鸭源抗鹅细小病毒卵黄抗体的制备

利用GPV 98E株胚毒免疫产蛋鸭,收集高免鸭蛋,分离卵黄,经水稀释法去脂粗提,硫酸钠盐析获得纯化的鸭源抗鹅细小病毒卵黄抗体,测定其琼脂双扩散效价、含量和回收率;利用低日龄无母源抗体易感雏鹅检测其预防和治疗效果。结果表明:经GPV 98E株胚毒免疫的鸭可以很快产生高水平的特异性抗体,纯化的卵黄抗体琼扩效价为1∶32,含量为81.6%,总蛋白回收率为6.01mg/mL。在预防试验中,雏鹅的死亡率为0,在治疗试验中,使用一次预防试验用的剂量治疗发病雏鹅,其死亡率为59%,经二项分布显著性检验,鸭源抗GPV卵黄抗体对鹅细小病毒感染有极显著的预防和治疗效果。     

血清抗体检测代替攻毒保护法评估小鹅瘟灭活疫苗免疫效果的比较研究

研究通过检测种鹅琼扩血清抗体水平和对应的被动免疫雏鹅琼扩血清抗体水平发现,当疫苗免疫剂量大于0.75 m L/只时,免疫4周时种鹅血清抗体水平及雏鹅血清抗体水平均较高。雏鹅血清抗体水平与雏鹅攻毒保护水平比较发现,雏鹅抗体(血清原液)阳性组和血清抗体效价达到1∶2及以上的雏鹅,攻毒后14日均未发生死亡,表明当雏鹅血清抗体阳性即可完全保护雏鹅,即雏鹅血清抗体水平与攻毒保护评价方法具有较高的正相关性。因此,本研究结果表明采用血清学效力检验可以替代传统动物攻毒试验方法,可作为小鹅瘟灭活疫苗效力检验的指标。     

鸭甲肝病毒鸡胚化弱毒MY株Vp1重组蛋白的免疫保护效果试验

将鸭甲肝病毒鸡胚化弱毒MY株Vp1基因原核表达工程菌(pET32a+Vp1,BL21(DE3)PlysS)对基因Yp1进行大量表达和纯化,得到鸭甲肝弱毒MY株Vp1重组蛋白作为抗原制备亚单位疫苗,免疫雏鸭,用间接ELISA检测方法对免疫后抗体生成水平进行监测,并通过动物攻毒试验评价免疫保护效果.结果显示:Vp1重组蛋白免疫家兔后血清检测琼扩效价≥1∶64,细胞中和试验效价为1/45;雏鸭免疫后抗体生成水平呈明显上升趋势,对攻毒起到了保护作用.首次揭示了DHAV-1结构蛋白Vp1刺激机体产生抗体使雏鸭获得保护的能力.     

鸡抗小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与应用

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒(GPV)感染引起的雏鹅的一种急性传染病。近年来,在养鹅生产中,采用抗血清或卵黄抗体给雏鹅注射进行被动免疫预防本病,取得了较好的防治效果。抗血清或鹅源卵黄抗体生产的成本高、产量低,尚不能满足养鹅业快速发展的需求。为此,试制鸡抗小鹅卵黄抗体(IgY)并进行了防治效果试验和现地应用效果观察。1材料与方法1.1材料海兰蛋鸡40只,由黑龙江省生物制品一厂监察室试验动物室提供;2日龄雏鹅40只,购于哈尔滨市道里区某孵化场,供试验用。GPV免疫用抗原、GPV琼扩抗原及阳性血清和抗小鹅瘟鹅源血清琼扩抗体(效价416),均由…     

鸭坦布苏病毒冻干高免卵黄抗体的研制

本研究用鸭坦布苏病毒病灭活苗三次免疫SPF蛋鸡,收取高免鸡蛋,制备成冻干高免卵黄抗体;用鸡胚中和试验和间接ELISA方法进行效价检测。试验结果显示,第3次免疫后2周,卵黄抗体中和效价为1∶103.5,4、5周达到最高值1∶104.5;间接ELISA方法检测冻干前后的抗体效价结果均为阳性;对鸭坦布苏病毒强毒的攻毒保护率达100%,可为鸭坦布苏病毒的防控提供一种有效的冻干高免卵黄抗体制剂。     

间接ELISA检测鸭肝炎病毒抗体的研究

以蔗糖密度梯度离心法纯化的病毒作为包被抗原，建立了检测鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经特异性及重复性试验，效果良好。ＥＬＩＳＡ效价与琼扩、中和效价存在平行关系。经ＥＬＩＳＡ检测，１日龄雏鸭免疫后，４日龄可检出ＥＬＩＳＡ抗体，１０日龄达到峰值。ＤＨＶ高免血清在雏鸭体内作用维持时间为１０ｄ左右。攻毒保护试验表明，攻毒前雏鸭的血清抗体水平与攻毒后雏鸭存活率具直接相关性。     

