花生毛状根诱导及其体外培养

[目的]优化花生毛状根诱导条件,为体外培养毛状根生产白藜芦醇以及培养花生根结线虫奠定基础。[方法]研究不同的发根农杆菌及其菌液浓度、外植体类型、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度对花生毛状根诱导的影响。[结果]发根农杆菌ACCC10060的毛状根诱导率高于ATCC11325;幼叶外植体的毛状根诱导率高于子叶;最佳侵染菌液浓度为0.2～0.4;最佳共培养时间为2 d;最佳侵染时间为10～15 min;菌液中添加75μmol/L乙酰丁香酮(AS)可以提高毛状根诱导率。通过毛状根能在无激素的MS培养上自主生长以及毛状根冠瘿碱检测,确定发根农杆菌中Ri质粒中已整合到花生基因组中。毛状根体外培养的研究表明,液体培养效果好于固体培养,最佳液体培养基为无激素的MS培养基。[结论]该研究建立的花生毛状根培养体系,将为花生转基因技术的完善及利用毛状根生产白藜芦醇和无菌的花生根结线虫提供试验基础。     

花生对作物的化感作用

4叶期前花生根分泌物对水稻、玉米、萝卜和黑麦草等作物生长有明显的促进作用。进一步的研究表明花生根分泌物含有三十烷醇等植物生长促进物质，不同浓度的花生根分泌物对作物的促进作用有很大的差异。     

河地区花生根瘤菌的系统发育多样性研究

[目的]了解中国北方地区花生根瘤菌的多样性状况.[方法]采用16S rDNA PCR-RFLP、16S～23S IGS PCR-RFLP和16S rRNA基因的序列分析方法对分离自河北地区的58株花生根瘤菌以及Rhizobium、Agrobacterium、Sinorhizobium、Mesorhizobium和Bradyrhizobium的参比菌株进行系统发育多样性比较分析.[结果]16S rDNA PCR-RFLP方法在细菌属水平上聚群良好;而16S～23S IGS PCR-RFLP则适于属和种水平上的聚群.3种方法在系统发育上得到基本一致的结果.其中有38株花生根瘤菌是与Bradyrhizobium关系密切的慢生菌株,并且与B. japonicum和B. liaoningense的关系最为接近,与有关中国西南地区和华中地区花生根瘤菌的报道结果相似.然而供试菌株中还存在6株快生和10株中慢生花生根瘤菌,其中快生菌在系统发育关系上接近R. yanglingense、R. mongolense和R. gallicum.[结论]河北地区的花生根瘤菌具有更大的多样性.     

河北地区花生根瘤菌的系统发育多样性研究

 【目的】了解中国北方地区花生根瘤菌的多样性状况。【方法】采用16S rDNA PCR-RFLP、16S～23S IGS PCR-RFLP和16S rRNA基因的序列分析方法对分离自河北地区的58株花生根瘤菌以及Rhizobium、Agrobacterium、Sinorhizobium、Mesorhizobium和Bradyrhizobium的参比菌株进行系统发育多样性比较分析。【结果】16S rDNA PCR-RFLP方法在细菌属水平上聚群良好；而16S～23S IGS PCR-RFLP则适于属和种水平上的聚群。3种方法在系统发育上得到基本一致的结果。其中有38株花生根瘤菌是与Bradyrhizobium关系密切的慢生菌株，并且与B. japonicum和B. liaoningense的关系最为接近，与有关中国西南地区和华中地区花生根瘤菌的报道结果相似。然而供试菌株中还存在6株快生和10株中慢生花生根瘤菌，其中快生菌在系统发育关系上接近R. yanglingense、R. mongolense和R. gallicum。【结论】河北地区的花生根瘤菌具有更大的多样性。     

