实时荧光定量PCR技术及在畜牧兽医中的应用

RT-FQ-PCR技术是一种最新PCR技术,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,在畜牧兽医中已得到了广泛的应用,虽然该技术目前仍存有许多有待解决的问题,但因其所具有的独特优势,必定会在生命科学领域得到更广泛的应用。该文就RT-FQ-PCR概念、原理、方法、应用、存在问题及应用前景等作了综述。     

PCR技术及其在兽医临床诊断中的应用

聚合酶链反应具有快速、灵敏、简便、特异等特点,现已发展成为广泛应用于分子生物学、基因工程、法医学、肿瘤学、传染病学、遗传学及农业科学等领域的重要研究手段和检测方法。本文较着重介绍了PCR技术的原理及其在细菌性疾病和病毒性疾病诊断中的应用现状,并就PCR技术在兽医临床诊断中存在的问题和解决办法作了探讨。     

常见麻醉药在兽医临床上的应用

麻醉药是指能使整个机体或机体局部暂时、可逆性失去知觉及痛觉的药物。根据其作用范围可分为全身麻醉药及局部麻醉药,全身麻醉药及局部麻醉药根据其作用特点和给药方式不同,又可分为吸入麻醉药和静脉麻醉药。本篇综述重在分析现阶段麻醉药在临床的应用,并展望未来临床麻醉药应用的趋势走向。     

PCR技术在对虾病毒病检测上的应用及研究进展

聚合酶链式反应PCR具有特异性强、灵敏度高、快速简便及重复性好等优点,多种临床样品均可用PCR进行检测,现已开发出多种PCR新技术,用于生物学科的各个领域。本文对PCR技术的原理及其在动物疫病尤其是对虾病毒病的检测中的应用及研究进展做一综述,以期对对虾病毒病的诊断与防治有所帮助。     

双效2000在兽医临床上的应用

双效 ２０００粉针,是以治疗细菌感染的特效制剂与直接作用于动物神经系统体温调节中枢及阻断细菌繁殖的特殊异构酶组成。经大面积对猪丹毒杆菌病、链球菌、葡萄球菌、肺炎球菌、放线菌等所致猪、羊、牛、马、兔等临床感染的治疗观察,均获得满意效果,且表明本品疗效确实,无毒副作用。现将临床应用总结于后。     

直肠检查法及其在兽医临床上的应用

直肠检查在兽医临床应用上比较广泛,是作为兽医工作者必须掌握的一门技术。本文结合直检中碰到的一些具体问题,就如何巧妙地通过直肠狭窄部、膀胱充盈时怎样诱导排尿、盆腔内有许多充气肠断阻扰直检,如何进行直肠放气等作了详细的论述。同时,也描述了常见便秘症和肠道位置、形状、结粪的软硬度等;直检还可以查出肠系膜、膀胱、肾等疾患引起的假性疝痛;利用直检时的一种特殊的感觉可以对胃肠穿孔得出正确的判断;并且通过直检能使兽医工作者对病畜的转归心中有数。     

针灸在兽医外科临床上的应用

针灸是一种常见的兽医外科临床治疗方式,并且具有良好的治疗效果和应用效果,因此被广泛应用在兽医外科治疗中。为此,从针灸治疗方式的应用机理出发,分析了针灸麻醉在兽医外科中的应用,并从四肢疾病治疗、腰部疾病治疗、麻痹和瘫痪疾病治疗、其他疾病治疗四个方面论述了针灸在兽医外科上的临床应用。     

“新斯的明”在兽医临床上的应用浅见

新斯的明是一种可逆性抗胆碱酯酶药,笔者先后用该药治疗病畜93例,均获治愈,现报告如下: 1 治疗牛、羊前胃疾病 应用新斯的明可增强前胃平滑肌的收缩力,促进前胃运动,兴奋反刍,消除积食和气胀.牛羊发生前胃弛缓、瘤胃积食、瓣胃阻塞时,可先用鱼石脂10～20g防腐止酵,用盐或油类泻剂泻积,用苦味酊多酶片、酵母片等健胃消食及强心补液的同时,停几个小时后,运用新斯的明牛10～20mg,羊2～5mg肌肉注射,增强前胃收缩力,促使其运动.瘤胃臌胀时,可先排出气体,而后按上述方法治疗,效果十分显著.     

