蝉拟青霉多糖的纯化工艺

以多糖含量为指标,对除蛋白、脱色、透析纯化工艺参数进行优化,以期提高蝉拟青霉多糖的纯化工艺水平。结果显示:以木瓜蛋白酶提取液,Sevag法脱蛋白2次基本除蛋白完全;AB-8型大孔吸附树脂纯化效果最好,在p H为7、温度25℃、4mg/m L上样液浓度、2m L/min上样速度;透析时间为72h的纯化条件下,纯化效果最好。     

蝉拟青霉多糖醇沉淀研究

为进一步对蝉拟青霉多糖醇沉淀工艺进行研究,对提取时间、醇沉浓度、浓缩倍数等提取工艺影响因素分别做了探讨,并通过正交实验得出了较优化提取工艺路线。结果表明,醇沉时间为60 h,醇沉浓度为70%,浓缩倍数为3倍时进行醇沉试验最佳。     

提高蝉拟青霉多糖产量的液体发酵条件研究

以蝉拟青霉(Paecilomyses cicadae)0305-3菌株为材料,研究了提高蝉拟青霉多糖含量的液体发酵条件。结果表明,蝉拟青霉多糖含量的最佳液体发酵条件为:在液体培养基中,以7%的接种量将浓度为107个/mL的孢子悬液接入装液量为20%的液体培养基中,于pH 7、27℃1、50 r/min的转速下发酵7 d,0305-3菌株的多糖产量可达3.24 g/L。     

酶法提取蝉拟青霉多糖的研究

用正交优化的方法分别研究木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶对蝉拟青霉多糖得率的影响。结果表明,木瓜蛋白酶法提取的多糖产量最高,其最佳提取条件是:温度50℃、pH7、木瓜蛋白酶1%、酶作用时间2h。     

蝉拟青霉生物多样性Ⅰ.蝉花和蝉拟青霉的形态多样性

采集蝉花标本50余例,研究观察了蝉拟青霉的多个分离体。结果表明,广泛分布于不同地域不同生态环境的蝉拟青霉形成了形态特征和产孢结构的多样性。研究其存在和变化规律有助对生物资源的保护和利用,有助充实真菌学内容和丰富其基础理论。     

蝉拟青霉对蚕豆蚜虫致病性的初步研究

研究了8株蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)对蚕豆蚜虫的致病性。结果表明,8株蝉拟青霉分生孢子悬液、菌丝悬液对蚕豆蚜虫的致病性有一定差异,孢子悬液的致病性强于菌丝悬液,其中GZDXIFR4611菌的感染致死效果最好,其孢子悬液的致死率可达到86.7%,菌丝悬液的致死率可达到66.7%,这将为蝉拟青霉作为一类重要的生防真菌提供参考数据。     

蝉拟青霉原生质体形成与再生

比较了不同酶液,菌丝生长增减基,渗透稳定剂,酶解温度及菌龄等因素对原生质体形成的影响。用１．５％的溶壁酶,菌丝生长培养在为淀粉琼脂培养基,０．６ＭＫＣｌ为渗透稳定剂,温度２８℃,菌龄１６ｈ,可从所试菌株的菌丝获得大量的原生质体。０．６ＭＮａＣｌ为稳定液,黄豆粉培养基上原生质体再生率可达７．９７％。原原生质体释放和再生的形态学过程进行了描述和显微摄影。     

蝉拟青霉对小菜蛾致病性的研究

应用4株蝉拟青霉开展对小菜蛾致病性的研究。结果表明：4株蝉拟青霉分生孢子、菌丝对小菜蛾的致病性有一定差异,其中GZDXIFR4611的感染致死效果最好,孢子悬液的致死率可达到70%,菌丝悬液的致死率可达到65%,为将蝉拟青霉作为一类重要的生防真菌提供了参考数据。     

蝉拟青霉最适液体培养基的正交试验研究

以三因素三水平的正交试验设计培养条件,接种量5%（V/V）,pH=6.5,120r/min,28℃,120h,对蝉拟青霉菌Paecilomyces cicadae进行液体培养。通过对生长的菌丝体干重的测定及分析,得到该菌生长最适培养基配方为葡萄糖：20g/L,酵母膏：5g/L,K2HPO4:1g/L,并证明碳源为其生长的最重要营养因素。     

蝉拟青霉分生孢子萌发的影响因子

研究了不同营养、温度、湿度、光照、pH值等条件对蝉拟青霉LB菌株分生孢子萌发的影响.结果表明:2%葡萄糖+1%蛋白胨溶液制成孢子悬浮液的萌发率最高达95.09%;25～27℃是蝉拟青霉LB菌株分生孢子萌发的适宜温度条件;分生孢子萌发所需湿度为90%～100%,当湿度低于90%时萌发受到抑制;分生孢子在pH 6～7的中性至弱酸环境下萌发最好;光照对孢子萌发无影响;紫外线对孢子有明显的杀伤作用,随紫外线照射时间的延长,孢子萌发率明显降低,经紫外线照射后孢子有萌发迟缓的现象.     

