三疣梭子蟹野生群体同工酶的遗传多态性分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直电泳技术对三疣梭子蟹野生群体的同工酶进行检测.分析了48个样本的11种同工酶在三疣梭子蟹肌肉中的表达情况.11种同工酶(MDH、LDH、ME、SOD、 EST、SDH、IDH、ADH、POD、CAT、AAT)共检测出20个基因座位,其中Me-2、Sod-3、Cat-3、Ldh-2共4个座位呈多态(P0.99),多态座位百分数P为20%.平均每个座位的有效等位基因数目Ae为1.230,预期杂合度He为0.094,实际杂合度Ho为0.175.同时还分析了三疣梭子蟹4个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d.与日本绒螯蟹、中华绒螯蟹等相比,三疣梭子蟹野生群体的遗传多样性水平较高,种质资源还处于较好的状态.     

三疣梭子蟹野生群体同工酶遗传多态性分析

三疣梭子蟹野生群体同工酶的遗传多态性分析=Isozyme polymorphism in Portunus trituberculatus from wild population ［刊,中］/高保全（中国海洋大学生命科学与技术学部,青岛266003）,刘萍,李健,戴芳钰//水产学报,—2007,31(1).-1～6 采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直电泳技术对三疣梭子蟹野生群体的同工酶进行检测。分析了48个样本的11种同工酶在三疣梭子蟹肌肉中的表达情况。11种同工酶(MDH、LDH、ME、SOD、 EST、SDH、IDH、ADH、POD、CAT、AAT)共检测出20个基因座位,其中Me-2、Sod-3、Cat-3、Ldh-2共4个座位呈多态(P0.99),多态座位百分数P为20%。平均每个座位的有效等位基因数目Ae为1.230,预期杂合度He为0.094,实际杂合度Ho为0.175。同时还分析了三疣梭子蟹4个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d。与日本绒螯蟹、中华绒螯蟹等相比,三疣梭子蟹野生群体的遗传多样性水平较高,种质资源还处于较好的状态。图1表3参22 关键词：三疣梭子蟹;野生群体;同工酶;多态性 E-mail：liuping@ysfri.ac.cn     

合浦珠母贝同工酶的电泳分析

采用聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直板电泳技术和特异性染色方法，对合浦珠母贝外套膜、闭壳肌、肝脏和鳃组织中的15种同工酶系统进行分析，结果表明a-GPDH、ADH在4种组织中均未见表达；AK、AMY、PGM、ALP、GDH和LDH只在肝脏中表达，而ME、SOD、EST、MDH、G6PD、6PGD和AAT则有较广泛的组织分布，其中12个座位(Aat-1、Aat-2、Sod-1、Sod-2、Sod-3、Sod-4、m-Mdh-c、G6pd-2、6Pgd-2、Ak-1、Gdh-1、Me-2)具有多态性，多态位点比例为46.1％，平均杂合度0.1122±0.0576。     

企鹅珍珠贝同工酶酶谱特征及其遗传分析

采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分离技术,对企鹅珍珠贝闭壳肌、外套膜、鳃、消化盲囊、足组织的SOD、EST、LDH、G6PDH、MDH、ME 6种同工酶酶谱特征及其遗传控制进行了研究。6种同工酶在不同组织中的表达有明显的差异,同工酶分析共检测到18个位点,其中有16个位点具多态性,群体中,多态位点比例为88.8％,平均杂合度为0.396±0.029。有13个多态位点上的基因型频率与Hardy-Weinberg定律相符(P>0.05),位点Ldh-1、Ldh-2、Sod-2极显著偏离该平衡(P<0.01)。在G6pdh-1位点发现较高频率的无效等位基因。     

