转移电泳技术

转移电泳技术是Southen于1975年最先报道,并首先应用于DNA片段的研究。其基本原理是将琼脂糖凝胶电泳得到的核酸谱带直接转移到硝酸纤维素滤膜上,利用两条核酸单链之间的同源性进行分子杂交等各种研究。近年来,此项技术又扩展到对蛋白质     

核酸探针技术及其在大肠杆菌诊断中的应用

核酸探针又称基因探针,是随着分子生物学及分子遗传学的深入发展而产生的一种新的检测技术。与常规的实验室检测方法相比,核酸探针技术具有高度特异、敏感、快速、简便等优点。近几年,基于探针只能和靶细菌等的 DNA 杂交,而不与其它 DNA 杂交的原理,已将探针技术作为一种有效的检测手段,应用于细菌、病毒、疟原虫、钩端螺旋体等的鉴定和分类,并收到一定效果。     

重组DNA技术及其在动物科学中的应用

DNA重组技术是基因工程的核心,指在体外条件下,将不同生物的基因进行入工"剪切""组合"和"拼接",使遗传物质重新构建,然后通过载体转入受体细胞内并使所需要的基因在受体细胞内表达,DNA重组技术涉及核酸分子杂交技术、PCR反应、限制性核酸内切酶等工具酶的应用、基因转移等多项技术方法,本文就该技术在实验动物科学中的应用作一综述。     

分子生物学技术在微生物鉴定和分类中的应用

随着分子生物学的发展和应用,微生物的鉴定和分类逐渐提高到了一个新的水平。本文简要介绍了分子生物学技术在微生物鉴定和分类中的应用,包括DNA(G+C)mol%值、核酸杂交技术、核酸序列分析以及DNA分子标记技术等,以期为相关研究提供一定的理论参考。     

基因探针技术在大肠杆菌诊断中的应用

基因探针又称核酸探针,它是随着分子生物学及分子遗传学的深入发展而产生的一种新的检测技术。与常规的实验室检测方法相比,基因探针技术具有高度特异、敏感、快速、简便等优点。近几年来,基于探针只能和靶细菌等的DNA杂交,而不与其它DNA杂交的原理,已将探针技术作为一种有效的检测手段,应用于细菌、病毒、疟原虫、钩     

现代生物技术在水产养殖中的应用

核酸探针技术通过分析病原生物的遗传结构。根据这段基因结构的序列，就可以设计可与其互补的DNA探针，与病原生物的DNA进行杂交，以此来确定病原携带者和传播者的分子生物学技术。该技术具有灵敏度高、特异性强等优点，近年来在对虾病毒病的检测中倍受青睐。     

基因芯片及其研究进展

基因芯片(genechip)又称DNA芯片,是指将大量探针分子固定于支持物上,然后与标记的样品进行杂交,通过杂交信号的强弱判断靶分子的数量。用该技术可将大量的探针同时固定于支持物上,所以一次可对大量核酸分子进行检测分析,从而解决了传统核酸印迹杂交技术操作复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低等不足。它能在同一时间内分析大量的基因,使人们准确高效地破译遗传密码。这将是继大规模集成电路后又一次意义深远的科技革命。1基因芯片的特点1.1并行性高度的并行性不仅大大提高实验的进程,并且有利于DNA芯片技术所展示图谱的快速…     

鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒的研制

用特定引物通过PCR合成了经地高辛标记的鸡致病性外源性及内源性禽白血病病毒特异性核酸探针,通过交叉斑点分子杂交,这些探针将可用于检测病料样品中致病性外源性禽白血病毒特异性核酸的存在。利用此试剂盒,对从病料组织样品中提取的基因组DNA作交叉斑点分子杂交或对提取的DNA用相应引物扩增后的PCR产物作交叉斑点分子杂交,可在24～36h内完成检测并报告结果。     

基因芯片技术检测细菌耐药性

1　基本概念生物芯片 (Biochip)是指将大量的生物分子探针以大规模阵列形式排布在很小的载玻片、尼龙网等载体上 ,通过与标记的样品进行杂交 ,检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。依据生物分子探针的不同 ,生物芯片可分为很多种类 ,包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片。目前研究最成功的且形成一定商业市场的是 DNA芯片 (DNAchip或DNA Microarry) ,又称为基因芯片 (Gene chip) ,即将无数预先设计好的寡核苷酸、c DNA、基因组 (Ge-nomic) DNA在芯片上做成点阵 ,与样品中同源核酸分子杂交。包括两种模式 :一是…     

DNA芯片技术及其应用

DNA芯片技术是近年来发展起来的一项融微电子、生命科学和物理学为一体的新技术,是基于核酸杂交的理论而研制的.目前广泛应用于DNA测序、基因突变检测、基因表达研究、蛋白组学研究等多个方面,具有广泛的应用前景.     

