解淀粉芽胞杆菌的GFP标记及定殖能力

采用改良的海藻糖电转化法获得GFP标记菌株X5-GFP、BQA2-GFP,显微镜观察标记菌株在土壤和水培中的番茄根际的定殖情况。结果表明:标记菌株单独或与青枯菌先后加入进行处理,番茄根际标记菌株的种群数量变化趋势都是一致的。在土壤番茄根际中,X5-GFP单独处理后当天的菌量为1.05×106CFU/g,随之菌量逐渐下降;处理30 d后,为1.50×10~3CFU/g;而BQA2-GFP单独处理后当天菌量为1.68×106 CFU/g,随之菌量也逐渐下降;处理30 d后,为2.50×10~3CFU/g;在水培番茄根际中,X5-GFP单独处理后当天的菌量为2.70×10~5CFU/g,随之菌量逐渐下降;处理30 d后,为1.00×10~3 CFU/g;而BQA2-GFP单独处理后当天菌量为3.60×10~5CFU/g,随之菌量同样逐渐下降;处理30 d后,为1.50×10~3 CFU/g。这表明解淀粉芽胞杆菌X5、BQA2均在番茄根际有较强的定殖能力。     

贝莱斯芽胞杆菌LQ-3防治小麦纹枯病的效果及根际定殖能力

小麦纹枯病（wheat sharp eyespot）主要是由禾谷丝核菌（Rhizoctonia cerealis）侵染引起的一种土传真菌病害,严重威胁小麦生产安全。目前,利用生防细菌防治小麦纹枯病已成为研究热点,其中,研究最多的一类生防细菌为芽胞杆菌。为明确贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）LQ-3防治小麦纹枯病的效果及其在小麦根部定殖能力,本研究利用LQ-3发酵液灌根处理小麦苗,调查统计LQ-3对小麦纹枯病的防效。同时利用绿色荧光蛋白标记菌株LQ-3（pGFP78）灌根处理小麦根部,并结合抗生素平板回收检测、激光共聚焦显微镜观察方法,探明LQ-3在小麦根部的定殖动态。结果表明,LQ-3防治小麦纹枯病的效果为57.49%,与化学药剂27%苯醚·咯·噻虫悬浮种衣剂（酷拉斯）的防效（59.95%）相当。LQ-3（pGFP78）的生长趋势与野生型LQ-3相比并没有显著性差异,且仍具有游动性和生物膜形成能力。 LQ-3（pGFP78）发酵液初始浓度为2.3×10⁸ cfu·mL^-1,灌根处理5 d后,其在小麦根部的定殖量已达到9.63×10⁶cfu·g^-1,25 d后,定殖量仍有1.33×10⁶cfu·g^-1,表明LQ-3在小麦根部具有较好的定殖能力。     

枯草芽胞杆菌Tu-100对几种作物的促生效果

盆栽试验结果表明,枯草芽胞杆菌Tu-100对油菜、小麦、辣椒、西瓜、大豆和玉米苗期有不同的促生效果,在植物干重上分别比对照增加9.47%、1.37%、2.27%、19.23%、9.21%和6.67%.对水稻的盆栽产量增加12.82%.对大豆的结瘤数和鲜瘤重呈现负增长.植物促生根际细菌对不同的作物保持着不同的亲和性.     

枯草芽胞杆菌TR21叶腋喷施防治巴西蕉枯萎病

枯草芽孢杆菌TR21是一株植物内生菌,能够通过叶腋接种在香蕉体内定殖。采用叶腋接种法研究TR21对盆栽巴西蕉枯萎病的防治效果,并在大田采用随机区组试验设计,研究叶腋喷施TR21对巴西蕉枯萎病的防治效果和对巴西蕉挂果情况的影响。盆栽试验结果表明,按每次5.0×108 cfu/株的接种量,每隔10 d使用1次,连续使用4次,以地上部分萎蔫程度统计,30 d防效为(89.42±7.81)%,40 d防效为(85.95±2.77)%;结合地上部分萎蔫程度和球茎解剖结果统计,40 d防效为(79.32±4.49)%。从2008年4月至2009年2月进行田间试验,每次按1.8×108 cfu/株的用量,每隔10 d喷施1次,连续处理的植株到收获结束后,香蕉枯萎病发病率为(20.27±7.02)%,显著低于清水处理,防效达到61.92%。处理区2008年9月份的总挂果率达到25.00%,显著高于对照(3.13%),10月份的总挂果率为62.75%,高于对照(56.52%),但差异不显著。说明枯草芽孢杆菌TR21可以通过叶腋喷施接种防治巴西蕉枯萎病。     

