秀珍菇原生质体再生条件优化

对秀珍菇菌丝原生质体再生条件进行了优化。结果表明,秀珍菇原生质体适宜的再生培养基为:马铃薯200 g,蔗糖20 g,KH_2PO_4 3.0 g,MgSO_4·7H_2O1.5 g,维生素B_1 0.1 g,0.6 mol/L甘露醇。采用上述培养基,原生质体再生率达到0.85%。     

浓香乳菇原生质体再生及再生株特性研究

浓香乳菇[Lactarius camphoratus(Bull.)Fr.]香气浓郁、抗菌性强,是理想的食品风味剂和天然香料源,但难以人工栽培。本文探索了适于浓香乳菇原生质体制备及再生的实验系统,但从随机挑选的120个再生株中未检测到单核体。研究表明,部分再生株的菌落形态及生长速度与亲株明显不同,且与亲株呈三种类型的拮抗反应,但再生株与亲株的酯酶同工酶及蛋白质电泳图谱完全一致。针对浓香乳菇再生株的多种特性,提出了几种可能的变异机理,并对原生质体单核化的可行性作了分析。     

香菇原生质体工程菌株的构建研究：Ⅰ.香菇原生质体的分离与再生行为

本研究通过电镜观察与酶解分析确定香菇菌丝细胞壁组成，并进行了双核菌丝原生质体的分离和培养。酶解过程中，菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来，合适的渗透剂，菌龄和酶解温度是原生质体得率的重要保证；原生质体再生菌丝过程是一个间歇性的依赖于原生质团涌动流向的过程，再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起－哑铃状－分枝状等不同形态类型的再生阶段；再生菌丝体在形态上没有观察到锁状联合，栽培后末能结实，     

苹果原生质体分离培养及植株再生

以悬浮培养细胞及叶片作为分离原生质体的起始材料 ,对影响苹果原生质体分离和培养的因素进行了系统研究。优化的原生质体培养基为 :改良MT 维生素C 5mg/L BA0 .5～ 1mg/L 2 ,4 D 0 .2mg/L 蔗糖 0 .6 5mol/L 谷氨酰胺 50 0mg/L CH 10 0mg/L ME50 0mg/L ;以葡萄糖代替蔗糖作渗透压调节物质效果好 ,且在培养过程中不需降压 ;适宜的低密度培养 (0 .5× 10 5/mL)可减少褐变。悬浮系原生质体培养 5～ 6d出现第 1次细胞分裂 ,15～ 2 0d形成多细胞团 ,4 0～ 50d形成肉眼可见的小愈伤组织。经培养诱导出不定芽 ,并进一步诱导生根长成完整植株。获得了平邑甜茶、M2 6 、嘎啦 3种基因型的原生质体再生植株。     

银耳菌丝原生质体分离和再生研究

以菌株Tr01为材料，研究了不同菌龄、溶壁酶浓度、酶解温度、稳渗剂对银耳工力丝在的原生质体产量及不同稳渗剂对原生质再生的影响。结果表明，原生质体分离的最佳条件为：菌丝菌龄9天，酶液浓度2％，稳渗剂0.4mol/L硫酸镁，在34℃下酶解4h，原生质体以0.4mol/L甘露醇作稳渗剂再生率较高，为1.13%。     

阿魏菇出菇温度调查与分析

阿魏菇出菇阶段是指阿魏菇菌丝体在适宜条件下形成原基，继而发育成菇蕾，直至发育成可以采收的阿魏菇子实体这一生殖生长阶段。在这一阶段中往往会出现栽培袋长不出原基，或原基长出后无法发育成菇蕾，或菇蕾长出后出现死菇的现象，给栽培者造成很大的经济损失。造成这一经济损失有很多因素。但是根据笔者这几年栽培阿魏菇实践和调查研究结果初步可以确定是部分栽培者对阿魏菇出菇阶段对温度有什么要求还没有摸索清楚与盲目管理造成的。     

灵芝原生质体制备与再生条件的研究

本文研究了不同酶浓度、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂及菌龄等对灵芝菌丝原生质体制备与再生的影响，结果表明，菌龄为60h的菌丝，采用浓度为2％的溶壁酶以0．6M的甘露醇作渗透压稳定剂于pH6.5，30℃下酶解2h，当酶解液中湿菌体含量对0．1g/mL时，其原生质体数可达2^*10^7个/mL，且再生率达8．5％。     

香菇原生质体工程菌株的构建研究——I.香菇原生质体的分离与再生行为

本研究通过电镜观察与酶解分析确定香菇(Lentinula edodes)菌丝细胞壁组成.并进行了双核菌丝原生质体的分离和培养.研究发现:酶解过程中,菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来.合适的渗透剂、菌龄和酶解温度是原生质体得率的重要保证;原生质体再生菌丝过程是一个间歇性的依赖于原生质团涌动流向的过程,再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起-哑铃状-分枝状等不同形态类型的再生阶段;再生菌丝体在形态上没有观察到锁状联合,栽培后未能结实,初步判断为单核菌株.     