美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立美洲鳗鲡腺瘤病毒（American Eel Adomavirus, AEAdoV）的检测方法,根据AEAdoV福建株的superfamily 3 helicases (S3H)序列,设计了二对引物,建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法;进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性,比较两种方法对AEAdoV-FJ检出率,并对美洲鳗鲡体内各组织的病毒含量进行了分析。结果显示,普通PCR扩增的目的片段长度约300bp,利用其构建了qPCR质粒标准品,其拷贝数与qPCR的阈值循环数(cycle threshold value,CT)线性关系良好,线性范围广,标准曲线相关系数(R2)达到0.999,扩增效率为105.067％;采用普通PCR法和qPCR可检测的最低AEAdoV拷贝数分别为100个和10个;上述两种方法均可特异性检测AEAdoV,而对蛙虹彩病毒（Rana grylio virus,RGV）、鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus,AngHV）、鲤疱疹病毒（Koi herpes virus,KHV）、对虾白斑综合症病毒（White spot syndrome virus,WSSV）、日本鳗鲡内皮细胞坏死病毒(Japanese Eel Adomavirus,JEAdoV)和花鳗鲡腺瘤病毒(Marbled Eel Adomavirus, MeAdoV)均无扩增反应;qPCR法的组内和组间变异系数均小于2%,表明其重复性良好。临床应用结果显示,35 份美洲鳗鲡病料,采用普通PCR法的AEAdoV检出率为82.8%,而qPCR法的AEAdoV检出率为97%。对美洲鳗鲡组织的病毒含量分析结果显示心脏、肝脏、鳃、鳍的AEAdoV相对含量较高,而黏液、皮肤和脾的病毒含量相对较低。上述结果对于研究AEAdoV的致病性,开展其流行情况和病原学情况具有重要意义。     

皮硝在兽医临床上的应用

<正>皮硝,俗称芒硝,其味咸苦、性寒,有软坚导滞,宽肠泄热之功。芒硝始载于《神农本草经》,列为上品,为天然硫酸钠经加工精制而成的结晶体,苦咸性寒,属盐类泻下药。在我县主要产于县城东天然温泉九气台(同时盛产天生黄,俗称气黄),故一般称之为皮硝。是我县农民习惯用来喂牲畜防止便秘和促进生长以及常用的清热健胃药,     

猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立

根据猪圆环病毒2型(PCV2)的基因序列,设计一对能特异性扩增PCV2ORF2基因的引物,通过对PCR方法的优化,建立了快速的PCR检测方法用于病料中PCV2感染的检测。用本方法对猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)进行了扩增,均未有条带出现,表明该方法具有良好的特异性;敏感性试验表明,该方法能够检测到的最低DNA模板浓度为1.0×10-5ng/μL;重复性试验表明,该方法具有良好的稳定性。     

中草药在草鱼疾病防治中的应用

中草药作为“绿色渔药”防治鱼类病虫害具有药源广、成本低、疗效好、无残留、无毒副作用等优点。下面就中草药在草鱼疾病防治中的应用谈一下笔者的体会。     

抗菌药物在兽医临床上的合理使用

近年来,在规模化畜禽养殖生产中,细菌性疾病因长期使用和滥用兽药,致使抗药菌株不断增加,呈现上升趋势,甚至一些致病力不强的细菌也已对畜禽产生新的威胁。因此,细菌性疾病的危害在一定条件下,已成为畜禽生产中的一个主要问题。群体药物预防和治疗已是畜禽防疫工作中的主要环节     

巢式PCR技术在猪瘟病毒检测中的应用

根据猪瘟病毒的Alfort株、Brescia株和C-株(SK-6)核苷酸序列,利用primer5.0软件设计1对用于一扩引物p1a/p1aB,扩增的片段为305bp,1对用于二扩的引物p2a/p2B,扩增的片段为172bp,建立猪瘟病毒的巢式PCR检测方法。利用该方法对山东某规模化猪场中临床上疑似猪瘟病例的扁桃体、脾、肾等组织进行检测,用引物p1a/p1aB在305bp处扩增出目的条带;引物p2a/p2B在172bp处扩增出更加明显的目的条带,确诊为猪瘟病毒感染。试验结果表明该方法快速检测病料组织中的猪瘟病毒是可行的,在猪瘟的早期检测及预防、控制上起到重要作用,可用于猪瘟临床诊断。     

