用卵黄浸提液对三种鸡病抗体检测试验

本试验用卵黄聚乙二醇浸提液（卵黄液）进行鸡白痢（ＰＤ），传染性囊病（ＩＢＤ）和新城疫（ＮＤ）的抗体检测，并与相应血清进行对比试验。结果表明卵黄液ＰＤ琼脂扩散（ＡＧＰ）试验与血清试验结果符合率１００％，ＩＢＤ ＡＧＰ试验和ＮＤ血凝抑制（ＨＩ）试验与血清试验结果基本一致（差异显著性检验Ｐ＞０．０５），可以代替血清进行其抗体检测；且卵黄液制备方法简单，省时省力，有实际应用价值。     

母鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体的检测及其相关性分析

为了解母鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体检测结果的相关性,试验采集了新城疫疫苗免疫母鸽的血液和卵黄,通过血凝抑制试验检测了新城疫病毒的抗体,利用GraphPad Prism软件中的Spearman Analysis分析了血清抗体效价和卵黄抗体效价的相关性。结果表明:绝大多数样品提取的卵黄液抗体效价低于血清抗体效价,而绝大多数样品的卵黄原液抗体效价高于血清抗体效价。血清抗体效价、提取的卵黄液抗体效价与卵黄原液抗体效价两两之间呈显著或极显著正相关(P0.05或P0.01),提取的卵黄液抗体效价与血清抗体效价之间的相关系数最高。说明鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体有明显的相关性,提取的卵黄液可代替血清用于母鸽新城疫病毒抗体的检测。     

保存与现配红细胞悬液在新城疫血凝与血凝抑制中的对比试验

为了研究红细胞悬液保存时间对新城疫血凝与血凝抑制试验的影响,同时比较用卵黄和血清检测新城疫抗体水平的结果差异,笔者在不同地区随机选取72份鸡蛋（其中16份鸡蛋对应16份血清）,用保存1周的红细胞悬液和现配红细胞悬液进行了对比试验。结果显示：在新城疫血凝与血凝抑制试验中,保存1周的红细胞悬液HA试验的结果比现配红细胞悬液低2个滴度;用4单位工作量进行HA试验时,得到了相同的结果;用卵黄测得的新城疫抗体水平稍低于用血清测得的结果,但差异不明显。表明用保存1周的红细胞悬液测定卵黄中新城疫的抗体水平比用现配红细胞悬液所测得的抗体水平低接近1个滴度,并且可以用卵黄代替血清检测新城疫抗体水平。     

鸡血清与卵黄中ND和EDS76抗体水平的比较

以鸡新城疫（ＮＤ）病毒和产蛋下降综合征（ＥＤＳ７６）病毒为抗原，在相同条件下进行血凝抑制试验（ＨＩ），检测产蛋鸡血清与卵黄中的抗体水平。结果表明，血清中与卵黄中的ＮＤ和ＥＤＳ７６抗体水平相差不大（Ｐ〉０．０５），而测卵黄的方法较测血清的方法简便，对产蛋鸡不造成应激反应。故可用卵黄代替血清检测产蛋鸡群的抗体水平。     

鸡新城疫琼扩试验与血凝抑制试验相关性的研究

应用ＮＤＶ－Ｌａｓｏｔａ株鸡胚液，经灭活、透个和浓缩而制成琼脂扩散（ＡＧＰ）抗原，对ＮＤ抗体进行检测，通过阻断等试验，表明ＡＧＰ检测ＮＤ具有特异性；应用血凝抑制试验（ＨＩ）和ＡＧＰ试验同步检测血清及卵黄中ＮＤ抗体，结果ＨＩ抗体Ｎ ＡＧＰ抗体两者具有相关性（ＮＤ－ＨＩ为４１ｏｇ时，ＡＧＰ是性率达９７．４％，＞５１ｏｇ时ＡＧＰ阳性率为１００％；ＡＧＰ试验简便，准确性高；特别适合大量血清样品的检测。     