云芝菌丝体原生质体制备与再生条件的研究

研究了不同酶种类、酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂、pH值及菌龄等因素对云芝原生质体制备以及不同再生培养基对云芝原生质体再生的影响。结果表明,菌龄3d的云芝菌丝体用3％溶壁酶,以pH5．5,0．4mol／L的KCl为稳定剂,30℃酶解5h获得的原生质体产量最高;用RMl再生培养基培养,原生质体再生率最高。     

香菇YJ-01原生质体制备与再生条件的优化

以香菇菌株YJ-01为试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响。通过单因素试验,选出了4个因素(酶解温度、酶解时间、菌龄和稳渗剂浓度)利用四因素二次通用旋转设计进行优化。结果表明:(1)YJ-01原生质体最佳制备条件:pH 5.0,0.5 mol/L MgSO_4溶液作稳渗剂,对5日龄菌丝体于28℃条件下酶解3 h。各因素对原生质体产量的影响作用依次为酶解温度酶解时间菌龄稳渗剂浓度。(2)YJ-01原生质体最佳再生条件为,当p H 5.5,以0.5 mol/L蔗糖溶液作稳渗剂,对6.5日龄菌丝体在27.8℃酶解2.9 h。各因素对原生质体再生率的影响作用依次:稳渗剂浓度酶解时间菌龄酶解温度。     

金顶侧耳原生质体制备与再生条件的研究

采用单因素以及正交试验法探究金顶侧耳原生质体的制备及再生条件,结果显示:加富PDA液体培养基培养5天的菌丝,在以蔗糖为渗透压稳定剂配制2%浓度的溶壁酶条件下,30℃酶解2.5 h,原生质体得率为2.36×107个/m L;选择蔗糖再生培养基,再生率可达0.71%。     

灰树花原生质体制备与再生条件的研究

本文对灰树花 51 #菌株原生质体制备及再生条件进行了研究。结果表明 :液体摇瓶振荡培养 7天的菌丝 ,以 0 .6M的甘露醇作渗透压稳定剂 ,采用浓度为 2 %的真菌溶壁酶 ,在pH5 .5、30℃条件下酶解 5小时 ,原生质体制备率最高 ,可达到6 .6× 1 0 6 个 /ml,所得原生质体在两种不同的培养方式中均实现了再生。     

灵芝原生质体形成与再生的研究

该文通过对原生质体形成与再生条件如酶类、渗透压稳定剂、ｐＨ、培养基、菌龄、酶解温度和时间等因素的研究表明,以Ｄ培养基、葡萄糖为渗透压稳定剂,酶液浓度为１５％Ｌｙｗ＋０２％Ｌｙｓ,ｐＨ４５～５５,培养菌龄为７２～９６ｈ,酶解温度为２０～２５℃条件下,酶解６０～９０ｍｉｎ,其破壁效果为最佳,原生质体形成和再生率都最高。     

灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.     

山杏原生质体培养再生植株

对影响山杏原生质体分离和培养的因素进行了系统研究。以悬浮培养物为分离材料,在ＣＰＷ＋１．５％ＣｅｌｕｌａｓｅＯｎｚｕｋａＲ－１０＋０．５％ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ－１０＋０．５％Ｈｅｍｉｃｅｌｕｌａｓｅ＋０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋１％ＰＶＰ的酶解液中酶解１０ｈ,原生质体产量和活力分别达到８×１０６个／ｇＦＷ和９５％。以ＫＭ８Ｐ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０、ＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ,培养１０ｄ和３０ｄ后分别将ＢＡ调至０．５和１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇调节渗透压,培养过程中逐步降压,在０．５×１０５个／ｍＬ的植板密度下液体浅层培养６０ｄ后形成了微愈伤组织。将微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

白灵菇原生质体制备与再生的研究

详细研究了酶系统、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间、pH值、菌龄等因素对白灵菇(Pleurotusnebrodensis)原生质体制备与再生的影响。通过单因素和正交实验确定最适条件为:采用7日龄菌丝,以0.6M甘露醇作为渗透压稳定剂,pH5.8时,在1.5%溶壁酶 0.2%蜗牛酶 0.3%纤维素酶的作用下,32℃水浴酶解2.5～3h,可得到1.7×107/mL原生质体,再用双层混合再生培养基培养,可达到1.3%再生率。     

滑菇原生质体分离条件的研究

本文研究了渗透压稳定剂的种类与浓度、pH值、菌龄、酶解温度与时间等因素对滑菇原生质体分离效果的影响。结果表明 ,利用菌龄为 13天的菌丝和 2 0 %的溶壁酶 ,以pH值 6 0M的甘露醇作为渗稳剂 ,在 2 5℃下酶解 5小时是滑菇原生质体分离的较适宜条件。     

枇杷原生质体植株再生

以普通批粑（价iobotlya joponica Lindl．）‘解放钟’等品种的不同发育期胚为材料诱导愈伤组织。起源于鱼雷形胚的胚性愈伤组织是游离原生质体的合适材料。最合适的游离原生质体的酶混合液为：l％纤继素酶＋2％果胶酶干！2％甘露醇，其原生质体得率高于L 07／g愈伤组织，原生质体成活率在 95％以上。原生质体经液体培养 4天后，出现第一次细胞分裂，并继续分裂，形成大量肉眼可见的小愈伤组织。愈伤组织在含3％山梨醇的培养基土培养3周后，其表面出现茎原基，并进一步发育成芽苗。芽苗移入生根培养基后生成完整植株。已获得解放钟和‘白梨’移栽成活的原生质体再生植株。