枯草芽孢菌株TL2在茶树体内的内生定殖

枯草芽孢菌株TL2接种茶树后,可以从茶树不同组织分离到细菌,其细菌种群数量随着时间逐渐减少,其细菌多样性系数也随着时间有所降低。其菌体主要分布在根部厚壁组织的细胞间隙,茎部厚角组织的细胞间隙、维管束等组织的细胞间隙、叶片的气孔器附近、上下表皮细胞间隙、厚角组织细胞间隙以及内皮层组织细胞间隙等。     

酸碱条件对枯草芽胞杆菌FJAT-14254代谢物产生的影响

为考察酸碱条件对枯草芽胞杆菌FJAT-14254代谢物产生的影响,采用气相色谱-质谱联用分析枯草芽胞杆菌FJAT-14254菌株的胞内成分。结果表明：通过谱库扫描得到32种高匹配率代谢物的初步鉴定结果,主要包括氨基酸类、酸类、烷烃类等,其中含量相对较高的有7种;枯草芽胞杆菌FJAT-14254代谢物的种类和含量与其培养环境的酸碱度变化呈一定的相关性,强酸性(pH＝3)条件下培养的胞内代谢物具有特异性,而接近中性(pH＝5、7)条件及碱性(pH＝9、11)条件下培养胞内代谢物则相似。由此推断,不同pH条件影     

产碱假单胞菌在油菜根圈定殖的动态和分布研究

采用LacZ基因标记技术和常规方法跟踪产碱假单胞菌A9(LacZ)在缩影系统油菜根圈的定殖情况。A9(LacZ)在油菜不同根段部位的定殖密度,表现从上到下逐渐递减的现象,随着接种后时间的延长而逐渐下降。在根段8cm以外的根区几乎检测不到接种菌。在油菜播种后3d,定殖密度可达最高水平(7.6×105个/g),然后急速下降,30d后保持相对稳定的较低水平(1.1×102个/g)。     

5株生防菌定殖能力、促生作用及其对木薯细菌性枯萎病生防潜力的研究

生物防治是防控木薯病害的有效手段之一。生防菌株的筛选、定殖能力直接关系到菌株抗性的稳定性及防治木薯细菌性枯萎病的效果。本研究在前期大田初步筛选菌株及大棚盆栽防效测定实验的基础上,根据综合赋值结果优选5株生防菌株,对其大田防效潜力进行测定;分析生防菌株对木薯各项生长指标的影响;筛选出防效和促生效果均表现较好的菌株,研究其在木薯不同部位的定殖能力及消长动态变化,旨在为筛选木薯细菌性枯萎病生防菌株提供数据参考,为后期生防菌剂的研发提供理论依据。结果表明：5株生防菌株中HWY-3-1防效最好,平均防效为61.35%,DBS-5最低,为5.02%,其余3株菌株HWS-4-3、HS-4-7、HNR-3-7的防效分别为45.02%、19.09%和24.08%;与对照相比,5株生防菌株对木薯均有不同程度的促生效果,其中HWY-3-1菌株处理的木薯在株高、最大薯块直径和单株薯块重等生理特性上显著高于其他生防菌处理,HWY-3-1和HWS-4-3菌株处理后木薯的基部茎粗和薯块数显著高于其他菌株处理;综合比较,生防菌株HWY-3-1、HWS-4-3和DBS-5的防效和促生效果较好。3株生防菌株接种在木薯3个部位后均能稳定定殖,HWY-3-1的定殖能力最强;在根表土的定殖量显著高于叶片,嫩茎中的定殖量最少;3株菌株定殖后活菌数量均呈先上升后下降最后趋于稳定的变化趋势。     

枯草芽孢杆菌B215生物学特性及对香蕉枯萎病的生防效果评价

在室内测定菌株B215对香蕉枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发都有良好抑制效果的基础上,优化拮抗菌株的最佳培养条件为:在NA培养基上,装液量为50mL/500mL,最适初始pH值为7.0～7.5,初始接菌量为1%,培养温度为28℃,以便更好地应用于田间试验。以此培养条件为依据,开展拮抗菌株的盆栽小苗实验,选用正交试验L8(27)设计,得出菌株B215对香蕉枯萎病菌的最佳防效组合为:在小苗定植前,用活菌培养液750mL/株浸根,可以降低小区香蕉枯萎病发病率。进一步试验验证结果显示:盆栽试验B215对Foc的防效为62.95%。     

