綦江区三角镇口蹄疫疫苗免疫效果分析

为了解猪O型口蹄疫和羊O型-亚洲Ⅰ型口蹄疫疫苗在三角镇免疫效果,该试验随机5个养殖单元(5家散养猪户以及4家养羊户)和4个规模化养猪场,对猪O型口蹄疫和羊O型-亚洲Ⅰ型口蹄疫疫苗免疫效果开展了免疫监测。监测结果显示:三角镇2015年上半年散养户猪口蹄疫疫苗免疫合格率为92%,下半年免疫合格率为56%;2015年上半年和下半年羊口蹄疫疫苗免疫合格率均为100%;4个规模化猪场2015年上半年的口蹄疫疫苗免疫合格率为97%。     

口蹄疫疫苗的发展展望

口蹄疫(FootandMouthDisease,FMD)是家畜和野生偶蹄动物的烈性传染病,可引起大范围的易感动物感染发病,造成巨大的经济损失。疫苗接种是特异性预防FMD的可靠和有效手段,安全有效的疫苗是成功的预防、控制以致最终消灭FMD的先决条件。FMD弱毒苗和灭活疫苗等常规疫苗都具有良好的免疫原性,在预防和控制FMD的过程中发挥着重要作用,但由于病毒毒力返强、病毒灭活不彻底、活病毒逃逸疫苗加工厂等不安全因素,世界上一些地区FMD的暴发似乎与灭活疫苗中残存的活病毒有关,促使人们寻求一种更加安全有效的FMD疫苗。近年来,随着分子生物学技…     

口蹄疫防制与疫苗的研发进展

口蹄疫(FMD)做为偶蹄动物的一种急性热性高度接触性传染病,传染性极强,发病率几乎高达100%,往往造成大面积广泛流行,引起巨大的经济损失,国际兽医局(OIE)一直将本病列为发病必须报告的A类动物疫病之首,我国也将口蹄疫列为一类家畜传染病,并且十分关注。疫苗接种是特异性预防口蹄疫的可靠和有效手段,安全性好、免疫力高的疫苗是成功预防、控制乃至最终消灭口蹄疫的先决条件,了解疫苗的研发进展才能更好的去预防口蹄疫疫情。     

四川省2018年口蹄疫疫苗免疫效果评价

为了解四川省2018年口蹄疫疫苗免疫效果,随机抽取5个厂家的5种类型的口蹄疫疫苗进行免疫效果评价试验。在第二次免疫4周后检测口蹄疫抗体水平,结果表明:猪O型口蹄疫灭活疫苗、猪O型口蹄疫合成肽疫苗、猪O-A型口蹄疫二价灭活苗、牛羊O型-亚洲I型口蹄疫双价疫苗等4种类型的疫苗,各厂家疫苗的免疫抗体合格率均达到农业部规定70%以上要求;牛羊O型-亚洲I型-A型口蹄疫三价疫苗4个厂家的O型和A型抗体合格率均达到农业部规定70%以上要求,其中2个厂家的亚洲I型抗体合格率未达到70%以上。     

口蹄疫的检测方法与疫苗研究进展

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的急性接触性传染病.家畜中牛、羊、猪都敏感,其中牛最易感,人也可患病.由于猪、牛、羊等主要家畜均可感染此病,并能形成全球大规模流行,所以国际兽疫局(OIE)将该病列为A类家畜传染病之首.该病的发病率几乎达100%,但病程一般呈良性经过,死亡率只有2%～3%,犊牛及仔猪和恶性病型,死亡率可达50%～70%.除动物死亡造成直接经济损失外,动物在患病期间肉和奶的生产停止、病后肉和奶产量长期减少以及种用价值丧失也可造成较大的损失.最为严重的是由于该病传染性极强,对病畜和怀疑处于潜伏期的同群动物必须紧急处理,对疫点周围的广大范围必须隔离封锁,禁止动物移动和畜产品调运上市.因此导致该地区甚至该国家的畜产品进出口贸易停止,造成巨大的经济损失和政治影响.英国上一次大规模爆发口蹄疫是在1967年,当时有50万头牲畜被宰杀,经济损失1.5亿英镑.此次发现的口蹄疫使英国每天损失800万英镑,英国农民联合会的一项调查显示,大部分农民的收入在过去6年中下降了70%.     

