甜瓜幼苗根系总蛋白提取方法的筛选及其电泳条件的建立

以‘西域1号,甜瓜苗期根系为材料,分别采用改进的TCA/丙酮沉淀法、Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法及SDS/酚提取法提取总蛋白,进行SDS电泳和双向电泳分离,扫描后的胶图利用Image Master 2D Elite 6.01软件进行分析,重点分析胶图总点数、匹配点数和差异蛋白点数.结果表明:Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法得到的总蛋白含量最高;TCA/丙酮沉淀法分离得到的蛋白条带和蛋白点数最少,且对分子量较高的偏碱性区域的蛋白提取效果差,与其他2种方法相比明显丢失了较多的蛋白.因此,进行甜瓜幼苗根系总蛋白质组分析时,可采用后2种方法,其中Tris/酚抽提法更简单易行.     

一种优化的适用于双向电泳的水稻纹枯病菌蛋白质提取方法

为开展水稻纹枯病菌蛋白质组学的研究,采用TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法对水稻纹枯病菌蛋白质提取质量进行比较,并建立了双向电泳体系。对电泳后的图谱用Quantity One软件进行分析,结果发现:TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法所获得的蛋白质双向电泳图谱中,分别记录得到557、309和877个蛋白质点。SDS法提取的蛋白质样品杂质较多,存在盐离子和小分子物质干扰,得到的蛋白点较少;TCA-丙酮法提取的蛋白质样品呈黄色,有色素残留;而在TCA-丙酮法的基础上,增加酚/SDS抽提步骤,能够有效地去除样品中的盐离子和色素等杂质,获得背景清晰、分辨率高的蛋白图谱。结果表明,本研究建立了一种优化的TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法,该法适用于水稻纹枯病菌蛋白质双向电泳的提取。     

适用于双向电泳的芒果叶片蛋白提取方法的建立

为建立一套适用于鉴别"四季芒"成花蛋白表达差异的双向电泳方法,摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以"四季芒"芒果叶片为材料,采用TCA-丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等3种芒果叶片蛋白提取方法,进行SDSPAGE和双向电泳,比较这些方法的提取效果。结果表明,改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高TCA-丙酮法蛋白提取质量。提取液p H能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、2-DE凝胶蛋白点数量和分布。p H 8.5提取液所提蛋白获得最多的2-DE蛋白点,但在小分子区域蛋白分辨率比p H9.0提取液所提蛋白低。TCA-丙酮法所提蛋白在大分子区域2-DE蛋白点分辨率不如改良酚抽提乙酸铵沉淀法,但小分子和高等电点区蛋白点分辨率却明显好于后者。实验表明改良酚抽提乙酸铵沉淀法和TCA-丙酮法有很强的互补性,可以在双向电泳体系中组成双提取法提高蛋白分辨率。     

鲅鱼皮酸溶性胶原蛋白提取及分子特性的初步研究

[目的]在分子水平上初步探究酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白的特征性.[方法]在提取方法中用L9(34)正交试验寻求最佳提取条件.在分子特征性研究中检测了胶原蛋白紫外吸收图谱,并使用SDS - PAGE电泳 .测定分子量.[结果]酸溶性鲅鱼皮胶原蛋白的最佳提取条件是提取液浓度为0.2 mol/L柠檬酸溶液、固液比1:30、提取48 h;所提取出的胶原蛋白在230 nm处有显著吸收峰而在260 nm处无吸收峰是酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白的特征性之一.[结论]SDS - PAGE电泳图表明酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白含有2条α链(a1和a2)、β、γ链,分子量约为127、115、278、343 kDa,根据文献可知该胶原为典型的Ⅱ型胶原蛋白.     

致病性大肠杆菌O157H7外膜蛋白(OMPs)抗原的快速提取

本试验采用了超声波破碎、N－十二烷基肌氨酸处理和超速离心技术提取致病性大肠杆菌O157H7的外膜蛋白（OMPs）。提取物用SDS－PAGE进行电泳检测。     

花生子叶RNA提取方法比较与分析

以HY22组培苗为材料,比较改良胍酸酚抽提法、改良CTAB法及离心柱式试剂盒法提取RNA的效果,以筛选出适合花生子叶RNA提取的方法。结果表明：试剂盒法由于样品在通过离心柱时会出现阻塞现象,易使RNA提取结果受到较大影响,而改进后的胍酸酚抽提法与改良CTAB法则能避免该情况且更节约成本;经紫外分光光度法与电泳检测,改进后的两种方法的RNA提取效果均较好;RT—PCR结果表明,提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。     

