不同类型CpG基序对细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究

为探究不同类型CpG基序对细粒棘球蚴（Echinococus granulosus）Eg95抗原的免疫增强作用,将pET-32a-3Eg95重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白pET-32a-3Eg95。将重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN混合制备基因工程亚单位疫苗样品,免疫小鼠。通过间接ELISA方法检测抗体水平,通过实时荧光定量PCR方法测定体外刺激试验后细胞因子的相对表达量,检测不同佐剂在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原免疫效果的增强作用。结果显示,诱导表达重组蛋白的大小约为56 ku,与理论值相符,用羊细粒棘球蚴阳性血清检测有特异性条带;pUC18-CpG组和CpG ODN组小鼠免疫后14、28、42 d的抗体平均水平（D_{450 nm}）分别为3.10、3.03、3.22和2.98、3.12、3.27,与Quli-A组抗体平均水平相比均差异显著（P<0.05）;CpG ODN组血清中抗体平均水平略高于pUC18-CpG组,但差异不显著（P>0.05）。重组蛋白刺激后pUC18-CpG组与CpG ODN组IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相对表达量分别为6.88、2.35、6.28和5.03、2.85、7.07,与Quli-A组相比差异均显著（P<0.05）。因此相对于常规佐剂Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原都有显著的免疫增强作用,CpG ODN的免疫增强作用略优于pUC18-CpG,二者均可作为免疫佐剂,增强现有包虫病基因工程疫苗抗原的免疫效果。     

CpG ODN对水貂免疫增强效果的研究

为获得对水貂具有免疫刺激活性的CpG ODN序列,设计合成了45种含不同CpG基序的DNA序列,应用MTS比色法测定合成CpG ODNs刺激水貂PBMC增殖的能力,结果有11条CpG ODN对水貂PBMC有刺激活性（SI＞2）;应用SI值大于5的6种CpG ODN分别与水貂伪狂犬灭活疫苗联合免疫水貂,免疫后经水貂血清抗伪狂犬中和抗体效价测定和水貂PBMC非特异性增殖效应检测,结果有3个CpG ODN序列对水貂具有较好免疫增强作用,分别是CpG-21(ATCGATTTGTCGTTATCGAT)、CpG-23(ATCGATGAACGTTAACGTTTC)和CpG-24(AACGTTCATCGATATCGATGT)。本研究获得3条对水貂具有较好免疫刺激活性的CpG ODN序列,可为水貂新型CpG佐剂的研究提供参考。     

人工合成免疫刺激CpG DNA联合鸡新城疫疫苗对SPF鸡免疫应答的影响

以鸡新城疫病毒为模式病毒，分别以不同浓度人工合成的免疫刺激序列CpG DNA联合鸡新城疫低毒力活疫苗免疫SPF新生小鸡，通过ELISA法检测鸡血清中抗-NDV抗体水平，并用MTT法检测淋巴细胞白介素-2诱生活性以及淋巴细胞增殖指数（SI），结果显示：不同浓度的CpGDNA均能显著提高仔鸡的特异性抗体滴度、淋巴细胞白介素-2诱生活性以及淋巴细胞增殖反应，证明CpGDNA能显著增强鸡对常规疫苗的免疫应答能力。     

CpG ODN对鸡新城疫LaSota活疫苗的免疫增强效应

将3种不同的未甲基化CpGODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后，经滴鼻和点眼免疫鸡，通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量，以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1β mRNA量，分析各CpGODN对新城疫LaSota活疫苗免疫效果的影响。结果表明，经2次免疫后，含GTCGTT核心基序的CpG ODN1组，鸡血清平均HI抗体效价最高达8．2log2、淋巴细胞刺激指数达9．836、NO分泌量达35．833μmol／L，分别比疫苗单独免疫组高出2个滴度（P〈0．05）、4．4（P〈0．01）、27．6μmol／L（P〈0．01）；含GACGTT核心基序的CpG ODN2组增强作用不明显．与疫苗单独免疫组无差异；而CpGODN3的免疫刺激活性由于受其侧翼序列的影响，作用明显减弱甚至丧失。对细胞因子的影响，CpGODN3组IFN-γ mRNA表达量稍高于CpG ODN1组，而其余细胞因子均以CpG ODN1组表达水平最高（P〈0．05）。由此证明CpG ODN1能显著增强鸡对新城疫LaSota活疫苗的体液和细胞免疫反应，可以作为高效的免疫增强剂。     

