环江香猪黏附素13基因多态性及其与仔猪腹泻的相关性分析

试验旨在对环江香猪仔猪腹泻抗性/易感的黏附素13基因（MUC13）单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）/单倍型与仔猪腹泻的相关性进行分析。试验采用高分辨率熔解曲线（high resolution melting,HRM）技术对93头环江香猪腹泻仔猪和95头健康对照仔猪进行基因分型,结合DNA测序对HRM检测结果进行验证,并通过SHEsis在线平台确定其单倍型。结果显示,环江香猪MUC13基因的G224A位等位基因分布频率在腹泻组和对照组间差异显著（P < 0.05）,GG、GA和GG+GA基因型分别与AA基因型相比差异均显著（P < 0.05）。A112G、T170C和G164C位点各基因型频率和等位基因频率在腹泻组和对照组之间差异均不显著（P > 0.05）,腹泻组与对照组E位点均为野生纯合基因型。单倍型Ⅹ（GTAC）在腹泻组的分布极显著高于对照组（P < 0.01）。因此,MUC13基因G224A位点和单倍型Ⅹ（GTAC）与环江香猪仔猪断奶前腹泻相关。     

香猪NRAMP1基因多态性与仔猪腹泻的研究

天然抗性巨噬蛋白1(natural resistance associated macrophage protein 1,NRAMP1)基因是与人、鼠的一些病原微生物(如分支杆菌中的沙门氏伤寒菌等)的易感性和抗性有关的重要候选基因。本研究利用PCR-RFLP技术,分析了香猪的NRAMP1基因第6内含子的NdeⅠ酶切位点的多态性;观测记录哺乳仔猪的腹泻情况,结果发现,NRAMP1基因的第6内含子的NdeⅠ酶切位点在各品种猪表现出丰富的多态性,该酶切位点的基因频率和基因型频率在各猪种中分布趋于一致,香猪不同品系基因型与腹泻指数统计分析结果显示,Ⅰ系、Ⅱ系差异不显著,11世代显著高于10世代。     

杜洛克猪HLCS基因多态位点与生长发育性状的相关性分析

本研究旨在明确羧化全酶合成酶（holocarboxylase synthetase,HLCS）基因突变与杜洛克猪生长发育性状的相关性。利用Illumina SNP60芯片测序结果研究HLCS基因的突变位点,分析突变位点的多态性信息、突变位点与生长发育性状的关联性及突变位点的单倍型。结果显示,杜洛克猪HLCS基因具有4个SNPs位点：Ssc13：200455646 T>C、Ssc13：200458655 G>C、Ssc13：200504530 G>T、Ssc13：200551864 T>G,均符合Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）,呈现中度多态性。关联分析结果发现,Ssc13：200455646 T>C位点TT基因型100 kg背膘、剩余采食量均显著高于TC和CC基因型（P<0.05）;Ssc13：200458655 G>C位点GG基因型个体100 kg背膘、剩余采食量均显著高于CG和CC基因型（P<0.05）;Ssc13：200504530 G>T位点GT基因型平均日采食量、平均日增重均显著高于TT基因型（P<0.05）,GT基因型个体100 kg日龄显著小于TT基因型（P<0.05）;Ssc13：200551864 T>G位点TG基因型平均日采食量、平均日增重均显著高于GG基因型（P<0.05）,TG基因型个体100 kg日龄显著小于GG基因型（P<0.05）;其余性状各位点不同基因型间无显著差异（P>0.05）。Ssc13：200455646 T>C和Ssc13：200458655 G>C位点呈现高度连锁,Ssc13：200504530 G>T与Ssc13：200551864 T>G位点呈现高度连锁。结果表明,HLCS基因4个SNPs位点的多态性与杜洛克猪的剩余采食量、平均日采食量、平均日增重、100 kg日龄和100 kg背膘均具有显著相关性,可为猪的生长发育遗传改良奠定基础。     

Differential Expression Analysis of MUC4 and MUC13 Genes Between Resistant and Sensitive Weaned Meishan Piglets to ETEC F18

MUC4 and MUC13 genes as important candidate genes for enterotoxigenic Escherichia coil (ETEC) F4 resistance,may play an important role in the process of against ETEC F18 infection in weaned piglets. In this study,ETEC F18-resistant and -sensitive weaned Meishan piglets were used,and the expression levels of MUC4 and MUC13 genes in 11 tissues (heart,liver,spleen,lung,kidney,stomach,muscle,thymus,lymph nodes,duodenum and jejunum) were determined by quantitative Real-time PCR. The results showed that MUC4 and MUC13 genes were broadly expressed with different expression levels in all the 11 tissues. In the thymus and lymph tissues,the expression of MUC4 gene in resistant piglets was significantly higher than that in sensitive piglets (P<0.05);In the lung tissue,theMUC13 gene expression level in resistant individuals was significantly higher than that in sensitive individuals (P<0.05),and in the intestinal tissues of duodenum and jejunum, the expression level of MUC13 gene was relatively higher in resistant individuals. Thus we speculated that the high expression of MUC4 gene in immune tissues and MUC13 gene in intestinal tissues might improve the immune ability of piglets,protect and lubricate the intestinal tract, and resist ETEC F18 infection.     

