻植株为亚麻纤维研究及品种选育奠定了坚实基础。     

亚麻转基因中抗生素应用效果的研究

在利用农杆菌介导法进行亚麻抗除草剂草丁膦(Basta)目的基因(Bar)导入工作中；对选择培养基内加入．500mg/l克拉维酸钾(timentin进口) 200mg/l头孢噻肟(claforan进口)的抗菌素来取代500mg/l头孢噻肟(Cefotaxime国产)不仅脱菌效果彻底，期效长，且不影响亚麻愈伤形成和芽的分化；同时对再生植株进行了盆栽Basta抗性筛选试验，获得不同抗性的植株和种子。     

农杆菌介导短柄草遗传转化体系的建立

为了探索短柄草的遗传转化体系,以二倍体短柄草ABR 6为受体材料,通过对诱导培养基类型、潮霉素筛选浓度和根癌农杆菌侵染浓度等参数的优化,建立了农杆菌介导短柄草遗传转化体系。结果表明,来源于未成熟胚的胚性愈伤组织在LS培养基上诱导率最高,达76.27%,最佳Hpt筛选浓度为40 mg·L^-1,最佳农杆菌侵染浓度为OD₆₀₀=0.6,在此条件下ABR 6的转化效率可达5%;通过PCR检测12株抗性植株,发现7株能扩增出Hpt基因（845 bp）条带;通过荧光显微镜观察转基因植株叶片,发现绿色荧光蛋白的表达,进一步证实了转基因植株的可靠性。     

基于玉米自交系E28的农杆菌介导与基因枪转化体系的建立及比较

以玉米自交系E28的胚性愈伤组织为受体,分别利用农杆菌介导法和基因枪轰击法对携带有GUS基因和Bar基因的质粒进行转化,借助GUS基因的瞬时表达率和抗性愈伤组织比例建立体系,并对两种方法进行比较。农杆菌介导法以OD6000.6、浸染30 min、25℃共培养3 d、加入0.01%的silwet L-77为最佳参数;基因枪轰击法为4.5 MPa、11 cm轰击距离最佳参数。农杆菌介导法与基因枪轰击法的GUS瞬时表达率没有显著差异,基因枪法的抗性愈伤组织比例显著高于农杆菌介导法,基因枪轰击法较农杆菌介导法更有利于获得转基因后代。     

根癌农杆菌介导的水稻转化系统的优化及转反义Wx基因植株的获得

以具不同直链淀粉含量的籼粳稻品种为受体材料,试验了适宜于根癌农杆菌介导转化的水稻愈伤组织诱导培养基及其诱导培养的时间。结果表明,一种基于MS基本培养基的商品培养基较适合作为籼粳稻幼胚愈伤组织的诱导培养基;对于籼型杂交稻亲本协青早B,转化前幼胚较适合的愈伤组织诱导培养天数为8 d左右。在此基础上,将反义蜡质（Wx）基因分别导入上述受体亲本中,获得了一批转基因水稻植株。PCR和Southern杂交分析表明反义Wx基因已经整合进了转基因水稻的基因组中。遗传分析表明外源基因在转基因水稻后代中的分离符合3∶1的理论比例。     

剑麻愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以剑麻H.11648为材料,研究外植体类型、激素种类及其浓度对剑麻愈伤组织的诱导和植株再生的影响,并且建立剑麻茎尖愈伤组织诱导及高频再生体系.结果表明:MS基本培养基、6-BA/NAA激素组合有利于淡黄绿色愈伤组织的形成,SH基本培养基、6-BA/IBA/NAA激素组合有利于不定芽的分化;最佳愈伤组织诱导和分化培养基分别为MS+3.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA,SH+5.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L IBA.在该培养条件下,H.11648麻茎尖愈伤组织的诱导率为86.67％,分化率为(98.33+1.67)％,分化系数为(13.19±0.58).再生植株在不加激素的MS基本培养基上培养4周后的生根率为100％,平均生根数为(5.39±0.70)条,根长为(8.44±0.25)cm,该研究结果为剑麻转基因的研究和种质创新奠定了基础.