黑花生再生体系和遗传转化的初步研究

以黑花生品种黑霸920成熟种胚、幼叶和胚轴为外植体，对黑花生植株再生和遗传转化进行了研究。通过设置一系列不同浓度激素配比的培养基来优化各阶段培养条件，初步建立了高效的黑花生再生体系，即花生种子经75％乙醇表面消毒15min，MS＋6-BA2．0mg／L为最优化的种子萌发培养基，MS＋2，4-D2．0mg／L为最佳诱导愈伤培养基，幼叶为最佳诱导愈伤组织的外植体，MS＋6-BA8mg／L＋NAA0．5mg／L＋AgNO3 1mg／L为最佳分化培养基，MS＋NAA2．0mg／L＋6-BA0．2mg／L＋活性炭200mg／L为最佳生根培养基。同时确定了愈伤组织和幼苗的卡那霉素筛选压分别为30mg／L和300mg／L。利用农杆菌介导法将含有GUS基因和NPTⅡ基因的植物表达栽体pBI121导入花生组织，在对愈伤组织、幼叶和胚轴的GUS表达检测中均有蓝色斑块出现，证明GUS基因已成功转入到花生细胞中。     

落花生对中铜与锰的富集能力研究

[目的】研究落花生对中铜与锰的富集能力。【方法】通过水培的方法,研究落花生对铜和锰的吸收及修复水体能力。经过25d的培养后,用酸消解植物,采用分光光度计法测定植物中的铜和锰的含量。[结果]结果表明,与对照组相比,试验组处理25d后,落花生生长状况受重金属离子的影响明显,其中高浓度组有些种苗出现腐烂情况,并且生长明显比其他组缓慢。从、蒯定结果来看,低、中、高浓度处理组中落花生对铜离子平均吸收量分别为115．2、127．2、69．4mg／kg,都显著高于对照组合量（8．2mg／kg）,说明落花生对铜有一定富集能力;而在低、中、高的重金属浓度下,落花生对锰离子的平均吸收量分别为30．4、24．0、24．7μg／kg,与对照组锰离子的含量（19．2μg／kg）无明显差异,落花生对锰的富集效果并不理想。[结论】落花生适用于低、中浓度重金属铜污染水体或土壤的生态修复。     

钙对花生生长发育调控的研究进展

钙(Ca)是植物生长发育必需的营养元素之一,参与植物生长发育的全过程。本文概述了钙在植物体内的作用方式及存在形式,并详细阐述了Ca对花生生长发育的影响,提出了今后的研究方向。     

花生去子叶胚离体培养时有关生理指标的变化

将花生(Arachis hypogaea L.)粤优1号去子叶胚接种在以B5+0.20 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA的培养基上,测定胚的萌发及幼苗各器官多胺氧化酶(PAO)、过氧化物酶(POD)的活性变化以及可溶性蛋白质含量和木质素含量的变化.结果表明,在萌发过程中,开始吸胀而未萌发的花生胚无PAO活性,直至2 d后才检测到活性,并且有一个峰值;而POD活性、蛋白质含量和木质素含量从胚吸胀第2 d就存在较高的活性,以后在第8 d~14 d降到峰底又开始回升,而这一低峰值被认为是植物从胚萌发到植株形态建成,从异养到自养的转折点.     

Development of EST-SSR markers in peanut (Arachis hypogaea L.)

More molecular markers for potential use in peanut genetic research were developed. A total of 92403 EST sequences of peanut (Arachis) in the NCBI database were downloaded and analyzed. 2594 SSRs distributed in 2267 non-redundant EST sequences were detected, with tri-nucleotide motif (65.54%) as the most abundant motif type followed by di-nucleotide motif (28.10%). Among the 92 repeat types, the top eight motif types were AG/TC (20.1%), AAG/TTC (11.8%), AAT/TTA (10.1%), AGG/TCC (6.6%), AGA/TCT (6.3%), AT/TA (5.9%), ACT/TGA (3.8%), and ATG/TAC (3.7%) with higher frequency. A total of 237 primer pairs were successfully designed based on the 2267 SSR-ESTs using DNA star software.     