斑节对虾等位酶遗传分析

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对斑节对虾的养殖群体进行了8种等位酶的电泳检测和谱带遗传分析，确定了15个等位酶位点和19个等位基因，其中只有1个位点是多态的，它是Est-1（P0.95标准），有一个等位基因的位点有Est-2、Sod-1、Ldh-1、Adh-1、Sdh-1、Sdh-2、Me-1、Me-2、Mdb-1、Mdh-2、Mdb-3；有二个等位基因的位点有Est-1、Sdh-3、Aat-1、Aat-2、本研究揭示了斑节对虾群体等位酶位点及其等位基因带谱的变异式样，为斑节对虾的遗传育种及遗传结构的研究提供了一批 等位酶位点及其等位基因的参考图谱。     

新对虾等位酶的遗传控制

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对新对虾（Metapenaeus.spp）的养殖群体进行了7种等位酶的电泳检测和谱带遗传分析，确定了17个等位酶位点和22个等位基因，其中有4个位点是多态的，它是Esr-1、Sod-1、Me-4、Aat-1(P0.95f标准）。有一个等位基因的位点有Est-2、Lhd-1、Ldh-2、Sdh-1、Me-1、Me-2、Me-3、Me-5、Aat-2、Mdh-1、Mdh-2、Mdh-3、Mdh-4；有二个等位基因的位点有Sod-1、Me-4、Aat-1；有三个等位基因的位点有Est-1。本研究揭示了新对虾群体等位酶位点及其等位基因带谱的变异式样，为新对虾的遗传育种及遗传结构的研究提供了一批等位酶位点及其等位基因的参考图谱。     

菲律宾蛤仔4个野生群体的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直电泳技术对黄、渤海沿岸4个野生菲律宾蛤仔群体的同工酶进行了检测,8种同工酶共记录了18个基因座位,其中Est-1、Est-2、Sod-1、Sod-2、Ldh-1和Ldh-2共6个位点是多态的,多态座位百分数为33.33%。测得4群体平均等位基因数目为1.4412,平均有效等位基因数目1.1260,平均实际杂合度0.0570,平均期望杂合度0.0825,Hardy-Weinberg遗传偏离指数-0.2358,表明菲律宾蛤仔4个野生群体的遗传多样性属偏低水平。     

漠斑牙鲆引进种群同工酶的遗传多态性分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板电泳技术对引进种漠斑牙鲆（Paralichthys lethostigma）子一代的同工酶进行检测。分析了48个样本的15种同工酶在漠斑牙鲆肌肉和肝脏两种组织或器官中的表达情况，以期为其种质资源的保护和开发以及遗传育种方面的研究提供基础资料。15种同工酶共记录了33个基因座位，其中Me-1、Adh—1、Sdh—1、Sdh-2、Gdh—1、G6pd-1、Pgm—I1ldh—1、Cat—1、Pod—1和Pgi—1共11个座位呈多态，多态座位百分数是33．3％。平均每个座位的等位基因有效数值Ae为1．2196，预期杂合度He为0．1219，实际杂合度Ho为0．1547。同时还分析了漠斑牙鲆各个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d。这些数据说明，漠斑牙鲆群体拥有较高的遗传变异水平，还处于种质资源维持较好的状态，有利于对其资源进行开发以及对其遗传育种工作的展开。     

日本蟳4个地理群体遗传变异的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直电泳技术对中国沿海的大连黑石礁、山东莱州湾、江苏海州湾和浙江象山4个日本蟳地理群体的10种同工酶进行检测,并分析了群体间的生化遗传差异。实验共记录了28个座位,其中m-Mdh-1、Sod-3、Cat-3、Est-1、α-Amy-1、α-Amy-4、Ldh-2、Alp-1和Alp-3共9个座位表现为多态,4个群体的多态座位百分数（P0.99）均为32.14%,平均每个座位等位基因有效值Ae为1.283 0～1.297 9,平均预期杂合度He为0.146 2～0.155 6,平均观察杂合度Ho为0.273 8～0.278 3,遗传距离D为0.000 4～0.001 8。4个群体的聚类分析表明,莱州湾和大连群体亲缘关系最近,而象山群体与其他3个群体遗传距离较远。实验结果表明,日本蟳遗传多样性处于较高水平,种质资源维持良好,有利于其种质资源的开发及遗传改良等工作的开展。     