适于双向电泳分析的水稻纹枯病菌菌体蛋白提取方法的比较

为建立水稻纹枯病菌菌体蛋白的双向电泳技术,获得分辨度高、重复性好的双向电泳图谱.采用了酚抽提法、TCA/丙酮沉淀法和丙酮沉淀法进行水稻纹枯病菌菌体蛋白质的提取,利用17cm、pH 5 ～8的IPG胶条对样品进行双向电泳,用PDQuest 8.0软件对电泳图谱进行分析,确定电泳的最佳参数.结果显示:采用17cm、pH 5 ～8的IPG胶条能得到较好的双向电泳图谱;同一样品的三种不同蛋白提取方法(酚抽提法、TCA/丙酮沉淀法和丙酮沉淀法)分别得到1278、885、827个蛋白质点.酚抽提法能有效去除样品中的盐分和小分子的干扰,得到背景清晰的蛋白图谱;TCA/丙酮沉淀法和丙酮沉淀法所得图谱有一定的杂质干扰,同时TCA/丙酮沉淀法和丙酮沉淀法有蛋白点缺失,尤其在碱性端存在明显缺失现泉.研究结果建立了一套适于水稻纹枯病菌菌体蛋白的可靠提取方法和双向电泳体系,为进一步研究其蛋白质组学奠定了基础.     

从感染叶片中提取柑橘衰退病毒总核酸3种方法的比较

用分光光度计检测微量抽提法、 Trizol法和氯化锂法提取的CTV总核酸, 再用RT-PCR和实时RT-PCR法检测, 结果表明: 3种抽提方法均可以获得CTV的总核酸, 其中Trizol法获得的总核酸质量最好, 平均浓度为329.352 1(μg/mL), A260/A280平均值为1.805 2; 进行RT-PCR反应后电泳条带亮度最强; 实时RT-PCR显示其Ct值最小. 氯化锂法与微量抽提法获得的总核酸质量差异不大, 但是微量抽提法更为简便快捷.     

从感染叶片中提取柑橘衰退病毒总核酸3种方法的比较

用分光光度计检测微量抽提法、Trizol法和氯化锂法提取的CTV总核酸,再用RT-PCR和实时RT-PCR法检测,结果表明：3种抽提方法均可以获得CTV的总核酸,其中Trizol法获得的总核酸质量最好,平均浓度为329.3521（μg/mL）,A260/A280平均值为1.8052;进行RT-PCR反应后电泳条带亮度最强;实时RT-PCR显示其Ct值最小.氯化锂法与微量抽提法获得的总核酸质量差异不大,但是微量抽提法更为简便快捷.     

高效提取肠道菌群总DNA方法的建立

[目的]建立一种高效快速的提取肠道茵群总DNA的方法,即改进的氯仿抽提法,为进一步对肠道茵群的定性和定量提供基础。[方法]通过对多种肠道菌群总DNA提取方法的考察总结,对氯仿抽提法进行改进,采用细菌添加试验的荧光实时PCR检测抽提结果,同时与QIAamp DNA Stool Mini kit法进行比较,以验证所建立的改进的氯仿抽提法的高效性。[结果]改进的氯仿抽提法提取的肠道茵群总DNA量约是QIAamp DNA Stool Mini kit的100倍;同时细菌添加试验的实时荧光定量PCR结果显示,改进的氯仿抽提法提取添加细菌的DNA效率较高。[结论]改进的氯仿抽提法经济、高效、快速,适合大批量的粪便样品的DNA提取。     

紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为34、16、15kD。等电聚焦法测定其等电点为5．25。动力学的方法检测PVTT与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。     

太平洋柔鱼中呈味物质的抽提方法比较

将太平洋柔鱼Ommastrephes bratrami可食部分分成胴体、鳍和头足3部分，对其一般化学组成成分进行分析。分别用热水抽提、乙醇（体积分数为80％）抽提、冷水抽提、冷水－乙醇（体积分数为80％）抽提4种方法测定了不同部位柔鱼原料和抽提物中主要呈味物质甜菜碱、无机离子K^ 、Na^、Ca^2 、Fe^2 、Zn^2 、PO4^3-、Cl^-及游离氨基酸等，并对4种抽提方法进行对照比较。结果表明，采用热水抽提法和乙醇抽提法效果较好。     

秦艽种子蛋白质电泳提取方法研究

分别采用40mmol／L氯化钠水溶液、40％乙醇、蒸馏水提取秦芜艽子蛋白质．并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）图谱比较。结果表明：3种提取方法间SDS—PAGE图谱谱带数目、分布及强弱不同。其中以40mmoL／L氯化钠水溶液提取的蛋白质SDS—PAGE图谱在3个供试秦艽种类间差别明显,且谱带清晰,可用于泰艽种子的蛋白研究与种子鉴别。     

