在猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒感染猪场利用猪瘟E2基因工程亚单位疫苗控制猪瘟的案例分析

在某个存在多种病毒性病原混合感染的规模猪场,通过使用猪瘟E2基因工程亚单位疫苗与猪瘟ST传代弱毒细胞苗进行免疫对比试验。免疫前该猪场猪瘟抗体水平比较低(平均ELISA阻断率低于40%),猪群表现为不稳定,存活率低,并且病原检测到猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒2型;与弱毒苗相比较,猪瘟E2亚单位疫苗免疫后,猪瘟抗体滴度显著升高,猪群成活率明显提升。临床应用结果表明E2亚单位疫苗可以突破免疫抑制的影响,在猪群存在猪蓝耳病和猪圆环病毒病等免疫抑制性疾病的情况下,仍可以稳定提高猪瘟抗体水平,提供有效保护,提升生产成绩。     

猪瘟E2亚单位疫苗攻毒保护效力研究

猪瘟E2亚单位疫苗是一种用杆状病毒载体系统表达的猪瘟病毒E2重组蛋白,与油佐剂按比例混合、乳化制成的新型灭活疫苗,可区分感染和接种疫苗动物,有助于猪场的猪瘟净化。为评价该疫苗免疫效力,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟兔化弱毒疫苗(传代细胞源)分别免疫靶动物,二免后2 w用强毒人工感染试验动物,连续测温16 d,并记录试验猪临床症状,结合病理剖检、组织器官病毒含量测定结果,比较不同疫苗保护力。结果显示:对照组猪攻毒后体温高热稽留,表现出典型猪瘟症状,攻毒后11 d内5/5发病死亡,尸检剖检呈典型猪瘟病理解剖学变化;免疫猪全部健活,未表现任何猪瘟症状,组织器官剖检无病变。结果表明,猪瘟E2亚单位疫苗与活疫苗保护效力相当,可为靶动物提供可靠的免疫保护效力。     

猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫攻毒保护效力试验

为了评价猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫效果,本试验在试验猪场用猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟减毒活疫苗分别免疫供试猪,并定期测定猪瘟病毒抗体。饲养至24周龄时,每组随机选取5头运至检验动物房,用猪瘟石门系强毒进行人工感染。根据试验猪攻毒后临床症状、病理剖检和猪瘟抗原、抗体检测结果,比较分析了猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫保护力。结果显示,对照组的试验猪攻毒后12 d内全部死亡,并表现出典型的猪瘟症状和病理变化;免疫猪全部存活,未见猪瘟症状和肉眼可见的组织器官病变,血样的猪瘟抗原ELISA检测结果均为阴性。结果表明,猪瘟E2亚单位疫苗单剂量免疫1次后,24周仍能为靶动物提供可靠的免疫保护效力,与猪瘟减毒活疫苗2次免疫的保护效力相当。     

猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗的制备及对家兔的免疫效果

猪瘟病毒E2蛋白不但具有很强的保护性,而且与病毒毒力密切相关。本研究旨在利用基因工程技术,原核表达纯化猪瘟病毒E2蛋白并对其进行N-糖基化修饰,以使其靶向树突状细胞,从而增加其免疫效力。结果表明,经间苯二酚硫酸法及质谱分析鉴定,猪瘟病毒E2蛋白质ε-赖氨酸成功进行了体外糖基化修饰。进而将糖基化E2蛋白质免疫家兔,首免后14d进行第二次免疫,分别在不同时间采血制备血清,经ELISA检测,免疫7d,糖基化E2蛋白质组抗体水平显著高于猪瘟病毒组与E2蛋白质组(P<0.01);至14d时,糖基化E2蛋白质组抗体水平开始下降,与疫苗组、E2蛋白质组相比差异不显著(P>0.05);在二免后14d,糖基化E2蛋白质组抗体水平上升至最高水平,显著高于猪瘟疫苗组和E2蛋白质组(P<0.01);至二免后21d,糖基化E2蛋白质组抗体水平略高于猪瘟疫苗组(P>0.05),显著高于E2蛋白质组(P<0.05);至二免后28d,糖基化E2蛋白质组抗体水平达到稳定值,显著高于另2组(P<0.05)。结果说明,糖基化E2蛋白质免疫后有效诱导了机体的抗体反应,抗体产生快而持久,具有良好的免疫记忆,免疫效果显著优于常规疫苗,是新型疫苗开发的优选抗原,具有很深的开发潜力。     