蝉拟青霉对蚜虫的致病性研究

[目的]蝉拟青霉在害虫防治上有很大的优越性。研究了蝉拟青霉菌株对中药材板蓝根蚜虫的防治效果。[方法]通过生物测定法,对蝉拟青霉4个菌株致病性进行了测定。[结果]蝉拟青霉分生孢子、菌丝、发酵代谢产物均对蚜虫有一定的杀蚜效果。蝉拟青霉侵染蚜虫处理48 h后3 L菌株发酵产物对蚜虫的致死率最高,可达94.38%;处理7 d后孢子对蚜虫的校正死亡率可达83.52%,菌丝对蚜虫的校正死亡率可达82.35%。[结论]蝉拟青霉3716菌株和3L菌株对蚜虫的致死效果佳,作为蚜虫生物防治因子有较大的潜力。     

蝉拟青霉APC20菌株对小菜蛾的室内毒力试验

[目的]为蝉拟青霉的进一步应用提供理论依据。[方法]采用生物测定法测定蝉拟青霉APC20菌株对小菜蛾的室内毒力。[结果]药后第1~4天,蝉拟青霉APC20各个浓度的孢子悬浮液对小菜蛾的校正死亡率均低于50%,而第7天,浓度为3.0×108个/ml的孢子悬浮液对小菜蛾的校正死亡率达85.11%,并且虫尸布满蝉拟青霉的菌丝体和孢子粉,说明APC20对小菜蛾呈现较强的寄生致死性。蝉拟青霉菌株APC20对小菜蛾具有较强的侵染力,处理小菜蛾第4~7天的LC50分别为5.3×105、1.1×105、1.1×104、8.9×102个/ml。[结论]蝉拟青霉APC20菌株对小菜蛾具有一定的致病力。     

激素对蝉拟青霉胞内核苷合成的影响

[目的]在蝉拟青霉液体深层发酵过程中添加6-苄氨基嘌呤(6-BA)和3-吲哚乙酸2种激素以考察激素对蝉拟青霉代谢途径的影响。[方法]在蝉拟青霉液体发酵培养基中,按照5 mg/L的比例添加激素6-苄氨基嘌呤和3-吲哚乙酸,研究激素对蝉拟青霉液体发酵过程中生物量、胞内总核苷和腺苷合成的影响。[结果]2个试验组在整个发酵过程中生长代谢节奏与对照组间存在一定差异;6-BA试验组和3-吲哚乙酸试验组蝉拟青霉于发酵第3天达到最大生物量,分别为6.135 g/L和5.860 g/L,比对照组分别提高了19.10%和13.76%,显著高于对照组(P0.05),而且试验组比对照组提前24 h达到最大值;6-BA试验组和3-吲哚乙酸试验组胞内总核苷最高含量分别达到18.49 mg/g和16.77 mg/g,显著高于对照组(P0.05),比对照组分别提高了65.24%和49.87%;6-BA试验组胞内腺苷含量于发酵第4天达到最大值2.32 mg/g,3-吲哚乙酸试验组于第3天达到最大值1.82 mg/g,对照组于发酵第4天胞内腺苷含量达到最大值1.75 mg/g,统计分析后发现6-BA试验组胞内腺苷最高含量显著高于3-吲哚乙酸试验组和对照组(P0.05)。[结论]2种激素在蝉拟青霉液体深层发酵过程中的添加对于提高虫草相关制品品质发挥了积极作用,同时也说明激素确实会改变微生物的代谢途径及生长节奏。     

吡虫啉与蝉拟青霉的相容性及增效作用研究

为了提高蝉拟青霉的杀虫毒力,研究了吡虫啉对蝉拟青霉菌落生长、产孢、孢子萌发的影响及菌药混用的杀虫效果。结果表明,致死剂量(1∶3 000)的吡虫啉对蝉拟青霉菌落生长和产孢有一定的影响,而亚致死剂量(1∶15 000)和次亚致死剂量(1∶30 000)的吡虫啉对菌落生长、产孢、孢子萌发均无显著影响,其对菌落生长的抑菌率分别为2.53%和0.73%,对孢子萌发的抑制率仅为1.02%、-0.35%。该药剂亚致死剂量和次亚致死剂量分别与蝉拟青霉孢子液混用后,对蚜虫的致死中时(LT50)比单用孢子液提前了0.37d、0.26d,蚜虫的校正死亡率也增加。表明亚致死剂量和次亚致死剂量的吡虫啉与蝉拟青霉具有良好的相容性,混用后具有明显的增效作用。     

蝉拟青霉杀虫活性成分的分离

 【目的】采用化学分离分析和生物检测相结合的方法，首次从蝉拟青霉[Paecilomyces cicadae （Miq.）Samson]子实体提取物中分离出对小菜蛾[Plitella xylostella （Lepidoptera：Plutellidae）]具有杀虫活性的化合 物。【方法】在活性检测引导下，蝉拟青霉子实体40%乙醇提取物经二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇溶剂依次萃取（剩余溶液为水溶组分），再经过大孔树脂、HPLC和Sephedex LH-20分离纯化得到杀虫活性化合物。【结果】分离纯化到一 个白色粉末状化合物，浓度10 mg•ml-1，24、48和72 h时校正死亡率分别为（95.1±1.8）%、（97.7±1.6）%和（99.1±1.7）%。【结论】该化合物具有较好的杀小菜蛾活性，对酸稳定，对胃蛋白酶不敏感，并具有茚三酮不显色等其它理化性质。     

Separation of Insecticidal Ingredient of Paecilomyces cicadae （Miquel） Samson

In this study, the insecticidal active substance of the fruiting body of Paecilomyces cicadae （Miquel） Samson that can kill the larvae of Plutella xylostella （Lepidoptera： Plutellidae） was isolated and purified by combined separation with biology experiments for the first time. By means of bioactive guided isolation of 40% ethanol-H2O, dichloromethane, ethyl acetate, n-butyl ethanol, macroporous adsorption resin column, high performance liquid chromatography, and sephadex A-20 column, the insecticidal active compound was purified,and a white powder compound was obtained. The compound was active against the third instar larvae ofP. xylostella in 24, 48, and 72 h at the concentration of 10.0 mg mL-1 with a corrective mortality of （95.1 ± 1.8）, （97.7 ± 1.6）, and （99.1 ± 1.7）%, respectively. The compound was strongly sensitive to the larvae. It was stable at acid environment, and was not sensitive to pepsin, and other chracteristics were studied.