CpG DNA对猪免疫增强作用的研究现状

本文综述了一种新型的免疫激活剂CpG DNA的一般特点、作用及其机理、对猪免疫刺激活性及活性序列组成特点、用量、使用方法等。     

Th1/Th2型免疫反应相关基因在巨噬细胞RAW 264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时的表达谱研究

本研究旨在解析巨噬细胞RAW264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时其Th1、Th2型免疫反应相关基因的差异表达规律,为进一步揭示巨噬细胞抗细粒棘球绦虫原头蚴免疫调控机制奠定理论基础.将细粒棘球绦虫原头蚴和巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h,收集RAW264.7细胞,提取总RNA,构建cDNA文库,利用R...     

3种不同类型佐剂的猪圆环病毒2型亚单位灭活疫苗免疫效果的比较研究

为制备猪圆环病毒2型商品化亚单位疫苗选择良好的佐剂,对由水性佐剂GEL 01、白油佐剂以及氢氧化铝胶佐剂分别制备的3种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的免疫效果进行比较研究。本实验选取3～4周龄猪圆环病毒2型抗体阴性猪30头,根据试验疫苗接种情况分为6组,分别为:3种不同佐剂制备的亚单位疫苗(A组、B组和C组)、商品化疫苗(D组)以及空白对照组和攻毒对照组,然后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况、抗体水平以及攻毒保护情况。结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪圆环病毒2型亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应、能刺激机体产生良好的ELISA抗体水平和免疫效果,但水性佐剂GEL 01制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,综合抗体水平、免疫效果等因素,水性佐剂GEL 01制备的疫苗在临床使用上更具优势,为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。     

油脂类型和水平对肉鸡组织18S rRNA表达的影响

本试验旨在探究不同类型和水平的油脂对肉鸡肝脏、胸肌中18S rRNA表达的影响。试验选用240只1日龄科宝肉鸡母雏,随机分为8个组(分别在饲粮中添加2.50%、5.00%的亚麻油、玉米油、芝麻油和猪油),每个组6个重复,每个重复5只鸡,于42日龄分别从每个重复随机选取1只屠宰取样。结果表明:1)油脂类型和水平对肉鸡胸肌、肝脏中18S rRNA相对表达量影响极显著(P<0.01),且两者的交互作用对肝脏中18S rRNA相对表达量影响也极显著(P<0.01);2)与2.50%油脂水平相比,除5.00%亚麻油水平对肝脏中18S rRNA相对表达量影响不显著(P>0.05)以外,提高油脂水平(5.00%)可显著或极显著上调肉鸡胸肌、肝脏中18S rRNA相对表达量(P<0.05或P<0.01);3)在肉鸡胸肌、肝脏中,亚麻油组18S rRNA相对表达量不同程度地高于玉米油组、芝麻油组、猪油组(P<0.05或P>0.05)。研究表明,肉鸡肝脏和胸肌18S rRNA表达受饲粮添加油脂类型和水平的影响。     

固始鸡免疫器官指数的发育规律研究

为研究固始鸡免疫器官指数的发育规律,应用大体解剖学方法,经过SAS(6.12)软件对数据分析处理,结果表明,雄性和雌性固始鸡活体重、免疫器官重量和指数之间存在差异(P<0.01),但免疫器官生长发育规律相似;1周龄～20周龄内,前期固始鸡活体重和免疫器官重量均呈上升趋势,后期活体重仍增加,而免疫器官重量维持较平稳水平.随着固始鸡的生长发育,不同免疫器官指数总体而言均呈下降趋势,免疫器官生长速度小于增重速度.     