相关酶对花生果针木质化的影响

测定了6个花生品种果针生长发育过程中不同部位的多胺氧化酶（PAO）、过氧化物酶（POD）活性,研究了PAO、POD对花生果针人土的影响．结果表明,不同部位的PAO、POD活性不同,总的来说果针尖端活性最高,果针中部次之,果针上部最低．不同品种酶活性不同,果针生长天数对酶活性影响不大．     

花生原生质体分离与培养

以花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20为材料,探讨不同的酶液浓度、酶解时间及渗透压对花生原生质体分离的影响.结果表明:原生质体分离的适宜酶液配比是2%纤维素酶(Cellulase Onozuka Rs)、0.2%果胶酶(Pectolyase Y-23),甘露醇渗透压调节剂的浓度为0.7mol/L,暗处理10h,叶片原生质体产量为4.86x105个/ml,存活率75.6%,愈伤组织原生质体产量为4.97x105个/ml,存活率75.4%.将分离的原生质体培养在添加1mg/LNAA和4mg/LBAP的改良MS液体培养基中.培养约2～3天后,细胞开始分裂.然后部分细胞继续分裂,并形成细胞团.培养5～6周后,将培养物转移到添加2 mg/L2,4-D和3 mg/L BAP的MS液体培养基(pH5.8)中进行培养.7～8周后,将形成的直径为1～2 mm的小愈伤组织转移到添加1 mg/LNAA和5 mg/LBAP的MS固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长.转移3-4周后,愈伤组织长至7～9mm.     

"易丰收"植物生长调节剂在花生上的应用效果研究

[目的]研究＂易丰收＂植物生长调节剂在花生上的应用效果。[方法]采用小区、大区对比与小面积示范试验研究＂易丰收＂拌种、幼苗期叶面喷施和开花下针期喷施处理对不同茬口地种植花生的主要形态性状、经济性状及产量的影响。[结果]经＂易丰收＂3种不同方式处理的花生的主要形态性状、经济性状、产量均优于对照;大区对比与小面积示范试验结果表明,3种处理均比对照增产4.9%～7.8%,且＂易丰收＂应用越早增产效果越好,拌种比幼苗期喷施增产效果好,幼苗期喷施效果又好于开花下针期效果;在生茬地应用的增产效果要好于重茬地。[结论]＂易丰收＂植物生长调节剂能显著提高花生的形态性状、经济性状,对花生有显著的增产效果,可进一步在生产上推广应用。     

花生分子标记的研究进展

介绍了应用于花生的主要分子标记类型及其种质资源的遗传多样性、指纹图谱、抗性基因的标记和遗传连锁图构建等,并综述了SSR引物的数量。     

花生花药愈伤组织的诱导和分化研究

利用花生栽培品种‘邢花4号’对不同发育时期的花药进行固体培养,对诱导愈伤和愈伤分化的培养基进行了筛选.结果表明:在小孢子单核靠边期,或花蕾长3～4mm,呈绿色时,花药的诱导率最高(30.42％);以附加6-BA 8.0 mg/L、NAA0.8 mg/L、KT 0.02 mg/L的MS培养基上愈伤组织诱导效果较好;在添加...     

干旱胁迫下冠菌素（COR）对花生种子萌发和幼苗生长的影响

探讨适宜浓度冠菌素(COR)浸种提高花生幼苗抗旱性的作用效果,为COR在生产上应用提供依据。在正常水分和25%聚乙二醇(PEG)模拟干旱条件下,研究不同浓度COR浸种对花生种子萌发和幼苗生长的影响。模拟干旱严重影响种子发芽和幼苗生长。0.0001~1 μmol/L 的COR浸种可不同程度补偿干旱胁迫对种子发芽和幼苗生长的抑制作用,以0.01 μmol/L COR处理的效果最好,发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、幼苗生长和干物质积累均明显提高,根系生长接近对照水平,从而使根冠比提高幅度更大。COR可明显缓解干旱对花生幼苗生长的影响,0.01 μmol/L的COR浸种可作为提高花生幼苗抗旱性的技术措施。根冠比提高幅度更大。     

