一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

AFLP在蔬菜遗传育种中的应用

AFLP分子标记技术是一种最新的DNA指纹技术。本文简要介绍了AFLP的基本原理，阐述了AFLP在蔬菜作物遗传育种中的应用，并展望其广阔前景。     

AFLP技术及其在果树遗传育种上的应用

分子标记是继形态学标记、细胞学标记和生化标记之后发展起来的一种新的遗传标记形式，是DNA分子碱基序列变异的直接反映。分子标记不受内外环境、发育阶段和组织器官的影响，数量极多，多态性高，与基因表达与否无关，且操作简单，检测迅速，因此在农业科研中得到了广泛的应用。果树基因组高度杂合，而且具有童期，因此遗传育种的难度较大、周期长、效率不高，分子标记在果树上的应用大大提高了果树遗传育种的效率。果树上常用的分子标记方法有RFLP、RAPD、AFLP、SSR和ISSR等。     

AFLP标记在大白菜遗传育种中的应用

AFLP标记是一种新的DNA分子标记技术。对AFLP标记的基本原理、技术流程和关键技术做了简要介绍,从亲缘关系与遗传多样性分析、遗传图谱的构建、特定性状的连锁标记、品种纯度鉴定与QTL分析等方面概述了AFLP标记在大白菜遗传育种中的应用进展,并对其应用前景进行了展望。     

AFLP及其在果树中的应用

通过对AFIP技术（扩增片段长度多态性）的基本原理、技术特点的介绍，综述了利用AFLP标记技术开展果树遗传图谱构建、指纹图普绘制与品种鉴定、遗传多样性分析及基因定位等方面的研究。     

番茄不成熟基因nor的AFLP分子标记研究进展

综述了番茄不成熟基因nor的发现过程及含不成熟基因番茄的特点,AFLP分子标记的技术以及在番茄育种上的应用:构建遗传图谱、基因定位、辅助选择育种和种质资源研究与品种纯度鉴定等;讨论了番茄不成熟基因和AFLP标记存在的问题,并展望了其应用前景。     

果梅(Prunus mume)品种的荧光AFLP指纹分析

荧光AFLP以其操作简易、灵敏性高、可半自动化操作、可软件辅助分析等特点在果树品种鉴定以及遗传资源分析中具有明显的优越性。对荧光AFLP用于果梅品种鉴定进行了研究。所利用的8对选择性引物都可以获得清晰的AFLP指纹,并且任何一对引物都能够很好的区分这50个品种,表明了该技术适于快速鉴定大量果梅品种或用于种质资源的遗传分析。同时,研究利用AFLP指纹信息对来源我国江苏、浙江、广东、福建、云南、四川、湖南7个省份以及日本的果梅品种的遗传多样性指数进行了分析,结果表明,日本(0.2451),中国江苏、浙江(0.1912)果梅的遗传多样性水平明显高于其他几个省份,可能由于这2个地区果梅品种的来源渠道多或者存在其他物种的基因渗入。     

猕猴桃雌雄性别的AFLP鉴别中DNA模板的制备

基因组DNA的成功制备和避免降解是AFLP成功的关键。描述了猕猴桃AFLP研究中的DNA模板制备方法，尤其是DNA的提取和纯化，以及基因组DNA的酶切中常见的问题及其相应的解决措施。应用这些方法得到了猕猴桃清晰的AFLP指纹图谱。     

荔枝品种亲缘关系的AFLP分析

 应用AFLP技术，对39个荔枝品种进行了遗传多样性分析及分类研究。筛选出适于荔枝AFLP分析的最佳引物组合3对，分别为EcoRI AAC+MseI CTG，EcoPd AGC+MseI CAT，EcoRI ACC+Msel CAT。在分子水平上，荔枝品种的遗传多样性并非形态学性状所体现的那样丰富。AFLP分析将39个荔枝品种分成了6组，与传统的以果皮龟裂片隆起类型为分类标准的分类没有一致性。初步建立起荔枝主要栽培品种的分子标记标准图谱。应用AFLP技术对来自两个不同地方的两个荔枝品种(桂味、妃子笑)进行了鉴别。     

葡萄AFLP技术体系建立及其在超藤与藤稔葡萄品种鉴别中的应用

超藤葡萄是藤稔葡萄的一个芽变品种,由于2者亲缘关系十分接近,应用形态学手段以及RAPD分子标记不易区分。针对葡萄叶片富含多糖和多酚类等杂质的特点,从基因组DNA纯化入手,对AFLP流程进行了优化改进,建立了葡萄AFLP体系,并成功地对此2个品种进行了区分。采用引物组合M-CAT+E-ACG进行AFLP扩增,超藤葡萄出现167bp特异带。     