蛋鸡卵黄与血清中禽流感H5N1HI抗体相关性研究

用鸡蛋蛋黄（直接稀释和经萃取两种方法）和血清监测禽流感H5N1（Re-1株）HI抗体，对三种方法监测结果进行相关性研究。选择免疫抗体处于临界状态的产蛋鸡群进行加强免疫，然后将鸡群分为随机采样组和固定采样组跟踪疫苗说明书规定的免疫期进行免疫抗体监测。结果表明：两组试验在免后21天抗体达到高峰．卵黄抗体和血清抗体HI值接近，在21天前卵黄抗体的上升滞后血清抗体的上升。免疫抗体达到高峰后三种方法监测结果呈强相关．个值分析血清与卵黄相差一个滴度以内的占绝大多数，均值经t检验有不同程度的差异，但差异不超过半个滴度。因此，用卵黄进行禽流感HI抗体监测是可行的。     

用日龄雏鸡卵黄液代替血清检测禽腺病毒母源沉淀抗体的比较试验

本文用AGP对国内七个品种210只一日龄雏鸡进行血清和卵黄液中腺病毒母源沉淀抗体检出率和符合率的比较试验。结果从两种样品中检出腺病毒沉淀抗体阳性率,分别为14.76%(31/210)和13.33%(28/210)。卵黄阳性与血清阳性符合率为80.6%(25/31),并可从血清阴性雏的卵黄液中检出1.67%的阳性。两种试样阳性率相关显著。试验表明可用卵黄液代替血清试样检测禽腺病毒母源沉淀抗体。适用于口岸检疫和国内养鸡场引种和生产中监测祖代,父母代鸡群卵源性疫病污染情况,有一定的实用价值。     

SPF鸡感染网状内皮组织增生症病毒后血清和卵黄的抗体反应相关性比较

为进一步研究采用卵黄抗体检测代替血清抗体检测的可行性,采用已建立的卵黄抗体ELISA检测方法,比较同一时期卵黄抗体与血清抗体的相关性。人工感染23周龄无特定病原体（SPF）鸡,每周采集全血分离血清,每天收集种蛋,ELISA方法检测血清、种蛋中的REV抗体,并进行比较,结果表明：攻毒后第2周开始血清抗体和卵黄抗体呈阳性,并达到峰值,之后抗体水平缓慢下降,两者具有相似的消长规律;对同一时期的卵黄抗体和血清抗体S/P比值进行统计学比较,P值小于0.05,相关系数为0.931,表明两者差异性不显著,相关性很好;阴阳性符合率比较,阳性符合率为97.8%,阴性符合率为100%,总体符合率为98.4%,阴阳性复合率很高。试验证明,同一时期的卵黄抗体和血清抗体的相关性很好,可用卵黄抗体检测方法代替血清抗体检测,从而为监测SPF鸡群感染REV提供新的技术手段。     

商品蛋鸡新城疫和禽流感疫苗免疫后卵黄抗体代替血清抗体检测的相关性分析

为了评价商品蛋鸡免疫新城疫和禽流感疫苗后卵黄抗体替代血清抗体检测时卵黄的最适处理条件,试验采用经新城疫和禽流感疫苗免疫后40天产蛋率在90%以上的健康商品蛋鸡(海兰褐)56只,采血取血清,每只鸡取1枚鸡蛋分离卵黄,采用完全随机分组试验设计,随机分4组,分别为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组56个重复,每个重复1份血清和1份相应卵黄。对照组为血清抗体检测,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别用生理盐水1∶1倍稀释卵黄、生理盐水1∶3倍稀释卵黄和三氯甲烷1∶3倍稀释卵黄,利用血凝抑制(HI)试验进行血清和处理后卵黄抗体检测。结果表明:检测卵黄中新城疫病毒和禽流感病毒H9抗体时使用生理盐水1∶3稀释卵黄,检测卵黄中禽流感病毒H7、禽流感病毒H5-11和禽流感病毒H5-12抗体时使用生理盐水1∶1稀释卵黄,处理后卵黄抗体效价与血清抗体效价均差异不显著(P>0.05),与血清抗体效价相关系数分别为0.837,0.853,0.888,0.888,0.839。说明在对卵黄进行适宜条件处理后,可以用卵黄抗体代替血清抗体评价商品蛋鸡抗体水平。     

