绒山羊次级毛囊基因表达滞后性的转录组分析

毛囊是具有高度的自我更新能力、独特的可再生器官,其周期性变化是一个动态过程,为了研究毛囊差异基因表达变化情况,文章以内蒙古绒山羊生长期毛囊为研究对象,利用Illumina高通量测序技术方法,检测6~10月皮肤毛囊差异基因表达变化情况,寻找对绒毛生长及质量具有调控作用的特异表达基因。试验发现,多数差异基因分别在初级毛囊（PF）的7、8月份和次级毛囊的（SF）8、9月份表达;在绒毛生长期的相邻月份中,发现FAM83C、LOC102185501、FYCO1、CTTNBP2NL、C6orf132、KRTAP29-1 和 CRYBG3 7个共同差异表达基因呈现相同的表达趋势,且在次级毛囊上的表达变化均比初级毛囊滞后1个月。综上所述,次级毛囊在基因表达调控中存在一定的滞后性,这将为绒毛周期生长发育和分子育种提供重要的理论基础。     

内蒙古绒山羊Hox基因家族成员在毛囊中表达的研究

Hox基因作为一类重要的转录因子,在胚胎发育组织分化过程中有重要作用。为了探索Hox基因在绒山羊毛囊发育中的作用机制,本研究采用原位杂交技术,检测Hox基因家族成员Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因在绒山羊毛囊的表达模式。结果显示,Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因分别在绒山羊胚胎期和兴盛期毛囊的不同部位表达,说明Hox基因在绒山羊毛囊生长发育过程中扮演着重要的角色。     

内蒙古绒山羊Hox基因家族成员在毛囊中表达的研究

Hox基因作为一类重要的转录因子,在胚胎发育组织分化过程中有重要作用。为了探索Hox基因在绒山羊毛囊发育中的作用机制,本研究采用原位杂交技术,检测Hox基因家族成员Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因在绒山羊毛囊的表达模式。结果显示,Hoxa4、Hoxa5、Hoxa6基因分别在绒山羊胚胎期和兴盛期毛囊的不同部位表达,说明Hox基因在绒山羊毛囊生长发育过程中扮演着重要的角色。     

饲喂PRL抑制剂对燕山绒山羊毛囊发育的影响

旨在研究绒山羊毛囊生长期饲喂催乳素（PRL）抑制剂对毛囊发育的影响。本研究选择3月龄体重相近（（23.01±4.82） kg）、健康良好的燕山绒山羊公羊20只,随机分为两组,每组10只,分别为对照组和试验组,试验组饲喂PRL抑制剂（0.06 mg·kg^-1）,试验期90 d。试验结束时采集羊绒纤维、血液和皮肤样品,分析饲喂PRL抑制剂对山羊绒长度、细度、血液指标、毛囊性状及皮肤组织PRL、MTNR1a和RORα mRNA表达水平的影响。结果表明,饲喂PRL抑制剂显著提高了绒山羊初级毛囊数量、次级毛囊数量和S/P值（P<0.05）,并显著提高了活性初级毛囊占比和活性次级毛囊占比（P<0.05）,对山羊绒伸直长度和细度无显著影响（P>0.05）。饲喂PRL抑制剂3个月对绒山羊血清中PRL、MT、IGF-1、COR、GH、T₄和T₃均无显著影响（P>0.05）,但显著降低了皮肤中PRL和MTNR1a mRNA表达水平（P<0.05）,对RORα mRNA表达量无显著影响（P>0.05）。综上,在绒山羊毛囊生长期抑制PRL分泌可能是通过降低皮肤中PRL和MTNR1a基因的表达来促进毛囊发育。     

内蒙古绒山羊Homeoboxc9基因在皮肤毛囊中的表达

试验通过原位杂交检测Homeoboxc9（Hoxc9）基因在皮肤毛囊中的表达情况,结果显示Hoxc9在胚胎期75 d的上皮细胞中表达,伴随着毛囊的生长发育,Hoxc9基因分别在初级毛囊的毛母质、毛乳头、内根鞘、外根鞘和毛干几个部位表达;在次级毛囊的内根鞘和绒干表达。在这个过程中毛囊角质化细胞大量增殖,表明在毛囊发育中Hoxc9基因对于角质化细胞的增殖可能起一定作用。     