草莓品种亲缘关系的AFLP分子标记分析

 利用AFLP技术对我国国家草莓资源圃内保存的107个草莓品种进行了DNA多态性分析。从64对“2 + 2”引物中筛选出10对引物应用于扩增基因组DNA, 共获得清晰可辨的581条带, 其中412条为多态性带。UPGMA方法聚类分析结果显示, AFLP分子鉴定结果与其系谱关系非常一致, 表明AFLP指纹图谱分析能很好地鉴别草莓品种之间的遗传关系。     

枇杷AFLP分析体系的建立与应用

为研究枇杷种质资源遗传多样性和亲缘关系的技术平台奠定基础,以来自5个不同国家43份枇杷种质为试材研究枇杷基因组AFLP反应体系。通过检测AFLP分析中DNA提取、酶切及连接、预扩增和选择性扩增的结果,对影响AFLP分析的主要因子进行分析,建立了AFLP分析体系。利用该体系并选用EcoRI—AGG+MseI—CAC引物组合对供试材料进行扩增,获得的条带清晰可辩,说明所建立的反应体系适合于枇杷进行AFLP分析。     

铜胁迫对蚕豆幼苗基因组DNA损伤效应的研究

采用AFLP分子标记技术,研究了Cu胁迫对蚕豆幼苗根系生长的影响和基因组DNA的损伤效应。结果表明:不同浓度(12.5、25、50 mg/L)Cu处理7 d后,蚕豆幼苗根长和根系内的可溶性蛋白含量均受到了抑制;基因组DNA的AFLP图谱发生显著变化,多态性增加,且与Cu浓度存在明显的剂量关系;Cu影响蚕豆幼苗根尖细胞基因组DNA的稳定性,利用AFLP技术获得的DNA多态性变化可作为土壤Cu污染的早期诊断。     

云南芋种质资源遗传多样性的AFLP分析

 采用荧光标记引物的AFLP分子标记技术, 用筛选出的“3 + 2”引物组合, 对48份云南芋种进行遗传多样性分析, 3对引物共扩增出184个DNA位点, 平均每对引物可检测出56.3个多态性位点,多态性位点高达91.8% , 云南芋种质资源在DNA分子水平上表现出极为丰富的遗传多样性。聚类分析表明: 野生种质和栽培种质的亲缘关系较远, 栽培种质基于AFLP标记的分类结果与形态性状基本一致, 少数材料差异较大。     

菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立

为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。     

部分板栗品种遗传多样性的AFLP分析

利用荧光标记AFLP技术,采用7对M+3和E+3引物组合对30份板栗和日本栗栽培品种进行了总基因组DNA水平上的多态性检测,共获得962条可统计的条带,其中852条呈多态性,多态性带百分率达89％。揭示了板栗丰富的遗传多样性。7组引物在30个品种中检测到数目不等的品种特异带型,对供试板栗品种具有一定的鉴别价值。7对引物能将30个板栗和日本栗品种完全区分开。聚类分析结果表明,多数来源地相同的板栗品种资源表现出较为密切的亲缘关系。     

番荔枝DNA的提取和AFLP体系的建立

以7份番荔枝品种为试材,通过对DNA的提取、酶切、连接、预扩增和选择性扩增等分析,建立并研究番荔枝的AFLP分析体系,以其找出番荔枝品种间的亲缘关系,为番荔枝的杂交育种的亲本选择和嫁接砧中砧穗选择提供理论基础.结果表明:利用该体系对7份番荔枝的样品进行了分析,可以获得清晰的条带,表明所建立的体系可使用于番荔枝AFLP分析.     

利用AFLP鉴定柑橘变异

利用AFLP分析鉴定了7个柑橘变异类型,从64对引物组合中筛选了8对引物组合,共得到334个扩增位点2099条带数据。7个变异类型与亲本品种之间多态性带为36至92条,变异类型的多态性带数与亲本品种总带数的比例为0.1721至0.4182。说明变异类型的遗传基础已经发生了不同程度的改变,7个柑橘变异类型应是芽变,具备了成为新品种的遗传基础,特别是红皮冰糖脐橙选育成功将填补高糖脐橙空白。研究同时表明,AFLP具有扩增谱带多,谱带清晰,扩增信息量大的特点。根据谱带位点差异即可鉴定柑橘变异是否遗传,多态性位点数也反映了性状变异程度。AFLP方法1次可同时鉴定多个变异类型,是柑橘新品种选育早期鉴定灵敏、可靠、有效的方法。     

用AFLP分子标记鉴定冬枣自然授粉实生后代杂种的研究

 应用AFLP技术对65株冬枣自然授粉实生后代进行杂种鉴定, 从81对EcoRⅠ和MseⅠ选择性引物中筛选出12对带型清晰且多态性较高的引物。用这12对引物共扩增出517条谱带, 其中多态性带376条, 多态性百分率为72.7%。共扩增出金丝小枣特征带10条, 鉴定出34株冬枣×金丝小枣杂交实生苗;扩增出尖枣特征带7条, 鉴定出冬枣×尖枣杂交实生苗15株; 不能确定的有16株。