禽流感血清抗体与卵黄抗体消长规律比较研究

应用禽流感病毒二价（H5、H9）油乳剂灭活疫苗免疫160日龄非免疫蛋鸡，免疫接种后分别于第0、7、14、21、28、35 d采集相应的鸡蛋和血清，采用血凝抑制(HI)试验监测血清及卵黄中H5、H9抗体的消长规律，结果表明：H5、H9血清抗体于免疫后7 d时开始产生，14 d时到中等水平，21 d时达到最高值，一直维持到35 d之后；而H5、H9卵黄抗体与血清抗体水平相比相对滞后7 d左右；卵黄抗体与血清抗体在28 d时均达到高峰值并一直维持到35 d之后，28 d后血清和卵黄抗体达到相同水平。本研究为临床上以禽流感卵黄抗体检测替代血清抗体检测及以后禽流感高免卵黄抗体的研究提供了依据和数据。     

SPF鸡感染禽白血病病毒A/B亚群后血清抗体与卵黄抗体的变化及其相关性

拟研究以卵黄抗体替代血清抗体检测判定SPF鸡群禽白血病病毒(ALV)感染状态的可行性。在人工接种ALV-A/B后的40只SPF鸡刚开产时,从21只抗体阳性鸡及19只抗体阴性鸡分别采集血清和卵黄并一一对应,比较卵黄不同稀释度与血清中ALV-Ab抗体的阴阳性吻合率及ELISA检测S/P值相关系数。另外36只同批次不攻毒的SPF鸡单独饲养作为对照,76只鸡在25~34周龄期间,每隔3周分别采集1次血清,每周采集1次种蛋,共采集了304份血清样品及836份卵黄样品。所有血清和卵黄抗体用IDEXX的ALV-Ab抗体ELISA检测试剂盒检测。血清按试剂盒规定的1∶500稀释,卵黄按预试验结果选定稀释度稀释。同一只鸡同一时段采集的血清和卵黄样品,严格在同一次ELISA试验中检测。结果表明,相对于血清抗体,将卵黄做1∶300稀释时,假阳性和假阴性最少,确定1∶300为卵黄最适稀释度。在25~34周龄,836份卵黄抗体的检测判定结果与304份血清抗体检测结果吻合率达94.7%,即这些血清抗体阳性鸡同时期采集的卵黄抗体也全部阳性,血清阴性鸡的卵黄抗体也均为阴性。结果提示疫苗生产企业可通过检测SPF种蛋的卵黄抗体来判断SPF鸡场对ALV的洁净度。     

ELISA检测卵黄和血清中禽呼肠孤病毒抗体相关性试验

本试验通过选取氯仿抽提卵黄抗体方法,经ELISA检测鸡卵黄和血清中禽呼肠弧病毒(REOV)抗体的相关性试验,确定卵黄抗体和血清抗体的对应关系,并依此建立ELISA试剂盒检测卵黄抗体的检测方法及判定标准.试验结果显示,采用REOV-ELISA检测试剂盒检测鸡血清及对应卵黄中REOV抗体二者具有良好的相关性,相对于血清ELISA检测法,所选样本206份中,检测结果相符的样本有200份,卵黄ELISA检测法的符合率为97.08％,表明可以采用检测血清的REOV-ELISA试剂盒检测卵黄中的REOV抗体水平.     

蛋鸡血清抗体与卵黄抗体效价对比试验

笔者通过试验对免疫后的蛋鸡血清抗体和卵黄抗体进行测定比较,探讨应用卵黄代替血清开展蛋鸡免疫抗体的监测技术。试验结果表明,卵黄抗体检测完全可以取代血清检测,方法简便实用。     

母鸡血清、卵黄、雏鸡血清中新城疫抗体水平的比较试验

鸡新城疫是严重危害养鸡业的一种烈性传染病，可导致大批死亡，造成重大经济损失。为此，各大鸡场均对鸡新城疫进行免疫监测。新城疫免疫监测一般用血凝（ＨＡ）和血凝抑制（ＨＩ）试验，可测定血清或卵黄。由于卵黄易于收集，已广泛应用于ＨＩ试验。据报道，母鸡血清的ＨＩ效价与卵黄中的效价基本一致，相对高于雏鸡血清效价的１个滴度，为验证新城疫抗体在母鸡、卵黄、雏鸡中效价的这种关系，我们进行了母鸡血清、卵黄、雏鸡血清中新城疫抗体水平的比较试验。１　材料和方法１．１　新城疫凝集抗原　由浙江省农科院提供。１．２　试验用血…     

应用微量HI试验检测鸡减蛋综合症卵黄抗体

用微量血凝抑制(HI)试验对曾发生过减蛋综合症(IDS-76)鸡群进行其卵黄抗体水平检测.结果证明,卵黄抗体效价与血清抗体效价基本相同,从而证实用卵黄HI 试验代替血清 HI 试验检测 EDS-76的抗体水平是可行的,且本法经济,省力,省时,有实用价值.     