陕北白绒山羊皮肤毛囊形态结构及其特征参数与产绒性状的相关性分析

试验旨在研究陕北白绒山羊皮肤毛囊结构及其特征参数与产绒性状间的相关性,为绒山羊绒毛生长的分子调控机理研究及皮肤毛囊性状在绒山羊选育中的应用提供参考。通过制作陕北白绒山羊皮肤组织切片,用显微照相系统观察皮肤毛囊形态特征,统计分析皮肤和毛囊的特征参数,并用SPSS 17.0软件分析特征参数与产绒性状各指标的相关性。结果显示,陕北白绒山羊毛囊成群分布且以三元型毛囊群为主,占总毛囊群的85.80%;产绒量与体重、绒长度、S/P值、次级毛球宽度均呈极显著正相关（P<0.01）,与次级毛囊密度呈显著正相关（P<0.05）,与表皮厚度呈显著负相关（P<0.05）;绒长度与产绒量、次级毛球宽度均呈极显著正相关（P<0.01）,与体重、S/P值、次级毛囊直径均呈显著正相关（P<0.05）,与表皮厚度呈显著负相关（P<0.05）;绒细度与S/P值呈显著负相关（P<0.05）;S/P值影响绒细度,而体重、绒长度、S/P值、次级毛囊密度（绒密度）显著影响产绒量（P<0.05）。综合分析认为,S/P值可以作为陕北白绒山羊选种工作中的一个重要性状指标,在育种工作中选择高S/P值个体,不仅能够提高产绒量,而且能够提高绒长度、降低绒细度,解决产绒量和绒品质同时提高的矛盾。     

毛囊形态发生和周期性变化相关信号因子在绒山羊中的研究进展

毛发的生长与毛囊的形态发生和周期性变化密不可分,毛囊的形态发生和周期性变化依赖上皮角质细胞和真皮间质细胞的相互作用。作者综述了毛囊的结构、形态发生、周期性变化,讨论了毛囊形态发生和周期性变化过程中相关信号因子的作用,以期为在分子水平阐述毛囊形态发生和周期性变化的调控机制提供依据,为提高绒毛的产量和品质提供参考。     

辽宁绒山羊毛囊群结构的研究

辽宁绒山羊的产绒性能与其皮肤毛囊结构是密切相关的。通过组织切片技术观察辽宁绒山羊皮肤毛囊结构,并对获得的数据进行最小二乘均数分析,研究了辽宁绒山羊羔羊不同月龄,不同季节毛囊密度和S/P值的变化及出生类型,母羊年龄对毛囊性状影响。结果表明,辽宁绒山羊的毛囊群主要是由3个初级毛囊和若干个次级毛囊组成的三毛群,三毛群占毛囊群总数的75%左右。次级毛囊呈楔形群排列在中心初级毛囊和外周初级毛囊中间,随着羔羊月龄的增长,毛囊密度逐渐下降,S/P值逐渐上升,S/P在6月龄达到最大值。成年羊初级毛囊密度季节间变化不大,次级毛囊密度和S/P值表现出明显的季节变化,4月份次级毛囊密度和S/P值最小,9月份次级毛囊密度和S/P值最大。     

不同浓度褪黑素刺激对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖活性的影响

试验旨在探究不同浓度褪黑素刺激对内蒙古绒山毛囊干细胞增殖活性的影响.采用0 (对照组)、100、300、500、700 pg/mL 5个浓度梯度分别对内蒙古绒山羊毛囊干细胞连续刺激5 d,MTT法分别检测各组细胞活性.结果表明,不同浓度褪黑素刺激2 d后,相较于对照组 (0 pg/mL),褪黑素刺激组未见成团细胞出现,开始出现长梭形细胞且细胞生长不再均一,各刺激组均表现出较高的增殖活性;刺激4 d后,500 pg/mL褪黑素刺激组毛囊干细胞增殖活性显著高于0、100 pg/mL (P<0.01;P<0.05),但与700 pg/mL褪黑素刺激组差异不显著 (P>0.05).因此,500 pg/mL是内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖的最适浓度.     

Effect of Different Concentrations of Melatonin on Proliferative Activity of Hair Follicle Stem Cells in Inner Mongolia Cashmere Goat

This study aimed to investigate the effect of different concentrations of melatonin on proliferative activity of hair follicle stem cells in Inner Mongolia cashmere goat.The five levels melatonin including 0,100,300,500 and 700 pg/mL were designed to stimulate the hair follicle stem cells in Inner Mongolia cashmere goat,the MTT method was used to detect cell proliferation activity for 5 days.The result showed that 2 days later,the groups stimulated by melatonin did not cobble-stone arrangement and began to appear spindle cell and cell growth was not uniform compared with the control group (0 pg/mL),the groups showed obvious effect on cell proliferation relatively.4 days later,the cell proliferation of groups stimulated by 500 pg/mL melatonin were significantly greater than that of 0,100 pg/mL (P<0.01;P<0.05),but there was no significant difference with 700 pg/mL melatonin stimulation group (P>0.05).The optimal melatonin concentration of hair follicle stem cell proliferation was 500 pg/mL in Inner Mongolia cashmere goat.     