花生SRAP反应体系的建立与优化

[目的]为研究花生居群遗传多样性奠定基础。[方法]以汕油162和sunolicn 95R为模板对花生进行SRAP扩增,研究模板DNA浓度、Mg2+浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶的用量对SRAP扩增效果的影响,探索花生SRAP反应的最佳条件。[结果]在一定范围内,模板DNA含量和TaqDNA聚合酶的用量对花生SRAP扩增结果的影响较小。当Mg2+浓度为2.5 mmol/L时,扩增效果最佳。当Mg2+浓度逐渐降低时,扩增条带逐渐变弱。引物浓度为0.5 mmol/L时能够扩增出清晰、重复性好的条带。花生SRAP反应的最佳条件为:模板DNA含量为100 ng,Mg2+浓度为2.5 mmol/L,引物浓度为0.5 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量为1 U。[结论]与AFL P技术相比,该研究中所建立的花生SRAP反应体系更为简便和可靠。     

栽培种花生EST-SSR引物的开发及应用

从高油抗青枯病花生新品系06-4104构建的5个cDNA文库获得了63207条EST,经序列拼接,获得14547条Uni-EST。经MISA检索,在这些Uni-EST中共检测出2643个SSR位点,分布于2250条EST中,发生频率为15.5%,平均每3.1kbEST序列含有一个SSR位点。其中,三核苷酸重复类型出现频率最高,占SSR总数的49.1%,其次是二核苷酸重复类型,占SSR总数的45.8%。在发现的46类重复基序中,AG/TC重复基序的频率最高,AAG/TTC次之。利用Primer3从含有SSR的2250条EST中共设计引物100对,利用这些引物检测花生栽培品种的多态性。结果表明,在所设计的100对引物中有91对在供试的6个花生栽培品种中得到有效扩增,其中13对得到了多态性的扩增产物,每对引物检测出的等位基因数2～3个,平均2.2个。     

花生共生受体类蛋白激酶基因的克隆及生物信息学分析

共生受体类蛋白激酶（symbiosis receptor-like protein kinase, SYMRK）是控制植物与微生物共生的关键调控基因,利用基因组步移技术,克隆得到花生symrk的全长基因及其560 bp的ATG上游序列。采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的常规理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位和高级结构等进行了预测和分析,结果表明Ah-symrk由15个外显子和14个内含子组成,cDNA全长3 042 bp,包含2 781 bp的ORF,编码926个氨基酸,为疏水性酸性蛋白质,定位于细胞膜;ATG上游序列包含3个与根特异表达有关的顺式作用元件root motif tapox1;RT-PCR验证,该基因在花生根中特异性表达。     

花生高效离体再生体系的建立

建立了以花生胚轴为外植体,通过器官发生途径高效率诱导丛生芽发生的技术体系。该体系芽分化诱导率高达83%,外植体平均出芽数为6.8个,重复性好。同时建立了花生幼胚离体培养再生体系,通过胚状体发生途径获得理想的体胚,并再生出正常的植株。     

花生上胚轴的丛生芽诱导和植株再生

用苗龄10d的花生无菌苗的上胚轴为外植体，置于MS TDZ1mg/L BA2mg/L NAA0.5mg/L的培养基中，14d左右，可见丛生芽分化，45d后长出整齐一致的丛生芽，诱导率达80．2％．平均出芽数达9．1个。同时添加YE与AD和适当浓度的AgNO3，外植体的出芽率提高到90％，切取诱导芽单芽，转接至含有NAA的根诱导培养基中，在同样的培养条件下，30d后，G4号培养基中的外植体出根率达80％，且根粗壮，较长。