一例鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及其病原的分离鉴定

为确定引起2015年6月底福州仓山区某一养鸭场10日龄左右麻鸭发病死亡的病原,无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏、脑等组织,经病毒分离、细菌分离纯化、PCR检测、血清学检测、药物敏感性试验,结果检测并分离到鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌,该鸭1型甲肝病毒分离株与MPZJ1206株和GD株同源性最高,均为98.7%。结果表明,该病例为鸭甲肝病毒1型和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染。     

鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子基因的克隆及序列分析

本研究根据鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子(RaDtxR)基因序列特征设计特异性引物,利用PCR方法从已鉴定为2型鸭疫里默氏菌RA-FJ株的基因组DNA中扩增目的基因片段,胶回收PCR扩增片段,克隆到pMD18-T载体后进行序列测定.采用生物信息学软件对测序结果进行分析,结果表明所获得的RaDtxR基因编码完整的开放阅读框,全基因长度为654 bp,编码217个氨基酸.所编码的蛋白大小为24.82 ku,理论等电点为5.69,不稳定系数为38.45,属于稳定蛋白质类.将其与GenBank中已发表的RaDtxR基因序列进行核苷酸同源性比对分析,结果显示其与鸭疫里默氏菌疫苗株RA-CH-1株(GenBank登录号:CP003787)的核苷酸同源性为100.0%,与其他4株核苷酸同源性均为99.8%,仅在186位处存在无义突变.利用该基因对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的鸭大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌和沙门氏菌进行扩增,结果显示均未扩增到条带,对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的1型、2型、3型、11型和13型鸭疫里默氏菌均可扩增出特异性目的条带,表明RaDtxR基因可作为鸭疫里默氏菌鉴别诊断的靶基因.试验结果表明,本研究成功克隆到鸭疫里默氏菌RaDtxR基因,为研究其功能奠定基础.     

一株鹅源鸭疫里氏杆菌与鸭源分离株的致病性比较

从某发病的鹅场分离到 1株血清 1型的鸭疫里氏杆菌 ,与同地区分离到的 1株血清 1型鸭源鸭疫里氏杆菌分离株 ,分别经腿肌注射的途径攻雏鸭和雏鹅。结果表明鸭源分离株对雏鸭和雏鹅的致病性比鹅源分离株强 ,而且这 2株鸭疫里氏杆菌对雏鹅的致病性比雏鸭强     

1型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立

以1型鸭疫里氏杆菌(RA)全基因组保守区域ompA基因的重组表达产物为包被抗原,建立了检测RA血清抗体的间接ELISA方法。原核表达的重组ompA蛋白经纯化后作为包被物,以方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度为1.5μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶100。与普通的微量凝集试验相比较,该方法灵敏度高于凝集试验约16倍～128倍。与鸭源大肠埃希菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭链球菌、鸭源呼肠病毒、鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒感染鸭血清均无交叉反应,表明该方法特异性好。利用该方法检测了雏鸭免疫RA灭活油乳剂疫苗之后血清抗体水平。     

鸭疫里氏杆菌病病原的分离鉴定

鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)病,是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对某鸭场的病死鸭进行临床症状观察、病理剖检,通过细菌的分离培养及鉴定,确诊病死鸭病原为鸭疫里氏杆菌。鉴于养殖场中该病的存在及对养鸭业的危害,建议加强对鸭疫里氏杆菌病的诊断及监控。     

Isolation,Identification and Drug-sensitivity Test of Riemerella anatipestifer from Different Areas

In order to understand the prevalence of the duck infectious serositis in different regions,and further to determine the sensitivity of the commonly used drugs for the Riemerella anatipestifer in these area.Bacteria were isolated from suspected infected ducks in Yunfu, and Kaiping in Guangdong province and Changshan in Zhejiang province.The isolated bacteria were identified by differential culture, microscopic examination and biochemical test. Micro dilution method was carried out in drug sensitivity test, and the MIC values of the isolated strains to the commonly used drugs were determined.As a result, a total of 16 strains of Riemerella anatipestifer were isolated and identified from three areas. Data of the MIC showed that all isolates were highly sensitive to cephalosporins and florfenicol;Doxycycline andspectinomycin were sensitive too,but enrofloxacin, neomycin and other tested drugs showed different degrees of resistance.The present study provided a systematic method for the isolation and identification of the Riemerella anatipestifer and for the drug sensitivity test.At the same time, it also provided theoretical guidance for the rational drug control of the duck infectious serositis.     