绒山羊皮肤毛囊的研究进展与前景

作者从绒山羊毛囊的结构特征、发育规律、体外培养、毛囊干细胞及毛囊发育相关的基因等方面概述了目前国内外绒山羊皮肤毛囊的研究进展,并对其前景进行了展望。     

内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿期皮肤毛囊发生发育规律研究

以阿尔巴斯绒山羊胎儿期55d至初生10个阶段的头顶、颈侧、髫甲、颈上缘、肩胛、体侧、背部、荐部、股部、腹部10个部位皮肤为样品，制作横切和纵切切片，观测皮肤毛囊性状的发育规律。结果表明：各部位表皮在胎龄55～65d均形成完整的结构，在胎龄85～95d达到最厚；真皮厚度在胎龄95～125d增长幅度较大。胎龄55d见到初级毛囊原始体，胎龄65d见到次级毛囊原始体，次级毛囊是初级毛囊的一个分支。胎龄85d见到皮脂腺，胎龄95d绒、毛开始形成，见到汗腺，有粗毛长出体表，绒毛在胎龄115d长出体表。各部位初级毛囊在胎龄95～115d增长速度较快，次级毛囊在胎龄105～125d增长速度较快；初级毛囊密度在胎龄75～85d最大，次级毛囊密度在胎龄105～125d达到最大，S／P在胎龄115d至初生时达到最大。胎龄105d已经形成完整的毛囊群结构，主要为三元毛囊群。     

催乳素对内蒙古绒山羊毛囊体外培养影响的研究

【目的】 研究催乳素（PRL）对内蒙古绒山羊初级毛囊和次级毛囊体外生长及形态变化的影响。【方法】 机械法结合切割法分离内蒙古绒山羊的初级毛囊和次级毛囊,在初级毛囊培养液中分别添加0、5、10、50、100 ng/mL催乳素进行体外培养,每组24根,共培养5 d,每天在显微镜下观察其形态并拍照,统计其生长长度、生长速度和存活率,筛选出最适催乳素处理浓度。然后将初级毛囊与次级毛囊分别分为初级毛囊对照组（PF-K）、初级毛囊试验组（PF-PRL）、次级毛囊对照组（SF-K）、次级毛囊试验组（SF-PRL）,每组24根,对照组用基础培养液培养,试验组在基础培养液中添加最适浓度的催乳素,培养5 d,每天观察毛囊的形态并拍照,同时测量各组毛囊的生长长度。【结果】 10 ng/mL催乳素组毛囊的平均日生长长度均极显著高于其他浓度组（P<0.01）,最终生长长度和存活率均最高,因此,后续试验选择10 ng/mL催乳素处理毛囊。试验组和对照组初/次级毛囊的毛干与根鞘部位同时伸长,随着培养时间的增加均出现不同程度的弯曲。PF-PRL、SF-PRL组毛囊在2~5 d的总长度分别极显著高于PF-K、SF-K组（P<0.01）。PF-K组除第1天与第0天差异不显著外,1~5 d毛囊的总长度依次显著增加（P<0.05）;PF-PRL组0~5 d毛囊的总长度依次显著增加（P<0.05）。SF-K组毛囊第5天的总长度显著高于0~4 d （P<0.05）;SF-PRL组第4、5天毛囊的总长度均显著高于0~3 d （P<0.05）,第3天毛囊的总长度显著高于0~2 d （P<0.05）。PF-PRL、SF-PRL组毛囊在2~5 d的平均日生长长度分别极显著高于PF-K、SF-K组（P<0.01）。【结论】 10 ng/mL催乳素是体外促进毛囊生长的最适浓度,10 ng/mL催乳素对体外培养的内蒙古绒山羊的初级毛囊和次级毛囊均有极显著的促生长作用。     

绒山羊毛囊干细胞的分离培养及诱导分化鉴定

试验旨在建立绒山羊毛囊干细胞体外分离培养方法,并对其生物学特性和多向分化潜能进行鉴定。利用两步酶消化法和差速贴壁法分离纯化毛囊干细胞,对其进行传代培养,测定生长曲线和克隆形成率,采用油红O和茜素红染色法对第5代毛囊干细胞向成脂和成骨分化情况进行鉴定。结果显示,分离得到的毛囊干细胞形态均一,体积小,呈典型的铺路石状生长,生长曲线呈S型,克隆形成能力强。成脂诱导后,细胞体积增大,细胞质增多,胞内出现小脂滴,诱导12 d后,脂滴逐渐增多,油红O染色呈阳性;成骨诱导后,细胞边缘模糊,出现颗粒状结节,经茜素红染色呈阳性。表明获得的绒山羊毛囊干细胞具有多向分化的潜能。     