番鸭细小病毒病疫苗毒株特性的研究

用患病雏番鸭肝脏和胰脏病料接种易感番鸭胚分离到一株病毒,经鉴定为细小病毒科、细小病毒属、番鸭细小病毒。本毒株首先在番鸭胚传3代适应后,转在鹅胚传38代,使12日龄鹅胚的致死时间稳定在第5～9天,致死率约98％,毒价ELD_(50)可达10~(6～7/0.2ml;M_(91)G_(26)鹅胚绒尿液接种1日龄易感雏番鸭已不引起发病,接种后20天,血清中琼扩抗体均为阳性。     

小鹅瘟冻干卵黄抗体被动免疫持续期研究

为探索小鹅瘟冻干卵黄抗体的被动免疫保护期及抗体效价与免疫持续期的平行相关性,试验采用3种琼扩效价分别为1∶16、1∶32和1∶64的实验室试制冻干卵黄抗体各3批,分别接种1日龄、4日龄健康易感雏鹅,1日龄雏鹅每只注射0.5 m L,4日龄雏鹅每只注射1.0 m L,并于注射后0 h、12 h、24 h、120 h、144 h、168 h、192 h、216 h对试验组和攻毒对照组接种小鹅瘟强毒W株,每只0.2 m L(含100 LD_(50))。结果显示:不同效价的卵黄抗体免疫后144 h内攻毒,卵黄抗体均可对雏鹅提供100%的免疫保护,雏鹅日龄越小,相对保护率越高,卵黄抗体琼扩效价越高,对雏鹅的免疫保护持续期越长。     

鸭坦布苏病毒高免卵黄抗体的研制

将鸭坦布苏病毒浓缩后制备灭活苗,免疫试验鸡制备卵黄抗体,鸡胚中和试验表明,第3次免疫后15d,卵黄抗体中和效价为1：10^3.5,雏鸭攻毒保护试验结果表明,预防组和治疗组的保护率分别达到90％和78％,说明本试验制备的卵黄抗体对鸭坦布苏病毒病有着显著的预防和治疗作用。     

水牛抗小鹅瘟高免血清的研制和应用

用小鹅瘟病毒浓缩乳化抗原,皮内多点注射分3次免疫水牛,可获得琼扩抗体为1:6～1:64的抗小鹅瘟高免血清。此血清具有良好的预防效果和较高的疗效,在疫区注射1～5日龄雏鹅预防小鹅瘟,可提高雏鹅成活率36.4％;治疗发病雏鹅,治愈率达88.7％。乳化抗原以首免剂量1.5ml/只,二免2.5ml/只为佳,三免剂量应根据二免后血清琼扩抗体效价高低而定,抗体高加倍剂量大,低则加倍剂量小。同时测得水牛三免后13～16天血清琼扩抗体开始站达高峰,血清抗体达高峰后,至少可以持续16天以上。     

番鸭细小病毒病病原的血清学检测与PCR鉴定

为了解安徽省番鸭细小病毒病的流行情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对该省内部分番鸭群进行鹅细小病毒的血清抗体检测,同时对疑似病鸭进行了病原的PCR检测。结果发现,在被检测的44份血清样本中鹅细小病毒血清抗体阳性率高达34.1%;PCR检测结果显示,所检测的样品中,有2份为鹅细小病毒阳性,1份为番鸭细小病毒阳性,且3份被检样品均来自雏番鸭。该研究结果表明,该省番鸭群中存在鹅细小病毒和番鸭细小病毒感染,应采取有效的预防控制措施。     

番鸭细小病毒病和小鹅瘟二联活疫苗对雏番鸭的免疫效力研究

为评价番鸭细小病毒(MPV)和番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)二联活疫苗(以下简称"二联苗")对1日龄胶乳凝集抑制(LPAI)抗体阴性的雏番鸭的免疫保护效力,本研究进行了血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性的研究及免疫持续期试验。不同抗体水平的雏番鸭攻毒试验结果表明,当免疫鸭血清MPV-LPAI和GPV-LPAI抗体效价分别达1.0 Log2和2.0 Log2以上时,即可有效抵抗MPV和GPV强毒的攻击。免疫期试验结果表明,二联苗以0.2 m L的剂量免疫雏番鸭,接种后各实验组雏番鸭均产生较高的LPAI抗体,其免疫期能持续360 d。上述结果表明该二联苗能够诱导雏番鸭产生良好的免疫应答,可以有效预防番鸭细小病毒病和番鸭小鹅瘟病。     

小鹅瘟卵黄抗体效价与攻毒保护相关性试验

将实验室试制的3批小鹅瘟卵黄抗体,琼扩效价为1:16,分别稀释成琼扩效价为1:4、1:8,分别按每只0.5 m L接种3日龄易感雏鹅,24 h后,试验组与对照组攻击小鹅瘟病毒。结果显示:雏鹅注射相同剂量不同琼扩效价的卵黄抗体,随着卵黄抗体琼扩效价的升高,对雏鹅的保护率也随之升高。     