不同地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了解不同地区鸭疫里氏杆菌病的流行情况,并进一步测定这些地区鸭疫里氏杆菌对常用抗菌药物的敏感性。本试验从广东云浮、广东开平、浙江常山3个地区疑似传染性浆膜炎病鸭中进行了细菌分离,通过鉴别培养、染色镜检、生化试验等对分离菌进行鉴定。采用微量稀释法测定了分离菌株对常用药物的最小抑菌浓度。结果从3个地区共分离鉴定出16株鸭疫里氏杆菌。药敏试验结果表明,3个地区鸭疫里氏杆菌均对头孢类和氟苯尼考高度敏感,对多西环素、大观霉素比较敏感;对恩诺沙星,新霉素等其他受试药物呈不同程度的耐药。本研究为鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药物敏感性测定提供了系统方法,为临床选择合理药物防制鸭传染性浆膜炎提供了理论指导。     

1株无致病力的鸭疫里氏杆菌的分离及鉴定

从安徽和县无病鸭场的健康鸭咽部分离到1株革兰氏阴性短杆菌,定名为LY-58株。经分离培养、形态学检查、生理生化试验、血清学鉴定及PCR鉴定,分离菌株被鉴定为2型鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)。毒力实验显示,2型RA参照菌株RAF2对10日龄北京鸭的LD50为5.57×107CFU,而分离菌株LY-58的LD50大于1.0×1010CFU,可确定为无致病性。     

鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测方法的建立

本研究根据GenBank中鸭新城疫病毒(NDV)的F基因和鸭圆环病毒(DuCV)的V1/rep基因的保守序列,各设计一对特异性引物,并对二重PCR的扩增条件进行优化,建立了鸭NDV和DuCV的二重PCR检测方法。对混合样品进行扩增,得到2条大小为493bp(鸭NDV)和218bp(DuCV)的特异性条带,与预扩增片段相符。而对番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源小鹅瘟病毒、鸭H9亚型流感病毒、鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌等病原检测,结果为阴性。该方法的敏感性试验表明,鸭NDV的核酸最小量为40fg,DuCV为20fg。     

水禽新现疾病的发生概况和防制思路

介绍了目前水禽新出现疾病水禽流感、鸭病毒性肝炎、禽副粘病毒、呼肠孤病毒病、圆环病毒、鸭传染性浆膜炎的发生概况和病原学特点,提出了防制策略。     

广东、四川两省规模化肉鸭养殖场病原菌调查研究

采取流行病学、临床症状、病理解剖、病原分离与墼定系列方法,对2008年5月至2008年11月之间,从广东和四川两省抽样调查的鸭病病原菌进行了研究。从2省6个市县的11个规模化养殖场,采集病死鸭头、肝等病料,接种巧克力LB平板和麦康凯培养基,共获得20株细菌。通过生化反应等系统鉴定,判为大肠杆菌的9株,占42．8％;鸭疫里默氏杆菌的11株,占57．2％。采用玻板凝集实验检测,11株鸭疫里默氏杆菌属于AF型的5株（占45．5％）、DZ型1株（占9．1％）、5株（45．5％）未能定型。     

Exclusion of strain 670/89 as type strain for serovar 20 of Riemerella anatipestifer

Classical phenotypic characterisation and numeric analysis of whole-cell fatty acid patterns of twenty-one type strains of hitherto reported Riemerella anatipestifer serovars revealed that the type strain of serovar 20 does not belong to the species Riemerella anatipestifer sensu stricto and, therefore, it has to be excluded as a representative Riemerella anatipestifer serotype strain.     