猪口蹄疫免疫疫苗及使用

猪口蹄疫免疫疫苗包括口蹄疫O型灭活疫苗、口蹄疫O型合成肽疫苗。一般在免疫21d后,进行免疫效果监测：（1）亚洲Ⅰ型口蹄疫：液相阻断ELISA;（2）O型口蹄疫：正向间接血凝试验、液相阻断ELISA或VP1结构蛋白抗体ELISH。     

一起架子猪免疫注射猪口蹄疫疫苗过敏的治疗体会

<正>2009年8月,笔者在给生猪免疫注射口蹄疫疫苗时遇到一起架子猪免疫注射猪口蹄疫疫苗过敏的病例,经治疗后痊愈,现将情况报告如下:     

一起荷斯坦奶牛注射口蹄疫疫苗造成死亡病例

<正>我师某团奶牛场在2008年6月27日进行牛口蹄疫预防注射工作期间,对310头奶牛注射了"口蹄疫病毒O型、亚洲I型二价灭活疫苗",其中有71头牛出现了应激过敏反应,并且有1头奶牛死亡。现将发病死亡情况介绍如下:     

猪口蹄疫疫苗免疫后跟踪抗体检测试验及建议

<正>口蹄疫是我国强制免疫的传染病之一。近年来,我县在春秋两季计划免疫中的猪的免疫注射程序上,按照商洛市动物疫控中心安排,先免疫猪瘟疫苗,1周后再同时分点注射口蹄疫和蓝耳病疫苗,28 d再加强免疫1次,间隔1月后进行免疫抗体检测。结果显示,猪口蹄疫抗体合格率较低,尤其是今年春季全县猪口蹄疫免疫抗体检测95份,合格61份,合格率64%,低于国家规定保护率70%的标准。为此今年7—9月,我们进行了猪口蹄疫疫苗两种剂量注射免疫的跟踪抗体检测试     

口蹄疫的研究进展

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,该病以流行快、传播广、发病急、危害大为特征,对我国乃至世界畜牧业生产带来极大的威胁。现就口蹄疫病毒的发现,病原特征、流行病学、临床症状、防治措施、疫苗研究等方面进行全面阐述,以供同行参考。     

草鱼出血病基因疫苗的免疫效果

为探讨含有草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP6基因的重组基因疫苗对草鱼出血病的免疫效果,将重组基因疫苗分别配制为10、30和60μg三个梯度,同时设30μg pFastBacTMDual空载体组,均以等体积的氢氧化铝佐剂为免疫增强剂,对草鱼进行注射,以未经处理的草鱼作为对照组。定期采血测定抗体效价,最后对各组草鱼进行攻毒试验并计算死亡率和免疫保护力。结果显示：注射疫苗的三组草鱼均产生抗体,10μg组效价为1：6～1：11;30μg组为1：9-1：13;60μg组为1：11-1：17,且各组效价均在第28天测定最高,免疫保护率依次为100％、100％和95％,而空载体组和对照组为70％和0％。研究表明,疫苗能够诱导草鱼产生免疫反应,为草鱼出血病核酸疫苗的生产应用和产业化提供了重要的理论依据。     

对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP19的单克隆抗体制备及其定位

为了更好地研究对虾自斑综合征病毒(WSSV)蛋白VP19在WSSV感染过程巾的作用,利用VP 19的单克隆抗体直接对VP19进行了定位.从患白斑综合征的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃丝中提取WSSV,将提纯的WSSV经十二烷基磺酸钠-聚内烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,然后洗脱提纯其病毒蛋白VP19并免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,用间接免疫荧光技术(IFAT)和Western-Blot技术筛选出1株阳性杂交瘤细胞,将检测出的阳性杂交瘤细胞经有限稀释法克隆,研制出抗VP19的单抗,再利用免疫胶体金技术对病毒蛋白VP19进行定位,结果显示,胶体金粒子位于WSSV病毒的囊膜上,说明病毒篮白VP19位于WSSV囊膜上.[中国水产科学,2009,16(1):69-74]     