蓝色鳞鲤(Cyprinus carpio blue var)同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对蓝色鳞鲤(Cyprinus carpio blue var)进行同工酶分析。结果表明:在蓝色鳞鲤的眼睛、肌肉、肝脏、心脏、肾脏5种组织中,14种酶(LDH、ADH、GDH、MDH、G-6-PDH、EST、POD、SDH、FDH、SOD、α-AMY、CAT、COX、ME)的同工酶谱均存在明显的组织特异性。14种酶共记录出33个基因位点,其中α-Amy-2、Cox-2、Est-1、Ldh-1、Mdh-1、Mdh-2和Sod-1为多态位点。蓝色鳞鲤群体的多态位点百分数为21.21%(P0.99),平均预期杂合度和平均实际杂合度分别为0.1079和0.2121,遗传偏离指数(d)值为正。平均有效等位基因数(Ne)为1.24。实验表明,目前蓝色鳞鲤群体的种质资源状况尚好,表现出明显的杂交优势。     

两种壳色虾夷扇贝的同工酶分析

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳技术对两种壳色虾夷扇贝的闭壳肌进行了同工酶检测分析与比较。8种同工酶（MDH、ADH、ME、SOD、EST、GDH、SDH和α-AMY）共检测出17个位点,其中白色贝有7个多态位点,褐色贝有6个多态位点,多态位点（P0.99）的比例分别为41．18％和35．29％,白色贝和褐色贝平均每个位点的等位基因有效数目（Ac）分别为1．1421和1．1040,预期杂合度分别（Hc）为0．0919和0．0674,实际杂合度（Ho）分别为0．1275和0．0907,多态位点的遗传偏离指数表明,白色贝具有更高的遗传变异水平和多样性水平。住点Est-3可以作为鉴定白色贝和褐色贝的特异性蛋白质分子标记。     

应用SSR分析5个三疣梭子蟹野生群体的遗传多样性

利用本实验室筛选的8个微卫星分子标记,对中国舟山(ZS)、海州湾(HZ)、青岛会场(HC)、莱州湾(LZ)和鸭绿江口(YL)5个三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)野生群体共计120个个体进行了遗传多样性分析.结果显示,8个位点共扩增到72个等位基因,平均等位基因数为9.0,平均有效等位基因数为5.467 7;平均多态信息含量为0.696 7;平均期望杂合度(Hc)为0.750 8.5个群体的期望杂合度由高到低依次为LZ(0.770 4)、HC(0.758 8)、YL(0.755 2)、HZ(0.741 5)、ZS(0.728 3).卡方检验可知,34个群体位点组合符合Hardy-Weinberg平衡,占总数的85％.5个群体间的遗传距离在0.245 1～0.517 9之间,HC和HZ的遗传距离最小,LZ和ZS的遗传距离最大;通过构建UPGMA聚类树,发现5个群体聚为南北两大支,HC和HZ两个群体遗传距离最近先聚到一起,再与ZS群体相聚,形成南方群体;YL与LZ群体相聚形成北方群体,最后南北两大群体聚为一支.分析群体间的Fst值可知,两两群体间的Fst值在0.054 8～0.108 3 (0.05＜Fst＜0.15)之间,群体间产生了极显著的遗传分化.     