芽胞杆菌次生代谢产物及其在土传病害防控中的应用研究进展

介绍了芽胞杆菌次生代谢产物及防控土传病害的国内外研究现状,包括芽胞杆菌拮抗和促生物质种类、作用机理等,以及生防菌的防控应用、根际定殖等内容,并根据目前存在的问题进行了未来研究方向和前景展望。     

油菜根圈枯草芽孢杆菌Tu-100抗真菌范围和防治作用

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有抗胁迫生长和强竞争性等优势,是一种具有应用潜力的农作物病害生防细菌。本研究以来源于油菜根际、具有促生作用的枯草芽孢杆菌Tu-100为材料,研究了其抑制农作物真菌病原菌的作用范围和效果。结果证明：Tu-100对供试的12种真菌均有明显抑制作用。对峙培养试验结果显示：直接用Tu-100的发酵菌液与供试的10种病原真菌形成了明显的抑菌圈,浓缩10倍后对供试的12种真菌均形成直径27～40mm的抑菌圈。离体叶片上防治菌核病（Sclerotinia sclerotiorum）的试验结果显示：Tu-100菌液对油菜、大豆菌核病和玉米小斑病（Bipolaris maydis）均有显著防治作用。该菌株防治植物根部病害的进一步研究将具有实际应用意义。     

油菜抗菌核病材料宁RS-1的选育与利用

宁RS－1由甘蓝型油菜军农1号、3－67、Midas、Wesroona及花椰菜和白菜型油菜灌县花叶等亲本复合杂交育成。田间抗性鉴定结果表明，宁RS－1对油菜菌核病的相对抗病效果RRA和RRB分别为57.4%和55.7%，达到中抗水平；人工接种鉴定为低抗。利用宁RS－1为亲本，育成了多个双低油菜新品系以及宁杂花叶等双低抗病杂交油菜新组合，在各级产量鉴定试验中均表现良好。宁RS－1还被用于油菜菌核病抗性遗传与抗病基因分子标记研究。     

枯草芽孢杆菌Czk1与化学杀菌剂协同防治橡胶树根病

为探究枯草芽孢杆菌与化学杀菌剂协同防治橡胶树根病的可行性,为橡胶树根病的可持续防治提供依据。采用抑菌圈法和平板菌落计数法分别测定7种杀菌剂和枯草芽孢杆菌Czk1菌株对橡胶树红根病菌、褐根病菌的毒力以及杀菌剂与Czk1菌的生物相容性,并用Horsfall法确定复配方案。结果表明："根康"对橡胶树红根病菌和褐根病菌的EC₅₀分别为0.6253、0.0522 μg/mL,EC₅₀均最低且与Czk1菌有很好的生物相容性。"根康"（EC₅₀=0.6253 μg/mL）与Czk1(EC₅₀=6.46×10 ⁷ CFU/mL)混配,体积比V(Czk1)∶V("根康")=7∶3时,对红根病菌的增效比率值I_R值为1.60;"根康"（EC₅₀=0.0522 μg/mL）与生防菌Czk1（EC₅₀=2.33×10 ⁸ CFU/mL）混配,体积比V(Czk1)∶V("根康")=7∶3时,对褐根病菌I_R值为1.51。研究表明,"根康"可与Czk1联用协同防治橡胶树根病,菌药复配剂的防效明显优于单剂"根康"和单剂生防菌Czk1的防效,且混配剂中"根康"使用量只有单剂的1/3,大幅降低了化学药剂的使用量。     

培养条件对枯草芽胞杆菌TU100生长和产生抗菌物质的影响

以在油菜根际高效定殖的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)TU100为材料,研究其主要抗菌物质的代谢条件。证明其主要拮抗物质属胞外分泌型,释放到培养液中,对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)具有较高的抑制活性。TU100在28-30℃生长旺盛,产抗菌物质也较多;培养48h数量达最大值,培养72h抗菌物质的产生量达高峰。培养液的初始pH值6-8有利于TU100增殖,抗菌物质活性也最强;通气良好的条件下TU100菌株生长好、产抗菌物质量多;培养基C/N比对菌株生长也有重要影响,C/N比为15时有利于TU100生长以及抗菌物质的积累。     

Relationship between leaf injury and colonization of cabbage by Sclerotinia sclerotiorum