抗WSSV囊膜蛋白（VP28和VP19）单抗的体内中和效果研究

通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定不同稀释度对虾白斑综合征病毒（WSSV）与已制备的WSSV囊膜蛋白单克隆抗体结合的OD值。利用克氏原螯虾Cambarus proclarkii动物模型,将不同稀释度病毒与单抗1：1混合孵育2h后,肌肉注射克氏原螯虾（50μl／只）,观察记录螯虾的死亡情况。ELISA结果显示,在1×10^-3病毒稀释度下两种单抗均足量。在螯虾体内中和实验中,当病毒浓度为1×10^-3、1×10^-4、1×10^-5和1×10^-6稀释度时,MAb1D6（VP28）螯虾组最终死亡率分别为100％、90％、16．7％和6．7％,而MAb2E9（VP19）螯虾组最终死亡率分别为100％、100％、100％和93．3％。这表明随病毒浓度的降低,MAb1D6（VP28）的中和效果越明显。而MAb2E9（VP19）并无明显的中和效果。     

Expression and immunogenic comparison of VP2 and VP3 from marine birnavirus

The coding regions for the major epitopes of structural protein VP2 (vp2e) and structural protein VP3 were amplified from marine birnavirus (MABV) cDNA and efficiently expressed as glutathione S-transferase (GST) fusion proteins in Escherichia coli. Polyclonal antibodies against VP2e and VP3 were raised in rabbits and fish using the purified proteins of GST/VP2e and GST/VP3. The rabbit anti-serum against VP3 was more sensitive than the rabbit anti-VP2e serum in detecting virus in MABV-infected fish, while fish anti-VP2e serum showed a stronger neutralization response than fish anti-VP3 serum.     

草鱼呼肠孤病毒AH528株全基因组特征及进化分析

草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)引起的严重危害1~2龄草鱼的一种传染性疾病。本研究从安徽合肥地区患典型草鱼出血病的病鱼组织中分离到1株新的GCRV致病株,暂命名为GCRV-AH528。鱼体人工感染实验结果显示,实验鱼出现典型的出血病症状:体背发黑,鳍基部、腹部、口腔、鳃丝、肠道充血发红。全基因组特征分析显示,GCRV-AH528由11个双链RNA节段组成,节段大小在1027~3925 bp之间,AT平均含量为50.2%,GC平均含量为49.8%。与其他GCRVⅡ型毒株相比,L1节段在701~702位置缺少3个核苷酸(TAT),少编码1个酪氨基;M4节段出现突变,含2个开放阅读框,编码2个非结构蛋白NS9和NS69。所有节段两端均含有6 bp保守的末端核苷酸序列5'-GUAAU/CU…UU/GCAUC-3';另除L1、M6节段外,其余9个节段均在编码区两侧发现5~9 bp的颠倒互补序列。GCRV-AH528与其他呼肠孤病毒核苷酸平均相似度在37.1%~98.1%之间;编码蛋白平均相似度在24.3%~98.3%之间。基于VP1蛋白的聚类分析结果显示,该病毒属于水生呼肠孤病毒属,在氨基酸水平上与典型株GCRV-873株的进化关系较远。本研究结果表明,该毒株为一株新的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型致病株。     

重组WSSV囊膜蛋白VP281和VP31的抗菌功能初步分析

为了解白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)两种囊膜蛋白VP281和VP31的功能,本实验对二者进行了原核重组表达.利用一种组成型分泌原核表达质粒pBTA1为表达载体,构建了组成型分泌WSSV囊膜蛋白rVP281、rVP28以及rVP28与增强型绿色荧光蛋白rEGFP融合蛋白的重组大肠杆菌菌株DH5α,分别命名为DhpVP281、DhpVP28和DhpVP28-EGFP.3种重组菌在LB固体培养基上生长12 h的菌落直径分别为(164.84±28.44)、(560.47±46.04)和(548.21±58.54)μm,生长19 h的菌落直径分别为(436.31±47.56)、(1 136.90±110.88)和(1 083.33±109.83) μm,生长24 h的菌落直径分别为(594.19±57.17)、(1251.19±188.86)和(1 264.29±172.78) μm;显示在所有培养时间,DhpVP281的菌落均显著小于DhpVP28或DhpVP28-EGFP的菌落(P＜0.05),推测rVP281的表达可能抑制大肠杆菌的生长.以pBTA1为表达载体,未能成功构建组成型分泌rVP31的重组DH5α.为了解其原因,使用pET-30a(+)为表达载体,构建了表达rVP31包涵体的重组菌株BL21(DE3) pLysS.将rVP31蛋白纯化并复性后,采用牛津杯法,检测到rVP31蛋白对溶壁微球菌具有抗菌作用.在动物病毒中发现具有抗菌作用的囊膜蛋白,可以增加有关WSSV的病毒学方面的知识.     