鸭肝炎病毒GD株的分离与RT-PCR鉴定分析

本研究分离了1株鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV),并对其进行了分型研究。取广东某鸭场疑似DHV致死8日龄雏鸭肝脏,肝脏组织处理后经鸭胚接种分离纯化病毒。分离毒株经动物回归试验、ELD₅₀测定、中和试验等确定为血清Ⅰ型DHV,同时通过RT-PCR检测及序列分析,从基因分型角度也验证分离毒株为DHV-Ⅰ,并将该分离毒命名为GD株。     

荧光定量PCR方法检测鸭疫里默氏菌在组织中的分布规律

为揭示鸭疫里默氏菌在鸭组织中的分布规律,用荧光定量PCR检测法,对人工感染鸭疫里默氏菌鸭组织中鸭疫里默氏菌进行检测。结果表明,获得的熔解曲线为单一的峰,扩增曲线为"s"形,标准曲线扩增效率为99.7%。人工感染鸭疫里默氏菌1、2、3、5、9、14 d鸭脾脏、脑、心脏、肺脏和肝脏组织中的鸭疫里默氏菌载菌量均在2 d达定殖高峰,载菌量多少按组织排序依次为脑>心>脾>肺>肝,按时间排序依次为2 d>3 d>1 d>5 d>9 d>14 d。     

鸭疫里默菌实验室诊断方法研究进展

鸭疫里默菌病是危害养鸭业的重大疾病之一,在临床初步诊断的基础上,实验室诊断必不可少。目前已报道的鸭疫里默菌实验室诊断方法主要有细菌的分离鉴定、琼脂扩散试验、凝集试验、荧光抗体试验、间接ELISA、PCR、间接免疫酶组化法等7种,文章对这些方法进行了综述。     

鸭疫里氏杆菌-大肠杆菌二联灭活疫苗的研制

从河北某肉鸭场的发病鸭中分离出鸭疫里氏杆菌（Riemerella.anatipestifer，RA）BJ-D-1株，对该菌株采用液体培养、固体培养及鸡坯培养等三种不同方法进行增菌培养，然后与大肠杆菌O1、O2、O78株及河北地方大肠杆菌流行株等的浓缩菌液以一定比例混合，制成油乳剂灭活苗。皮下免疫7日龄雏鸭0.5mL/只。在河北某发病肉鸭场及周围肉鸭场进行田间试验，效果良好。     

Goose haemorrhagic hepatitis caused by a new subtype duck hepatitis type 1 virus

Duck hepatitis type 1 virus (DHV-1) causes a fatal disease in ducklings but there is no report of DHV-1 isolation from goose. Recently, cases of a new disease in overfeeding geese were reported from China. The cases were characterized by haemorrhagic hepatitis lesions on liver after post mortem examinations. The flocks showed about 20-40% morbidity and less than 5% mortality. The histopathological lesions showed destroyed structure of hepatocytic tissue, severe vacuolation and necrosis of hepatocytes. Viral antigen could be detected by monoclonal antibody against duck hepatitis type 1 virus (DHV-1) in the cytoplasm of positive hepatocytes. PCR amplified viral sequences with primers specific for recent Korean-like duck hepatitis type 1 virus (DHV-1C). Alignment of the complete sequence demonstrated that the isolated JT strain from goose exhibiting 95.9% identity to DHV-1C AP-03337 strain, and only 75.3% to classical DHV-1 virus. 80% goslings developed haemorrhagic hepatitis after infection with JT strain. This is the first report on the involvement of a DHV-1 virus in goose.     

鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌混合感染的诊断

通过对患病鸭群7只病死雏鸭进行了剖检,无菌采取鸭心血、肝脏、脾脏等病变组织,进行病原分离、鉴定,分离到4株鸭疫里默氏杆菌和4株大肠杆菌。初步确定这起雏鸭死亡的原因为鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌混合感染所致。根据流行病学,临床症状,剖检变化,细菌分离培养、培养特性鉴定和生化试验,确诊为鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌混合感染症．制定防治措施。     

湖北部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

对湖北省部分地区鸭疫里氏杆菌(RA)进行分离鉴定.应用胰蛋白大豆琼脂(TSA)培养基的分离培养及染色试验、生化试验、PCR鉴定,得到86株RA.染色观察各地RA分离株的细菌形态一致,符合RA特征;生化试验显示86株RA的生理生化特征相似,基本符合RA特征;应用建立的PCR技术均可从这些菌株扩增到RA的特异性基因片段.通...     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定

从广州市郊区几个鸭场发病或死亡鸭的脑、心血、肝、脾等组织中分离到6株革兰氏阴性杆菌，经形态学检查、生化试验、动物实验等鉴定均为鸭疫里默氏杆菌。通过凝集试验和琼脂扩散试验鉴定：2株为鸭疫里默氏杆菌Ⅰ型，4株为鸭疫里默氏杆菌Ⅱ型。