两种不同猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果比较

为比较猪瘟疫苗E2基因工程亚单位疫苗和猪瘟活疫苗对育肥猪免疫效果和生产成绩的影响,以便为规模猪场在选择猪瘟疫苗时提供参考。本试验从汉中某代养场选取了一批健康的断奶仔猪分成三组,A组免疫猪瘟E2基因工程亚单位疫苗（简称E2亚单位疫苗）,B组免疫猪瘟活疫苗（脾淋源）,C组为对照组不做猪瘟疫苗免疫。免疫60 d后各组随机抽取10、15和12份血样用猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测猪瘟抗体水平。结果表明接种的两种猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果差异极显著（P<0.01）,其中E2亚单位疫苗相比于猪瘟活疫苗能够明显提高育肥猪抗体阻断率和降低离散度,并且有助于育肥猪的健康生长。     

猪瘟E2基因工程亚单位疫苗使用效果分析

正猪瘟俗称"烂肠瘟",又称"猪霍乱",是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起,一年四季均可导致不同年龄、性别、品种的猪和野猪感染发病,具有高度传染性和致死性,在养猪生产中猪瘟的防控至关重要。猪瘟E2基因工程亚单位疫苗可以有效改善目前猪瘟的防控现状。从猪瘟E2基因工程亚单位疫苗免疫前后检测结果得出,猪场阳性率从55.88%升高到     

质粒DNA拓扑学结构对基因疫苗生物学特性的影响

利用不同拓扑学结构的质粒 ,分别转化 E.coli感受态细胞、转染 SK6 - 6细胞和免疫小鼠 ,比较了不同拓扑学结构质粒对转化效率、转染率和对免疫应答水平的影响。结果显示 ,超螺旋占 5 0 %比例的猪瘟病毒 E2基因表达质粒p CDSW转化 E.coli感受态细胞的效率比开环的 p CDSW高 8倍 ,超螺旋比例占 80 %的 p VAXE2 IL- 2质粒比酶切线性化质粒转化率高 2 2倍 ;以荧光蛋白基因为报告基因 ,超螺旋比例占 80 %的荧光蛋白真核表达质粒转染真核细胞的效率是线性化质粒的 12倍 ;以猪瘟病毒主要保护性抗原 E2基因表达质粒 ,分别制备成超螺旋和开环形式占优势的质粒 ,免疫昆明鼠 ,抗体检测结果显示 ,超螺旋比例高的基因疫苗免疫效果明显好于开环质粒的基因疫苗     

国外猪瘟病毒实验室诊断、流行病学以及标记疫苗研究进展

常用于检测猪瘟病毒的实验室诊断方法是免疫组化和病毒分离培养.随着分子生物学的发展,先后建立了一系列检测病毒蛋白的ELISA方法以及病毒基因组的RT-PCR方法.标记疫苗是目前猪瘟疫苗发展的趋势.目前已经完成E2亚单位标记疫苗及重组活疫苗效率的测定,均能显著减少疫苗免疫猪群中猪瘟病毒的水平及垂直传播,同时通过血清学方法能区分疫苗免疫猪与自然感染猪.标记疫苗的使用对于猪瘟的控制和消灭具有十分重要的意义.     