对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28和VP26的毕赤酵母组成型分泌表达

近年来,重组 VP28和 VP26蛋白作为蛋白亚单位疫苗,在增强对虾抗白斑综合征病毒(WSSV)感染的过程中具有重要作用。本研究根据GenBank中WSSV的基因序列设计引物,以WSSV粗提液为模板进行普通PCR扩增,得到VP28和VP26基因,再用引物悬挂法将EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点分别添加到 VP28和 VP26基因的5￠端和3￠端。目的基因经双酶切后插入到表达载体pGAPZαA,转化TOP10大肠杆菌,经博莱霉素(Zeocin)抗性筛选阳性重组酵母表达载体。AvrⅡ酶切线性化之后,电击转化 X-33毕赤酵母感受态细胞,经 Zeocin 抗性筛选得到阳性重组酵母。SDS-PAGE电泳分析重组酵母表达上清液的目的蛋白,没有检测到VP28和VP26重组蛋白。随后,采用蛋白质银染法,结果显示,与空载pGAPZαA组相比,VP28和VP26表达上清液组有明显的条带,证明VP28和VP26在毕赤酵母中成功表达,蛋白分子量大小约为32 kDa。     

白斑综合征病毒囊膜蛋白VP19及VP28的研究进展

自二十世纪90年代,白斑综合征病毒(WSSV)就因其暴发范围广、致死率高得到了广泛的关注。研究主要集中在确定该病毒蛋白的结构及功能,以及利用其囊膜蛋白制备亚单位疫苗、研发DNA疫苗等来提高对虾抵抗白斑综合征病毒的能力,尽管免疫防治目前在实验室阶段已取得了显著的保护效果,但因其给药方式局限以及成本较高等因素一直没有应用于实际生产中。VP19和VP28是白斑综合征病毒主要的囊膜蛋白,在WSSV感染对虾的过程中起着非常重要的作用。本文从WSSV的基因组学、VP19和VP28的蛋白质结构及其在免疫防治中的应用等方面概述了VP19和VP28的研究进展,包括蛋白亚单位疫苗、DNA疫苗、RNA疫苗以及相关抗体的研究。在总结了不同类型疫苗的保护效果后发现,VP19和VP28的双价疫苗的保护率较高,为今后制定有效的WSSV控制方法提供了参考。     

Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4、VP35蛋白多克隆抗体制备及其免疫原性分析

为建立针对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的血清学检测方法,分别构建了GCRV JX02株外衣壳蛋白VP4、VP35的原核重组表达质粒PGEX-4T-3-S6、PGEX-4T-3-S11,用纯化的重组蛋白r VP4、r VP35分别免疫小鼠制得相应的多克隆抗体,用间接ELISA方法测定2种抗体的效价,用Western Blot鉴定抗体的特异性。SDS-PAGE分析细菌表达的r VP4、r VP35大小分别约为98ku和61ku,且都主要以包涵体的形式存在;间接ELISA方法测定制备的抗体效价分别约为1:4×105和1:106;Western Blot结果显示,制备的2种多克隆抗体都既能够识别原核表达的重组蛋白,又能够识别JX02毒株上的对应蛋白,并且发现感染JX02的草鱼血清中存在结合VP4、VP35的相应抗体。本研究制备的2种多克隆抗体都具有良好的生物学特性,并且这2种重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于通过检测抗病毒抗体来确诊草鱼是否感染Ⅱ型GCRV。本研究将为GCRV主要流行株血清学检测方法的建立以及VP4、VP35蛋白相关功能研究奠定基础。