鸡新城疫减蛋综合征和大肠杆菌病三联油佐剂苗免疫试验

应用鸡新城疫（ＮＤ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）、大肠杆菌病三联油佐剂灭活苗进行田间免疫试验，结果表明该三联苗免疫鸡不仅抗体水平高，而且免疫持续时间长，具有与单苗同样的免疫效果。被检血清中ＮＤ抗体ＨＩ平均效价比卵黄高１￣２个滴度；血清与卵黄中ＥＤＳ－７６抗体ＨＩ平均效价基本相同（Ｐ〉０．０５），可用卵黄代替血清作为血清学检验材料。卵黄中未检出大肠杆菌凝集抗体。     

高免鸡群蛋黄液和鸡血清IBD及ND抗体水平的对比试验

在制备IBD和ND二联卵黄抗体以及在计划鸡群的IBD和ND免疫程序时,都需要对鸡体内的IBD及ND抗体水平进行监测。通过对一群鸡按一定免疫程序高免IBD疫苗和ND疫苗后,利用鸡所产鸡蛋卵黄液和相对应鸡的血清测定IBD琼扩(AGP)抗体效价和ND凝集抑制(HI)抗体效价的对比试验认为:用卵黄液测定的抗体效价与用鸡血清测定的抗体效价呈一致关系,完全可用鸡蛋卵黄液代替鸡血清进行鸡体内IBD和ND抗体水平的监测。现将试验结果报告如下:     

非洲猪瘟病毒p30蛋白卵黄抗体的制备及生物活性检测

为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白卵黄抗体,研究卵黄抗体的生物活性。试验构建了p ET-32a-p30原核表达载体,制定了科学的免疫程序和样本采集方法。提取卵黄液,进行二次盐析,得到对应的卵黄抗体。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)测定卵黄抗体效价,用免疫印迹（Westernblotting）技术对其生物活性进行鉴定。ELISA试验表明：首次免疫p30蛋白7d后,能够在蛋鸡的血清中检测出抗体（Ig Y）,14d后在卵黄中能够提取到Ig Y,35d后Ig Y效价达到最高值。IgY具备和哺乳动物产生的IgY不同的生物活性,并可具有较高的特异性和稳定性,在免疫学研究中具有重要的价值。利用Ig Y进行实验检测,具有突出优势。通过抗原即ASFV p30蛋白免疫蛋鸡,分离提纯免疫蛋白,检测其生物活性,可用于鉴定非洲猪瘟。     

用琼扩试验监测鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的研究

对郑州某鸡场两个父母代鸡群的种卵通过卵黄琼扩试验检测卵黄中的传染性法氏囊病抗体水平。结果证明,卵黄抗体效价与血清抗体效价基本相同,且以氯仿处理后的卵黄抗体效价与血清效价符合率最高,从而证实用卵黄琼扩试验替代血清琼扩试验监测鸡传染性法氏囊病的抗体水平是可行的,对本病是一种经济、省力、省时并有实用价值的抗体监测方法。     

蛋鸡H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫血清抗体与卵黄抗体检测比较分析

为分析蛋鸡免疫后卵黄抗体与血清抗体的相关性,试验采集经H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫的黔东南小香鸡、乌蒙乌骨鸡、威宁鸡血清样本和卵黄样本,采用血凝抑制试验进行相关免疫抗体检测。结果:3个地方品种鸡的血清样本和卵黄样本中均可检测出H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫抗体,且几何平均效价均大于24以上,达到免疫合格标准,不同地方品种鸡群间差异不显著(P>0.05);免疫后30d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,但差异不显著(P>0.05);免疫后60d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,差异显著(P<0.05)。结果表明:卵黄抗体与血清抗体呈正相关性,卵黄抗体几何平均效价均低于血清抗体。在临床上可用卵黄抗体替代血清抗体进行H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫效果的评价,但应选择在免疫后30d以内。