三疣梭子蟹多态性微卫星DNA标记的筛选及评价

根据前人FIASCO方法构建的三疣梭子蟹微卫星富集文库,对含微卫星的DNA序列设计了71对引物并对其进行了多态性筛选,筛选出21对多态的微卫星引物,对三疣梭子蟹1个野生群体的30个个体进行遗传多样性检测,同时对引物进行评价。21个位点共获得了188个等位基因,平均每个位点扩增得到8.9个等位基因。不同引物获得的等位基因数差异较大,从3～13个不等,其中Pot8、Pot37、Pot48、Pot53、Pot54、Pot66六个位点分别获得了11、12、12、11、13、11个等位基因,而Pot46仅获得了3个等位基因。等位基因的大小分布在131～312bp,基本符合引物设计时理论产物长度。21个微卫星位点的期望杂合度的范围为0.659～0.889,PIC值均高于0.5,表明它们都有很高的杂合度,均可用于三疣梭子蟹种群遗传结构分析,为三疣梭子蟹品种选育、种系评估提供更多的微卫星DNA信息。     

凡纳滨对虾引进群体和2个养殖群体遗传变异的微卫星分析

利用8个微卫星标记对引进的SPF凡纳滨对虾G0和两个养殖群体(G1,G2)进行遗传多样性分析。8个座位共获得64个等位基因,位点的等位基因数在5~l3之间。多态信息含量PIC在0.405 2~0.869 3之间,其中有6个位点为高度多态位点,适合于多态性分析。8个座位丢失的和新产生的等位基因共30个,占总数的47%。3个群体的平均观测杂合度分别为0.193 8、0.196 1、0.232 5,说明3个群体的遗传多样性较低。对近交系数Fis分析显示3个群体中存在近交,通过对哈迪温伯格平衡检验,显示所有座位均显著偏离平衡,存在杂合子缺失。通过配对Fst和Ne i遗传距离分析,显示3个群体之间有明显的遗传分化,说明种群结构发生了明显的遗传变异,变异可能来自于突变、随机漂变和选择的共同作用。实验结果能够很好地解释经过若干群体选育后,子代群体发生种质退化的现状,由此建议综合采用遗传育种的方法从引进的亲虾中筛选出性状优良稳定的仔虾作为虾苗。     

青岛汇泉湾大叶藻种群遗传多样性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术对青岛汇泉湾大叶藻种群内部的遗传多样性进行了初步分析,共研究了6种酶,得到该种群多态位点的比例（P％）为56．52％,每个位点平均等位基因数A／L为1．3478,根据其中17个位点,25个等位基因得到平均杂合度的预期值He为0．2122,观测值Ho为0．3251,对其遗传偏离进行D测验表明,大叶藻的杂合度较高,属于遗传多样性较为丰富的物种。     

仿刺参自然群体和养殖群体间遗传变异的微卫星标记研究

应用微卫星DNA技术对仿刺参自然群体和养殖群体遗传多样性进行了研究。在经过筛选的9个座位中,每个座位检测到的等位基因数为4～12个。自然和养殖群体中,有效等位基因平均数分别为6.5556和5.8889,观测杂合度的平均值分别为0.6416和0.5635。根据群体中各座位等位基因频率计算出两群体间的遗传相似度为0.7970、遗传距离为0.2269。对两群体进行Hardy-Weinberg平衡检验发现,两群体在某些位点都出现了杂合子缺失现象,特别是养殖群体在位点Psj2022,其Hardy-weinberg遗传偏离指数达0.5164。结果表明,与自然群体相比,仿刺参养殖群体存在杂合度降低,遗传多样性下降的现象,这可能与人工养殖过程中,亲本群体较小,引起近交机会增加有关。应制定相应的渔业生产和管理措施加以保护,以使仿刺参养殖持续健康发展。     