细胞传代致弱的鹅细小病毒YG毒株致病性变化的研究

旨在观察细胞传代致弱的鹅细小病毒YG毒株对易感雏鹅的致病性变化。将鹅细小病毒(GPV)YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)上进行交替传代培养,病毒在细胞上传至第12代时,开始出现细胞病变;间接免疫荧光试验(IFA)检测发现,随着病毒感染时间的延长,感染细胞数量呈现先增加随后减少的变化趋势,感染后96h阳性细胞数量最多;病毒的滴度随着传代次数的增加而逐渐升高;当病毒传至第50代时,细胞适应毒株毒价为106.5 TCID50·mL-1;雏鹅致病性试验结果显示,第50代病毒毒力明显减弱。细胞传代致弱的GPV YG株所感染雏鹅死亡和发病率降低,且死亡雏鹅无鹅细小病毒病的特征性病变及临床表现。     

水牛抗小鹅瘟高兔血清的研制和应用

用小鹅病毒浓缩乳化抗原，皮内多点注射分３次免疫水牛，可获得琼扩抗体为１：６－１：６４的抗小鹅瘟高免血清，此血清具有良好的预防效果和较高疗效，在疫区注射１－５日龄雏鹅预防小鹅瘟，可提高雏鹅成活率３６．４％；治疗发病雏鹅，治愈率达８８．７％。乳化抗原以首免后血清琼扩抗体效价高低而定，抗体高加倍剂量大，低则加倍剂量小。同时测得水牛三免后１３－１６天血清琼扩抗体开始达高峰。血清达高峰后，至少可以持续１６天     

番鸭细小病毒琼扩抗原研制及初步应用

应用番鸭细小病毒鹅胚适应毒Ｍ９１毒株接种易感鹅胚,收获鹅胚尿囊液毒经浓缩后制成琼扩抗原。此抗原与抗番鸭细小病毒免疫血清和鹅细小病毒免疫血清有共同交叉反应并成功应用于番鸭细小病毒疫苗的免疫检测。     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５—１０－７，琼扩沉淀效价达１∶２０—１∶５１２，鹅胚中和效价达１∶３０—１∶１２２，鹅体中和效价为１∶５４—１∶９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

间接ELISA检测番鸭细小病毒抗体

鸭细小病毒病是由鸭细小病毒（Duck parvovirus,DPV）引起的一种急性病毒性传染病,以雏鸭易感,临床主要表现为气喘、脚软和渗出性肠炎,死亡率约50%～80%,在世界各养鸭地区都有分布,其预防和控制已直接关系到水禽养殖业的持续稳定发展[1]。临床和实验室试验证实番鸭细小弱毒疫苗是预防控制该病最有效措施,而对细小病毒特异性抗体的监测是评价疫苗免疫效果及鸭群合理制定免疫程序的关键[2]。目前国内已经报道[3]的检测番鸭细小病毒抗体的方法有血清微量中和试验、微量点凝试验、胶乳凝集反应、琼脂扩散试验,     

小鹅瘟病毒常州株的鉴定及其致弱研究

从具有小鹅瘟典型症状、病变的病死雏鹅病料中分离到疑似小鹅瘟病毒常州株GPV／JSCZ／2004／01。通过磷钨酸负染经透射电镜观察可见细小病毒样病毒粒子，取死亡胚尿囊液浓缩后与GPV阳性多抗血清作用显示有阳性琼扩线出现，通过GPV特异性引物和相应的PCR试验，扩增出了特异性的DNA条带。研究结果表明分离到小鹅瘟病毒常州株。对常州株第3代毒进行番鸭胚半数致死量（ELD50）测定，为10^-3．1／0．2mL。将分离毒GPV／JSCZ／2004／01感染鹅胚成纤维细胞（GEF）并连续传代培养，结果显示该毒株在细胞培养传代到第9代时能用单抗介导的间接免疫荧光试验检测到病毒在GEF的感染，表明产生了细胞适应毒（CZ—ca）。取第14代细胞毒（CZ—ca14）10倍比稀释测定TCID50，同时进行雏鹅致病性试验，结果显示细胞毒的TCID50为10^-9.4／0．2mL，对雏鹅的发病率和死亡率为0，但原始分离株的发病率和死亡率为100％。研究结果进一步证明小鹅瘟强毒株通过连续细胞传代培养可以达到致弱效果，为小鹅瘟病毒致弱研究提供了参考。     

番鸭细小病毒病

（上接２００１年第５期P４１）４．２血清学诊断方法４．２．１中和试验：①雏番鸭中和试验：将上述被检病料的上清液，或分离的胚绒尿液毒（鹅胚或番鸭胚，须５代以内）分成２份，１份加入４倍量已知抗番鸭细小病毒血清，另１份加入４倍量灭菌生理盐水或PBS代替抗血清，混匀后置３７℃温箱作用６０min。每组分别注射６羽５日龄左右的易感雏番鸭，每雏皮下０．２ml，隔离饲养观察１０d。血清组雏番鸭健活，而对照组雏番鸭发病死亡，其临床症状及病变与自然病例相同，即可确诊为本病毒所致。②鹅胚中和试验：本法用已知番鸭细小病毒鹅胚适…