猪瘟病毒E2-GM-CSF融合蛋白在HEK293T细胞中的表达和免疫原性分析

【目的】 设计构建分泌表达E2-GM-CSF融合蛋白的HEK293T重组细胞, 并评估表达的E2-GM-CSF融合蛋白的免疫原性, 为猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)的防控提供新的候选亚单位疫苗。【方法】 利用PCR方法扩增E2-GM-CSF基因并克隆入慢病毒表达载体pCDH, 将得到的重组慢病毒质粒pCDH-E2-GM-CSF包装成E2-GM-CSF慢病毒颗粒, 转导HEK293T细胞, 经嘌呤霉素加压筛选获得分泌表达E2-GM-CSF融合蛋白的HEK293T重组细胞, 纯化表达的E2-GM-CSF融合蛋白经小鼠免疫试验验证其免疫原性。【结果】 pCDH-E2-GM-CSF质粒经酶切鉴定, 得到大小分别为8 172 bp的载体片段和1 521 bp的E2-GM-CSF基因片段, 表明E2-GM-CSF基因成功克隆入pCDH载体; 细胞基因组DNA PCR扩增结果为一条大小为1 686 bp的条带, 表明E2-GM-CSF基因成功整合至HEK293T细胞基因组; Western blotting分析获得约70 ku的条带, 证明E2-GM-CSF融合蛋白在HEK293T细胞中成功分泌表达; SDS-PAGE验证显示, 纯化后的E2-GM-CSF融合蛋白为单一条带, 纯度较高, 大小约70 ku; 小鼠免疫血清ELISA检测结果表明, 表达的E2-GM-CSF融合蛋白具有良好的免疫原性, 免疫后第14天在小鼠血清中检测到效价为1∶300的E2特异性抗体, 免疫后第21天E2特异性抗体效价达1∶900, 免疫后第28天小鼠血清中的E2特异性抗体效价最高达到1∶8 100, 远高于E2蛋白的1∶1 800。【结论】 利用慢病毒载体构建的表达E2-GM-CSF融合蛋白的HEK293T重组细胞可正确分泌表达具有免疫原性的E2-GM-CSF融合蛋白, 为CSFV的防控提供了新的候选亚单位疫苗, 同时其构建、开发与评估过程也可为其他亚单位疫苗在哺乳动物细胞中的快速表达提供借鉴。     

马立克氏病基因工程疫苗研究现状及发展趋势

本文对MD基因工程疫苗中的重组亚单位疫苗、基因缺失苗、基因疫苗和活病毒载体疫苗的研究现状作一综述，并重点介绍了重组活病毒载体疫苗。结合其他疫苗的研究方法，可从鸡痘病毒载体插入部位的选择、增加外源基因的表达、使用多个抗原表位构建多价重组基因工程疫苗、使用两种病毒载体构建的重组病毒二次免疫、共表达细胞因子或细胞表面受体、表达微基因等方面来增强重组病毒活病毒载体疫苗的免疫效力。     

牛流行热病毒灭活疫苗的研究

我们研制的牛流行热病毒亚单位疫苗对牛安全、免疫效力良好,在生产实践中应用,对控制牛流行热的流行起到了显著作用。但亚单位疫苗的生产工艺要求较高,程序复杂,为简化生产程序,省去制备亚单位疫苗抗原的两次超速离心和超声波裂解步骤,直接将牛流行热病毒 CHK_(21)细胞培养液用 Triton X-100溶液裂解灭活,制成牛流行热病毒灭活疫苗。现将灭活疫苗的制备、对牛的安全性和免疫原性、免疫期、保存期以及区域性试验等报告如下。     