不同新城疫疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果比较

为探讨不同新城疫（ND）疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果,选用NDⅠ系活疫苗（CS2株）、Ⅳ系灭活疫苗（LaSota株）和重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）分别对三穗麻鸭进行免疫实验,检测疫苗最小免疫剂量、免疫鸭的抗体滴度和消长规律,以及病毒感染免疫鸭后的排毒情况。结果显示,活疫苗CS2株、灭活疫苗LaSota株、灭活疫苗A-Ⅶ株的最小免疫剂量分别为1.0 mL/只、0.5 mL/只和0.2 mL/只;3种疫苗2次免疫要高于1次免疫产生的抗体滴度,但各免疫组不同免疫次数鸭的抗体滴度均在第60天达到高峰,其中以灭活疫苗A-Ⅶ株1次或2次免疫诱发的抗体滴度最高（分别为7.5log2和8.1log2）,并且抗体持续期长,在免疫后第150天抗体水平仍能达到免疫保护要求;对免疫鸭的排毒检测发现,活疫苗CS2株免疫后的鸭持续排毒,灭活疫苗LaSota株免疫后的鸭排毒量少且时间短,而灭活疫苗A-Ⅶ株免疫后的鸭未检测到排毒。试验结果表明,重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）在免疫剂量、免疫次数、免疫鸭的抗体滴度和持续时间,以及抑制免疫鸭排毒方面均明显优于传统ND疫苗。     

日粮中添加植物提取物对肉仔鸡免疫机能的影响

选用250只健康AA肉雏随机分成5个处理组,分别饲喂基础日粮、基础日粮＋金霉素、基础日粮＋植物提取物（300 g/t）、基础日粮＋植物提取物（500 g/t）和基础日粮＋植物提取物（800 g/t）5种日粮,以研究不同浓度植物提取物对46日龄肉仔鸡脾脏指数、法氏囊指数、胸腺指数、T淋巴细胞百分比、淋巴细胞转化率、白细胞吞噬印度墨汁率等指标的影响。研究结果表明,提取物有提高肉仔鸡日增重、成活率及饲料报酬率的趋势,且不影响肉仔鸡的正常生长。日粮中添加不同浓度植物提取物能够增加免疫器官指数,具有促进巨噬细胞的吞噬功能,淋巴细胞（增殖）转化率显著增高,延长抗体水平持续时间,对肉鸡的体液免疫和细胞免疫均有明显促进作用。而在日粮中添加500 g/t的提取物比添加金霉素对仔鸡免疫力有更好的作用。     

日粮添加不同比例的中短链和长链脂肪酸对奶牛免疫功能的影响

为探讨不同比例的中短链和长链脂肪酸混合物对奶牛免疫功能的影响,试验选用72头产奶量、胎次及泌乳日龄相近的中国荷斯坦奶牛,按随机区组试验设计,分为对照组和5个处理组,对照组饲喂基础日粮,处理组在基础日粮上分别添加400 g/d 长链脂肪酸(LCFA,A组)、80 g/d中短链脂肪酸(SMCFA)+320 g/d LCFA(B组)、400 g/d 黄油(C组)、240 g/d SMCFA+160 g/d LCFA(D组)及400 g/d SMCFA(E组)。试验期为63 d,第1周为预试期,试验期最后1 d采集血液样品,用于测定血清中免疫球蛋白及细胞因子的含量。结果显示,日粮添加不同比例的中短链和长链脂肪酸对奶牛血清中免疫球蛋白M(IgM)及前列腺素(PGE₂)的含量没有显著影响(P＞0.05);A组免疫球蛋白A(IgA)的含量显著高于B、E组(P＜0.05),B、D组免疫球蛋白G(IgG)的含量显著高于其余4组(P＜0.05)。日粮中添加脂肪酸均能提高奶牛血清中IL-4及IL-10的含量,尤其是D组,增加效果极显著(P＜0.01)。因此,添加240 g/d SMCFA 和160 g/d LCFA更能提高泌乳中期奶牛的免疫性能。     

鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗对不同日龄雏鸡的免疫效力研究

为评估鸡新城疫(ND)-传染性支气管炎(IB)-传染性法氏囊病(IBD)三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体(HI Ab)、IB血凝抑制抗体(HI Ab)及IBD中和抗体(NA),并用传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒攻击。结果显示,7日龄SPF雏鸡免疫后21 d ND HI抗体、IB HI抗体及IBD中和抗体效价分别为7.9log2、6.9log2和14.1log2,SPF鸡日龄越大,抗体水平越高;28日龄SPF鸡免疫后3个月,0.3 mL免疫剂量组试验鸡ND HI、IB HI及IBD中和抗体效价分别达6.5log2、6.1log2和13.6log2,IBDV攻毒保护率均为100%(10/10);不同日龄普通雏鸡免疫效果与SPF鸡试验一致,抗体水平随鸡日龄增大而升高,IBD攻毒保护率也都达到100%(10/10)。试验结果证实,鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗可使7、14及21日龄SPF雏鸡和普通雏鸡产生良好的免疫力,对雏鸡的免疫期至少为3个月。     

鸡新城疫－传染性支气管炎－传染性法氏囊病三联灭活疫苗对不同日龄雏鸡的免疫效力研究

为评估鸡新城疫（ND）-传染性支气管炎（IB）-传染性法氏囊病（IBD）三联灭活疫苗对不同日龄和不同水平母源抗体雏鸡的免疫效力和持续期,本试验用该疫苗免疫7、14、21日龄SPF雏鸡和有母源抗体的普通雏鸡,免疫后采血测定ND血凝抑制抗体（HI Ab）、IB血凝抑制抗体（HI Ab）及IBD中和抗体（NA）,并用传染性法氏囊病病毒（IBDV）强毒攻击。结果显示,7日龄SPF雏鸡免疫后21 d ND HI抗体、IB HI抗体及IBD中和抗体效价分别为7.9log2、6.9log2和14.1log2,SPF鸡日龄越大,抗体水平越高;28日龄SPF鸡免疫后3个月,0.3 mL免疫剂量组试验鸡ND HI、IB HI及IBD中和抗体效价分别达6.5log2、6.1log2和13.6log2,IBDV攻毒保护率均为100%（10/10）;不同日龄普通雏鸡免疫效果与SPF鸡试验一致,抗体水平随鸡日龄增大而升高,IBD攻毒保护率也都达到100%（10/10）。试验结果证实,鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联灭活疫苗可使7、14及21日龄SPF雏鸡和普通雏鸡产生良好的免疫力,对雏鸡的免疫期至少为3个月。     

重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)免疫鸡抗体消长规律及免疫程序的初步研究

研究新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对种鸡和肉鸡的免疫原性,并对雏鸡母源抗体和免疫后的抗体进行动态观察,根据试验结果推荐该疫苗对鸡的免疫程序。用HI方法检测种鸡、肉鸡的母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄。结果表明种鸡的母源抗体约能维持10 d多;0.3 mL/羽首免后10 d HI抗体就可达到6.40 log2,3-5周达到高峰期,至免疫17周后(19周龄)HI抗体水平仍然维持在4.88 log2;19周龄时0.5 mL/羽进行二免,有效抗体能维持约20周;280日龄0.5 mL/羽三免后抗体水平均一,下降缓慢,至种鸡淘汰时(三免后29周)抗体水平仍能维持在5.32 log2。肉鸡母源抗体约能维持7d,10日龄时0.3 mL/羽免疫,有效抗体能维持到上市。新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对鸡的免疫原性确实。