猪圆环病毒2型地高辛标记探针检测方法的建立与应用

根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV-2)基因序列,在ORF2内设计1对特异性引物,利用PCR反应扩增出371 bp的核酸片段,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,建立了地高辛标记核酸探针诊断PCV-2的方法。该探针与8个PCV-2重组菌的核酸抽提物均能发生特异性杂交,而与对照猪圆环病毒Ⅰ型(PCV-1)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)的核酸杂交均为阴性;对PCV-2 DNA的最低检测量为10 pg。     

应用~(32)P标记核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒的研究初报

本文在我国首次报道应用核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)。经培养、纯化IBRV,抽提IBRV全基因组DNA,用缺口翻译法标记上~(32)P,在硝酸纤维膜上进行打点杂交。试验结果表明,采用~(32)P标记的核酸探针,可检测出10Pg的IBRV—DNA,能明显区别IBRV感染细胞和未感染的正常细胞,具有相当高的灵敏度和特异性,同Dorman报道的结果相似。 应用核酸探针检测病毒核酸的技术,近年来有了突破性的进展,有的国外学者称之为第四代检测技术。其基本原理是利用放射性同位素标记的DNA或RNA(即核酸探针)与固定在硝基纤维素膜上或玻片上的单链核酸进行杂交,经过放射自显影,在X光片或感光乳胶中可看到特定的核酸片段的踪迹。由于这一技术具有灵敏度高,特异性强的优点,在医学临床诊断中已显示出它的优越性,文献报道日趋见多。在动物病毒研究方面已见到了用核酸探针检测蓝舌病,牛传染性鼻气管炎鸡马立克病,猪伪狂犬病、犬瘟热、传染性喉气管炎等病毒感染的报道。 Dorman,M,A在1985年首先报道了利用生物素标记的IBRV—DNA的HindⅢ酶切片段可检测出10pg(10~(-11)g)IBRV—DNA。随后,Dunn,D.C和Pacciarini,L以及Brunner,D也相继作了报道。我们用~(32)P标记的IBRV—DNA全基因组做为核酸探针,进行了一系列的研究,初步结果表明,我们     

DNA芯片技术及其应用

DNA芯片技术是近年来发展起来的一项融微电子、生命科学和物理学为一体的新技术，是基于核酸杂交的理论而研制的。目前广泛应用于DNA测序、基因突变检测、基因表达研究，蛋白组学研究等多个方面，具有广泛的应用前景。     

核酸免疫与核酸疫苗研究进展

核酸免疫是利用重组DNA技术将保护性抗原蛋白基因克隆到真核表达载体,并将其直接导入体内,使抗原蛋白经过内源性表达递呈给免疫系统,诱发机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫反应。核酸免疫也称DNA免疫或基因免疫。用于免疫注射的质粒DNA称为核酸疫苗(nucleicacidvaccine)或DNA疫苗(DNAvaccine)。核酸疫苗不同于传统的弱毒苗、灭活疫苗及蛋白亚单位苗,它是带有特异抗原基因的真核表达质粒。1　核酸免疫的发展核酸免疫是随着现代分子生物学和免疫学的发展而产生的。70年代末,Israel等将纯化的多瘤病毒DNA直接注射小鼠,证实裸DNA可被…     

用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究

利用PCR技术从带有伪狂犬病毒（PRV）gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRVBartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒（PPV）DNA、猪圆环病毒（PCV）DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsV）cDNA、猪瘟病毒（CSFV）cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。     

鸡网状内皮细胞增生病的诊断试验

本试验将PCR扩增与核酸探针斑点分子杂交特异性诊断检测技术相结合,对部分疑似REV感染患病鸡群进行了外源性核酸特异性交叉检测诊断试验,提高了REV感染诊断的准确性。应用鸡REV地高辛核酸探针斑点分子杂交特异性诊断检测方法,对860余份血液DNA样本进行了REV感染特异性检测试验。结果表明,贵州地区鸡REV阳性感染率为:高产蛋鸡40.05%(164/390)、杂交肉鸡42.91%(106/247)、绿壳蛋鸡34.97%(57/163)、地方土鸡11.7%(7/60)。     

以兔出血症病毒(RHDV)核酸制备DIG探针用于鉴定RHDV cDNA文库中的2.2kb克隆

从纯化的RHDV中提取电泳纯核酸,以此为模板在DNA聚合酶催化下,加六核苷酸随机引物和dATP、dCTP、dGTP及Digll-dUTP进行标记,制成DIG探针。用此探针与RHDV核酸作斑点杂交和Southern杂交,均显强阳性反应;与从RHDV-mRNA构建的RHDV cDNA文库中的2.2kb质粒DNA亦显阳性反应。用同法标记2.2kb质粒DNA,不仅与同     

核酸疫苗的研究与应用

核酸疫苗(nucleicacidvaccine)是指将含有编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)序列质粒载体作为疫苗,直接导入到动物细胞内,通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗又称为基因疫苗或裸DNA疫苗,核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗。这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫以及遗传免疫等。核酸疫苗与传统疫苗相比有许多优势。1核酸疫苗的研究历史核酸疫苗是由基因治疗发展而来的,1990年Wolff等发现,在小鼠肌肉组织内直接注射质粒DNA后,质粒及其携带的外…     

家蚕质型多角体病毒双链核糖核酸分子杂交的研究

为了研究家蚕质型多角体病毒(CPV)的致病机理及其早期检测,我们建立了该病毒双链核糖核酸(dsRNA)分子杂交技术.dsRNA分子杂交的关键在于其解链及使解链后的单链RNA(ssRNA)与其互补DNA杂交.我们采用90%的二甲基亚砜或8M的尿素使CPV—dsRNA解链.并合成了它的cDNA探针.用此探针完成了硝酸纤维膜上的CPV核酸斑点及基因组片段转移分子杂交的研究.     

家蚕浓核症病毒中国(镇江)株核酸结构的研究

我们利用制作DNA限制图谱和核酸分子杂交的方法对BmDNV中国(镇江)株核酸结构进行了研究。结果证明其DNAⅠ和DNAⅡ具有不同的碱基序列,BmDNV中国(镇江)株可能是由两类不同的DNV病毒粒子组成的混合物。