Mechanical and insect feeding injuries of cabbage provided sites for ingress by Sclerotinia sclerotiorum. In field studies, injuries sustained by hitting cabbage heads with a blunt object penetrated several leaf layers and were readily infected by S. sclerotiorum. Incidence of Sclerotinia rot ranged from 15 to 36% infected plants in the hitting treatment. Disease incidence was low (0–5%) when wounds were created by allowing lepidopterous larvae (the imported cabbageworm, Pieris rapae L., the diamondback moth, Plutella xylostella L., and the cabbage looper, Trichoplusia ni Hubner) to feed on cabbage leaves. The incidence of colonization of lepidopterous larvae feeding sites by S. sclerotiorum was greater in greenhouse studies (5–60% infected feeding sites) than in field studies. In greenhouse studies, disease incidence was significantly greater in plants receiving hitting injuries than tearing injuries. There was little evidence of inoculation day or injury day effects. Colonization frequency of tissue injured mechanically was similar whether wounds were inoculated immediately or 4 days later. Plants that were incubated in a dry environment developed fewer infections than plants held in a moist environment. Inoculated plants that were not injured did not develop disease.     

青枯雷尔氏菌在不同作物根际定殖与轮作防病

青枯病是芝麻和花生的重要病害之一。为探索合理的轮作防控模式,运用青枯雷尔氏菌（Ralstonia sola⁃ nacearum）抗利福平标记菌株JXS02-L土壤接种,测定菌株在芝麻、花生、甘薯、大豆、玉米和小葱等6种作物根际土 壤和根部的定殖与消长动态,分析了不同轮作模式对芝麻/花生青枯病发生程度的影响。结果表明：播种后3w,6种 作物根际土壤菌量均低于初始接种菌量;播种后6 w,芝麻、花生、甘薯根际土壤菌量已上升至初始接种菌量水平 （3.20 ×106~4.93×106 CFU·g-1）,之后菌量持续上升,大豆、玉米根际土壤菌量则持续下降;播种后12 w,大豆、玉米根 际土壤菌量比芝麻、花生、甘薯根际土壤菌量低4个数量级,小葱植种后6 w~12 w,均未检测到病菌。播种后3 w~ 12 w,芝麻、花生和甘薯根部菌量持续上升,大豆和玉米根部菌量先升后降;至播种后12w,大豆和玉米根部菌量比 芝麻、花生和甘薯根部菌量低5个数量级,小葱根部则始终未检测到病菌。芝麻-大豆-小葱-芝麻、芝麻-大豆-玉 米-芝麻2种轮作模式芝麻青枯病病情指数比芝麻-花生-甘薯-芝麻轮作模式分别降低19.95%、12.87%;花生-大 豆-玉米-花生轮作模式花生青枯病病株率比花生-芝麻-甘薯-花生轮作模式降低11.63%。本研究结果对于了解 青枯雷尔氏菌的生态多样性,以及指导青枯病的科学防控具有重要意义。     

枯草芽孢杆菌A30菌株产生的拮抗肽的分离纯化与理化性质研究

平皿测试表明Bacillus subtilis A30菌株对多种植物病原真菌,例如水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）等有强烈抑制作用。在小区试验中A30菌液对水稻纹枯病也表现出了较好的防治效果。A30菌株培养液经硫酸铵沉淀、FPLC疏水色谱、HPLC反相色谱后,纯化得到一种拮抗活性物质,命名为P1。P1对热稳定,对蛋白酶不敏感;茚三酮反应呈阴性,用酸水解后茚三酮反应和双缩脲反应呈阳性。经LC-ESI-MS分析初步判断P1的分子量为1476.7 Da。     

应用群体改良法选育高产、优质、抗病油菜新品种

为了探究轮回选择在油菜品种群体改良中的作用,利用具有高产、双低、抗病等优异性状的种质材料为育种亲本,以显性细胞核雄性不育基因为桥梁,构建了一个随机交配轮回选择群体。针对群体的产量、品质、抗病性等性状进行了多次轮回选择,结果表明经过6轮选择后,群体的主要性状得到改良,产量增加11.3%,每轮遗传增益为1.88%;芥酸和硫苷含量每轮遗传增益达到10.12%和6.37%,改良效果明显;但菌核病的抗性改良效果不明显。经过多轮选择后群体的遗传离散度仍然较高（0.338 3~0.377 7）,表明遗传多样性并没有明显下降。从不同轮次群体中选择优异单株,经系谱选择后育成了中双5号、中双6号和中双10号等优良品种,在生产上应用广泛,表明轮回选择在油菜品种改良方面具有巨大潜力。