2种车轮虫DNA抽提方法比较

[目的]比较研究了2种抽提车轮虫DNA的方法,苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法。[方法]采用苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法对采自重庆地区淡水鱼外寄生的纤细小车轮虫进行了DNA抽提比较研究。通过琼脂糖凝胶电泳技术和核酸蛋白检测技术对所抽提的DNA及PCR扩增产物进行了分析。[结果]苯酚-氯仿法抽提的DNA中杂质含量较少,但需要的车轮虫个体数量多;而试剂盒则可有效地抽提极微量的车轮虫DNA,对于无法进行单克隆培养的生物或无法得到足量标本的种类,则具有更好的应用前景。[结论]在试验过程中可以根据研究的实际情况因地制宜地选择使用不同的方法,以达到高效、经济的目的。     

辣椒疫霉菌致病毒素的纯化及其致病性的研究

通过硫酸铵沉淀法提取到疫霉菌的原始毒素。采用甜椒叶片注射法检测毒素的活性。采用两种方法对原始毒素进行纯化,用连续Bio-gel P-100柱层析法纯化能将毒素提至层析纯。在离子交换一分子筛层析法中,原始毒素依次经DEAE52-cellulose→CM32-cellulose→Sephadex G-75柱层析纯化后,经电泳检测为单一条带,说明达到电泳纯。采用SDS—PAGE法测定毒素的分子量为41．9ku。对毒素的组分进行了测定,结果表明毒素中蛋白质含量为70．4％,糖含量为29．6％。毒素经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后活性均下降,而用β-葡萄糖苷酶处理后活性变化不大,说明蛋白质亚基在P.capsici毒素活性中起着主要作用。     

山定子(Malus baccata Borkh.)根系蛋白质提取及双向电泳技术体系的建立

为开展山定子(Malus baccata Borkh.)根系蛋白质组学研究,以当年生15片真叶的山定子实生苗白色幼嫩根系为试材,采用TCA-丙酮沉淀法、酚抽提法和Trizol抽提法3种方法提取其总蛋白质,并对样品上样量、IPG胶条的p H值范围和等电聚焦参数进行优化,建立适用于山定子根系的双向电泳技术体系。结果表明:采用Trizol抽提法提取的蛋白质产率最高,可达3.15mg·g-1FW,且其SDS-PAGE图谱明显优于其他两种方法 ;选用800μg的上样量,17 cm p H值4~7的IPG胶条和改进后的等电聚焦程序所得到的二维电泳图谱蛋白点最多,最清晰,分辨率最高。     

茶树DNA的快速抽提法

使用简化改良的CTAB法抽提茶树(Camellia sinensis)鲜叶DNA,通过电泳和PCR检测所提取DNA的质量.实验结果表明,改良的CTAB法提取茶树DNA,步骤减少、抽提过程简单、时间短、效率高,用嫩叶和成熟叶均能抽提出高质量的DNA.     

青杨双向电泳实验体系的建立

用改良丙酮沉淀法、三氯乙酸（TCA）-丙酮沉淀法和酚抽法抽提青杨Populuscathayana的蛋白质,分别获得了437,603和721个蛋白斑点,以酚抽法提取的分离纯化方法效果最佳,不仅能很好地提取蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。通过比较,分析了双向电泳不同条件对电泳结果的影响,确立了300μg·IPG胶条^-1的最佳上样量、90000V·h的聚焦时间以及20min平衡时间的双向电泳条件。研究还比较了氯化钠胁迫前后双向电泳图谱差异,发现有46个蛋白点存在差异,其中10个下调,36个上调（4个新诱导表达）。     

小麦DNA提取方法的比较

目的 用4种方法 对小麦DNA进行提取,从中选取最好的方法 ,满足小麦材料进行分子标记的检测.方法 以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法,提取小麦基因组DNA.结果 NaOH法提取DNA用时短,方法 简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3在省略了65℃温浴并将两次氯仿∶异戊醇抽提改为一次抽提,缩短了试验时间,降低了试验成本,提取的DNA可以满足实验需要.结论 试验表明,用CTAB法3提取小麦DNA,既缩短了时间又满足进行分子标记检测的需要.     

耕层土壤镰刀菌单胞系的建立和基因组DNA的快速抽提

采用改进的镰刀菌选择性培养基和产孢培养基对采自大田、苗圃耕层土壤中的镰刀菌进行单孢分离 ,共分离出 5 0个镰刀菌菌株 ,而且改进的镰刀菌选择性培养基对目标菌选择性强 ,产孢量大。用改进的SDS -SEAVG分离法和快速抽提法提取镰刀菌基因组DNA ,结果显示 ,用改进的镰刀菌DNA抽提方法抽提的DNA分子量大于 5 0kb ;用快速抽提方法获得的镰刀菌单孢系DNA可用于PCR扩增。