毛囊的周期性变化和分子调控及其在绒山羊上的研究进展

毛囊是一个形态和结构较为复杂的皮肤附属器官,它控制着毛发的生长,具有自我更新和周期性生长的特点。毛囊的周期性变化依靠毛囊上皮细胞和真皮间充质细胞的相互作用,先是毛囊长出毛干为生长期,接下来是凋亡驱动的退行期,然后进入休止期。其变化过程是一系列信号分子相互作用形成的,包括启动信号、维持毛囊生长的信号及抑制毛囊生长的信号等。绒山羊初级毛囊和次级毛囊在出生后也表现周期性变化,次级毛囊由于光周期的影响而呈很强的季节性的周期变化,而初级毛囊则变化不明显。山羊绒是绒山羊次级毛囊的衍生物,次级毛囊的生长发育直接影响山羊绒的产量和品质。因此,研究皮肤毛囊周期性变化的规律及它们的分子调控机理不仅可揭示毛囊的发育规律而且对绒山羊的育种具有重要指导意义。     

山羊毛囊干细胞分离、培养及鉴定

采用2．4U／mLDispase酶消化和机械切割法分离毛囊隆突部,经胰酶（0．5mg／mL胰酶＋0．2mg／mLEDTA）消化从山羊耳部皮肤分离得到毛囊干细胞,用自制无血清培养基培养,并用形态学观察、细胞生长曲线、克隆形成率及免疫组化染色检测,探讨毛囊干细胞体外分离培养方法及生物学特性。结果表明,所分离细胞具备毛囊干细胞特征：体积较小、表面光滑、立体感强,呈现未分化细胞特征;K19、integrin-β1以及p63免疫组化染色阳性;第3、5、7代干细胞克隆形成率分别为25．6％&#177;2．6％、31．8％&#177;1．9％和27．0％&#177;3．9％,极显著高于对照组角质细胞克隆形成率（P〈0．01）。采用配制的无血清条件培养液可使山羊毛囊干细胞体外维持未分化状态并传代至19代。     

转录组测序技术在绒毛用羊中的应用研究进展

高通量转录组测序技术在绒毛用羊参考转录组信息的研究过程中发挥着越来越重要的作用。作者主要介绍采用二代高通量测序技术(以RNA-Seq为主),挖掘绒毛用羊产毛、产绒等重要功能性状的分子标记,重点分析新发现的山羊新基因及与绒毛用性能相关的候选标记,为调控绒毛生长的分子机制、相关基因表达调控网络及绒毛分子育种等工作的深入研究提供参考。     

基于单细胞转录组测序技术对鄂尔多斯细毛羊次级毛囊形态发生诱导期的研究

【目的】试验旨在解析鄂尔多斯细毛羊胚胎期次级毛囊诱导期形态发生过程中主要细胞类型的分子特征和分化过程。【方法】对采集的3只鄂尔多斯细毛羊(胎龄87 d)体侧部(肩胛骨后缘处)的皮肤样本进行HE染色,鉴定毛囊的发育时期;部分皮肤样本经过混样后进行单细胞转录组测序(scRNA-Seq),应用t-分布随机近邻嵌入(tSNE)分析细胞簇,分别使用胶原Ⅰ型α1链(Col1a1)和角蛋白15(Krt15)鉴定真皮谱系细胞和表皮谱系细胞,并使用皮肤组织不同细胞的标记基因进行细胞类型分析;对测序数据进行拟时序分析,探究其分化过程中差异基因的表达;通过GO功能富集分析进一步验证基因的功能。【结果】HE染色结果发现,鄂尔多斯细毛羊在胎龄87 d处于次级毛囊诱导期。通过scRNA-Seq在胎龄87 d的细毛羊体侧部皮肤细胞样品中获得10 603个细胞和18 704个基因的scRNA-Seq数据可用于下游分析。tSNE分析发现,皮肤组织中共有15个细胞簇;Col1a1和Krt15标记基因鉴定表明,真皮细胞和表皮细胞具有高度异质性。拟时序分析构建毛囊形态发生过程中真皮/表皮细胞谱系细胞的分化轨迹和基因动态表达图...     

辽宁绒山羊皮肤毛囊血管内皮生长因子基因的表达研究

采用反转录—聚合酶链式反应（RT-PCR）方法对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在辽宁绒山羊常年长绒和季节长绒两个品系皮肤毛囊中的相对表达量进行测定。试验结果表明,VEGF基因mRNA在辽宁绒山羊常年长绒和季节长绒两个品系的皮肤毛囊组织中都有表达,并且两个品系在一年内同一月份VEGF基因mRNA的相对表达量差异不显著（P＞0.05）,但是一年内各个月份间VEGF基因mRNA的相对表达量2月份与其它月份差异显著（P＜0.05）。辽宁绒山羊常年长绒型新品系VEGF基因mRNA的相对表达量除2月份外,常年维持在一个较高的水平,这可能是其能够常年长绒的一个重要原因。