用微卫星DNA技术对中国对虾人工选育群体遗传多样性的研究

利用微卫星技术对中国对虾人工选育群体第1代和第6代群体的遗传多样性进行了分析。对10个微卫星位点进行了扩增,共产生74个等位基因,每个位点产生的等位基因数从3到13不等。在两个群体中,所观察到的等位基因数都比有效等位基因数多。多态信息含量PIC值0．5567～0．8877,说明这10个微卫星位点在中国对虾中具有较高的信息含量。两个群体的平均杂合度分别为0．6400(CP1)、0．6300(CP6),并通过计算基因型的P值,确定了对Hardy-Weinberg平衡的偏离情况。对Fis值的计算表明两个群体内共有5个微卫星位点存在杂合度观察值过剩的现象。两个群体的Shannon多样性指数分别为1．6830、1．7382,整个选育群体(两个群体作为一个群体)的遗传多样性指数为1．7742。从遗传多样性所占的比例来看,96．415％的遗传变异是来自群体内,只有3．585％的遗传变异是来自群体间。两个群体间的相似性系数高达0．9187,彼此间的遗传距离仅为0．0848,体现出人工选育群体的遗传分化程度较低。结果均说明第6代群体还有较大的选育潜力,可以继续保持遗传效应,最终保证选种育种工作的成功。     

文蛤30个微卫星标记的开发及在斧文蛤和帘文蛤

利用磁珠富集法构建的基因组文库和EST文库开发了30个文蛤多态性微卫星标记。8个G-SSR和22个EST-SSR多态性位点共获得140个等位基因,平均等位基因数为4.67,多态性信息含量、观测杂合度、期望杂合度分别介于0.172~0.744、0.040~0.720、0.187~0.793之间;G-SSRs的平均等位基因数、平均多态性信息含量、平均观测杂合度和平均期望杂合度都较EST-SSRs高;Hardy-Weinberg平衡检测发现,24个位点偏离了平衡状态;利用BLASTx对含多态性SSR位点的EST进行功能注释,11个位点来自注释基因序列。 将30对文蛤多态性SSR引物分别在斧文蛤和帘文蛤中进行了通用性检测,通用率分别为30%和40%。这些微卫星多态性位点的获得,为进一步开展文蛤遗传多样性分析、种质资源评价、分子标记辅助选育等奠定基础,并且可用于文蛤、斧文蛤和帘文蛤的比较作图、基因发掘和QTL定位等研究。     

红鳍东方鲀6种同工酶的组织特异性及基因位点分析

采用水平淀粉凝胶和聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳法,对2龄野生红鳍东方鲀的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、眼、鳃6种组织中的苹果酸酶(ME),乳酸脱氢酶(LDH),异柠檬酸脱氢酶(IDH),葡萄糖脱氢酶(GLCDH),磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和酯酶(EST)共6种同工酶进行了研究。结果表明,以上6种同工酶存在明显的组织特异性。LDH在除肝脏外的5种组织中活性很强,GLCDH只在肝脏中表达,鳃组织中的GLCDH和肌肉组织中的EST表达活性都很弱。6种同工酶共检测到12个基因位点,其中ME和PGM有两个基因位点编码,EST有5个基因位点编码。本试验还检测到Ldh-1、Est-1、Est-2、Est-3和Est-4共5个基因位点具有多态现象(P0·99),多态位点比例为41·67%,在12个基因位点共观察到17个等位基因表达,平均每个位点表达的等位基因数为1·417个。同时在红鳍东方鲀眼组织中发现,AB3型和B4型LDH间有一条酶带弱表达。     

星突江鲽（Platichthys stellatus）群体同工酶分析

采用水平凝胶电泳技术对星突江鲽（Platichthys stellatus）养殖群体进行了同工酶分析。筛选了9种酶,检测到15个位点,在0.99水平上,仅PGM^＊位点表现为多态,LDH^＊、SDH^＊、G3PDH^＊、GPI-1^＊、GPI-2^＊、GPI-3^＊、IDHP^＊、SOD-1^＊、SOD-2^＊、SOD-3^＊、MDH-1^＊、MDH-2^＊、MPI-1^＊和MPI-2^＊均为单态,多态位点比例为6.67%,实际观测杂合度为0.0098,预期杂合度为0.0303,平均有效等位基因数目为1.0557。结果表明,星突江鲽养殖群体的遗传多样性水平较低。