高效制备霍乱弧菌菌影及其增强猪瘟疫苗免疫效果的研究

为评价霍乱弧菌菌影(VCG)对猪瘟活疫苗及猪瘟病毒E2蛋白抗原区(BC和AD区)亚单位疫苗免疫增强效果的作用,本实验首先利用含有裂解质粒的霍乱弧菌制备VCG,通过对细菌裂解前后进行平板计数及透射电镜检测VCG裂解效果,结果显示所制备的VCG裂解率高,且基本形成一个完整的细菌空壳。在确定最佳猪瘟活疫苗使用量后探究VCG对猪瘟活疫苗(CFS ST)免疫效果的影响,实验分别用VCG+CFS ST和CFS ST免疫家兔一次,设置对照组,并在免疫第42 d后攻毒。本研究还探究了VCG作为佐剂对猪瘟E2蛋白主要抗原区蛋白亚单位疫苗免疫效果的影响,实验分别用完全弗氏佐剂(CFA)和VCG联合E2蛋白主要抗原区蛋白,通过间隔两周的方式分4次免疫家兔,设置对照组,并在免疫第56 d后攻毒。通过阻断ELISA方法每周检测家兔血清的抗体阻断率,免疫后以500 RID_(50)的猪瘟病毒弱毒株通过耳缘静脉注射方式对家兔攻毒。结果显示,50 RID_(50)的猪瘟活疫苗组家兔血清抗体阻断率显著降低(p0.001);VCG+CFS ST组家兔猪瘟抗体阻断率在免疫14 d后大部分时间点显著高于CFS ST组(p0.05),并且攻毒后仅对照组出现定型热反应;CFA(E2)组和VCG(E2)组的家兔猪瘟抗体阻断率均显著达到较高水平(p0.001),并且攻毒后仅对照组出现定型热反应。以上结果表明VCG可作为免疫佐剂增强猪瘟活疫苗的免疫效果;VCG联合猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区亚单位疫苗在家兔中也具有较好的免疫效果。本研究为研发廉价高效的疫苗佐剂提供重要的实验依据。     

猪瘟E2亚单位疫苗研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒引起的危害极大的一种传染病,具有高度的传染性和致死性,利用疫苗控制该病的流行是世界各国使用的广泛策略。E2亚单位疫苗具有安全性好、稳定性强的特点,且具有自然感染和接种疫苗的抗体差异,是未来新型疫苗研究的方向之一。本文综述了E2亚单位疫苗的保护效力、影响因素及未来发展方向。     

表达西尼罗病毒囊膜糖蛋白PrM/E重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究

西尼罗病毒(WNV)是一种可以导致人与动物死亡的人兽共患病的虫媒病毒。为构建表达WNV Pr M/E蛋白的重组新城疫病毒(NDV)La Sota疫苗株并对其免疫原性进行评价,本研究利用反向遗传学操作技术将人工合成的WNV pr M/E基因插入至NDV基因组P和M基因之间,构建重组病毒r La-WNV-Pr M/E。以重组病毒分别感染BHK-21细胞和免疫小鼠,利用RT-PCR、间接免疫荧光、ELISA和流式细胞术(FACS)检测Pr M/E蛋白的表达情况及免疫效果。结果显示,WNV-Pr M/E蛋白在BHK-21细胞中获得正确表达,免疫小鼠可以诱导其产生高水平的抗Pr M/E蛋白特异性Ig G,并且诱导产生WNV E蛋白表位特异性CD4+和CD8+T细胞免疫反应。以上结果表明本研究构建的r La-WNV-Pr M/E可以作为一种具有前瞻性和储备性且安全有效的西尼罗热防控候选疫苗,对我国应对该病的潜在威胁具有十分重要的意义。     

日本乙誓脑炎病毒NS1基因及其疫苗的研究进展

日本乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的严重的人畜共患传染病。乙型脑炎病毒的三种糖基化蛋白PrM、E和NS1是其主要免疫保护性抗原,其中PrM和E蛋白是日本乙型脑炎病毒的结构蛋白,其结构和相关疫苗研究的报道较多。NS1蛋白是日本乙型脑炎病毒的非结构蛋白,其主要参与病毒复制的早期阶段,推测可能参与病毒组装和释放。可诱导补体依赖性溶细胞反应,不能产生中和抗体,能诱发机体在非中和性抗体存在的情况下产生保护性免疫。在接种乙脑病毒的细胞的细胞内、细胞表面及上清液中均含有大量的NS1蛋白。对小鼠接种NS1蛋白或NS1蛋白特异性抗体,均能让小鼠产生对乙脑病毒感染的保护性免疫作用。本文主要就乙型脑炎病毒非结构基因NS1及其免疫疫苗的研究进展进行综述,为其更进一步深入研究IEV NS1基因及其相关疫苗奠定基础。     