微生态理论在兽医上的应用

自从1997年联邦德国的Voeker Rusch博士首先提出“微生态学”这一术语以来,微生态学在生命科学中作为一门独立学科迅速发展起来。微生态平衡是微生态学中最重要的研究课题,是地球生态平衡的组成部分。 　　动物体微生态平衡是保持动物机体健康的重要因素,微生态系统包括宿主——正常微生物群——微环境三个方面,组成微生态系统的微生物不仅仅是细菌,也包括病毒(同细菌一样,其实绝大多数病毒都是有益或无害的。如内源性病毒、火鸡疱疹病毒HVT)。动物体微生态也不仅仅存在于消化道,而是广泛存在于动物机体内,按照正常微生物群在微生态系统中所占的空间不同可把微生态系统分为以下几类：口腔微生态系统、胃肠道微生态系统、泌尿道微生态系统、生殖道微生态系统、皮肤微生态系统、呼吸道微生态系统。过去认为动物的非特异性免疫应答主要依靠机体的屏障作用。从生理学观点出发,动物对外来感染的屏障可分为皮肤、粘膜屏障,吞噬细胞屏障和血清屏障三道防线。现在从微生态学观点出发,完全有理由增加正常微生物群防线,即一切外来致病菌的侵入都必须首先突破第一道位于皮肤和粘膜上皮细胞表面的正常微生物群防线,然后再突破上述的生理性三道防线,才能在宿主的体内生长、繁殖。     

鳜鱼病毒PCR诊断方法的建立

从ＲＡＰＤ扩增的鳜鱼病毒（ＳＣＶ）核酸电泳带中回收了二个片断，克隆子pUC19质粒（称为ＳＣＶＥ３６９和ＳＣＶＥ４５０），序列分析表明插入片段分别为３６９bp和450bp与ＧenBank序列没有显著的同源，根据克隆序列调计两对引物Ｐ１／Ｐ２和Ｐ３／Ｐ４ ，在健康鳜鱼，病鳜以及提纯的ＳＣＶ核酸中进行ＰＣＲ试验，结果表明，Ｐ１／Ｐ２组引物在ＳＣＶ基因组中扩增出特异性核酸片段，可作为鳜鱼病毒ＰＣＲ诊断，检测片段为３６９bp.     

美国迦太基兽医培训活动对国内兽医培养工作的启示

通过美国迦太基兽医服务有限公司的培训活动,启示国内兽医培养工作应从师资引进、继续教育、改善办学条件,优化考核方式多方面提升兽医培养质量。     

奶牛结核病的PCR检测方法的建立及应用

根据PCR技术的原理建立了奶牛结核病的PCR诊断方法,并测定出该方法的敏感性为30.9pg/ūL。特异性试验结果表明,除牛结核分枝杆菌的特异扩增带(242bp)外,其他的细菌均未出现特异性扩增带。用该方法对陕西省某奶牛养殖小区的121份乳样中的结核分枝杆菌进行检测,结果显示,在121份乳样中有3份为阳性,阳性检出率2.48%。本试验还用PCR方法对PPD检测和胶体金检测法进行验证,结果表明PCR方法敏感性强,特异性高,是一种提高牛结核病临床诊断的好方法。     

地塞米松在兽医临床上的正确使用

<正>地塞米松是一种长效肾上腺糖皮质激素,它具有抗炎、抗毒、抗过敏的作用,近年来在兽医临床上被广泛应用,常配合其他药物广泛用于治疗和预防各类因素引起的发热、过敏反应     

对虾IHHNV荧光定量PCR检测方法的建立

根据G enBank中对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒( IHHNV) 保守基因序列( AF218226), 设计合成了1对引物和1条TaqM an探针, 建立了检测IHHNV的荧光定量PCR技术。将建立的荧光定量PCR检测方法与常规PCR对比。结果显示, 所建立的荧光定量PCR 方法灵敏度可达2个拷贝, 比常规PCR 灵敏度高1 000倍。对保存的15份经常规PCR检测为IHHNV 阳性的DNA 样品进行荧光定量PCR检测, 结果都为阳性, 检测的病毒含量为2. 15 @ 107 ~ 4. 21 @ 104 拷贝/LL。用该方法对不同浓度的样品进行了重复检测, 表明该方法具有良好的重复性, 可满足IHHNV的临床诊断需要。