细胞源猪瘟活疫苗E2基因遗传稳定性和免疫原性分析

测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与GenBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通过生物信息学手段对预测的E2蛋白N-糖基化位点、E2蛋白磷酸化位点和理化特性以及模拟的蛋白空间结构进行了比较,并通过免疫攻毒试验对4个细胞源猪瘟疫苗(C株)的免疫效果进行了验证。结果表明,与猪瘟病毒C株原始种毒相比,尽管中国4个细胞源猪瘟活疫苗的E2基因核苷酸序列、推导的E2蛋白氨基酸序列或模拟的三维结构等发生个别核苷酸变异、个别氨基酸位点突变或缺失,但均不影响猪瘟C株的免疫原性,猪瘟疫苗C株仍然是防控猪瘟的最有效武器。     

五种猪瘟疫苗免疫效果的试验报告

选用21日龄体重相近的大白哺乳仔猪165头,根据体重、性别和日龄相近的原则,均匀分为五组(即A组、B组、C组、D组和E组)。25日龄首次免疫猪瘟疫苗1头份∕头次,66日龄二次免疫猪瘟疫苗1头份∕头次,每组猪两次免疫的猪瘟疫苗相同。A组免疫接种ZM猪瘟脾淋疫苗,B组免疫接种ZM猪瘟细胞苗,C组免疫接种QL猪瘟脾淋苗,D组免疫接种QL猪瘟细胞苗,E组免疫接种YS猪瘟ST传代细胞苗。对五组仔猪在首次免疫后40天、二次免疫后25天和二次免疫后76天分别检测猪瘟疫苗抗体效价。试验结果表明,E组、C组免疫效果优于其他各组。     

病毒保护剂在猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗中的研究

将病毒保护剂运用于猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗生产中，结果表明：20％的病毒保护剂对产毒有轻微损伤作用，10％的病毒保护剂要略好于对照组，通过蛋白浓度测定证实提高22％。试验组和对照组的反复冻融试验表明对照组冻融六次即为临界点，病毒保护剂组达10次。冷冻保存期试验表明对照组保存三个月合格，而病毒保护剂组可达五个月。37℃耐热试验表明对照组在8h内合格，病毒保护剂组达10h。细胞毒电镜观察试验及主要保护性抗原基因E2、E0测序比对结果表明，病毒保护剂不改变病毒粒子形态，且不产生基因突变。抗体水平和免疫攻毒试验结果表明，病毒保护剂能刺激机体早期抗体的产生，且免疫保护力坚强。     

不同阶段猪只圆环病毒2型疫苗免疫程序研究

试验旨在研究不同阶段接种猪圆环病毒2型疫苗的免疫效果,主要通过检测猪只的料重比、死亡率、淘汰率、成活率,选择一种最佳的免疫方式在实际生产中运用。采用大规模群体试验(猪群数量约40 000头),在14、35日龄以及在14、35、63日龄分别进行2次和3次猪圆环病毒2型疫苗免疫。结果表明,与圆环病毒2型疫苗免疫2次相比,免疫3次在降低猪只的死亡率、淘汰率和料重比,以及提高猪只的成活率上更优越。结论:圆环病毒2型疫苗免疫3次的效果优于免疫2次,猪场圆环病毒2型疫苗免疫时可以根据猪场的实际状况进行3次免疫。     

3种不同类型佐剂的猪瘟E2基因工程亚单位疫苗免疫效果的比较研究

为了筛选用于制备猪瘟E2基因工程亚单位疫苗的佐剂,用水佐剂、双相佐剂以及油包水佐剂分别制备了 3种猪瘟E2基因工程亚单位疫苗,在猪上进行了免疫效果的评价.本试验选取4～5周龄猪瘟病毒病原、抗体阴性猪40头,随机分为8组,每组5头,其中3组用于3种不同佐剂制备的亚单位疫苗的单次免疫效果评价,3组用于疫苗的二次加强免疫效果...