早期断奶仔猪营养性腹泻的分析及防治

仔猪腹泻是一种严重制约养猪业发展的疾病,其发生由应激、环境、营养等多种因素造成。本文主要从营养方面阐述了早期断奶仔猪发生腹泻的原因,并综合近年研究资料,论述了各种营养因素对仔猪营养性腹泻的改善作用,为研究合理的断奶仔猪日粮提供理论依据。     

北京黑猪MYH3和MYH13基因多态性与肉质性状的关联分析

【目的】 试验旨在研究肌球蛋白重链3（myosin heavy chain 3,MYH3）和肌球蛋白重链13（myosin heavy chain 13,MYH13）基因遗传变异对猪肉质性状的影响。【方法】 利用北京黑猪背最长肌样本进行肉质性状（肌内脂肪（intramuscular fat,IMF）、水分、滴水损失、酸碱度（pH）、肉色L^*值、肉色a^*值和肉色b^*值）表型数据的测定。利用PCR和Sanger测序技术对MYH3和MYH13基因启动子区和CDS区进行基因分型。将性别、场、日龄作为协变量,采用协方差分析,确定与猪肉质性状相关的SNPs,利用实时荧光定量PCR检测基因表达水平。【结果】 试验共筛选到9个SNPs,其中MYH3基因CDS区有1个错义突变（c.5782 G>C）与IMF显著相关（P<0.05）,且MYH3基因表达水平与IMF呈正相关;MYH13基因CDS区有4个SNPs,其中2个（c.1923 G>A、c.1308 G>A）与肉色a^*值显著相关,1个（c.963 G>A）与滴水损失显著相关,1个（c.237 G>T）与肉色L^*值显著相关（P<0.05）;MYH13基因启动子区有4个SNPs,其中2个（rs699287502、rs318639161）与肉色L^*值显著相关,2个（rs321315318、rs330770991）与滴水损失显著相关（P<0.05）,且MYH13基因表达水平与滴水损失呈负相关。【结论】 MYH3基因有1个SNP与IMF显著相关,且其基因表达水平与IMF呈正相关。MYH13基因中存在3个SNPs与滴水损失显著相关,且该基因启动子区2个SNPs基因表达水平与滴水损失呈负相关;3个SNPs与肉色L^*值显著相关;2个SNPs与肉色a^*值显著相关。以上SNPs均可作为影响北京黑猪肉质性状的候选基因功能位点。     

猪EPHA1基因多态性及其与产仔数的关联性分析

研究利用PCR-SSCP技术对大白、长白和杜洛克猪EPHA1基因外显子多态性及其与产仔数的关系进行了研究。结果表明:在第15外显子上检测到一个发生G→C颠换的突变位点,形成3种基因型。对于大白猪,3~6胎的GG型个体的产活仔数(NBA)比CC型个体高出1.66头(P<0.05);在所有胎次中,GG型个体的总产仔数(TNB)比CC型个体高出0.2头(P<0.01)。对于长白猪,第2胎GG型个体的TNB和NBA分别比CC型个体高出1.41头(P<0.05)和1.46头(P<0.05);所有胎次中,GC型个体TNB比CC型个体高出0.67头(P<0.05)。对于杜洛克猪,3种基因型个体的TNB和NBA差异不显著(P>0.05)。对于试验大白猪群体而言,该多态位点GG基因型可作为TNB性状的标记基因型。     

大白猪PTGS2基因外显子2多态性及其与繁殖性状的关联分析

试验旨在研究前列腺素内过氧化物合酶2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2）基因的单核苷酸多态性,并将其与大白猪的繁殖性状进行关联分析,为猪分子遗传标记提供依据。以美系及法系纯种大白猪基因组DNA为模板,构建DNA混合池,通过克隆测序比对,检测猪PTGS2基因的遗传变异;采用PCR-RFLP技术对多态性位点进行基因分型,并与目标性状进行关联分析。结果显示,在猪PTGS2基因外显子2上存在1个g.86A>G碱基突变,并具有Msp Ⅰ酶切位点多态性,且在大白猪群体中检测到AA、AG和GG 3种基因型;哈迪-温伯格平衡检验结果显示,在法系大白猪群体中,PTGS2基因g.86A>G多态性分布达到遗传平衡状态（P>0.05）。关联分析结果表明,在美系大白猪群体中,AA基因型初产母猪弱仔数显著少于AG基因型（P<0.05）,AA基因型经产母猪初生窝重显著高于AG基因型（P<0.05）;在法系大白猪群体中,GG基因型个体总产仔数、健仔数和初生窝重均高于AA和AG基因型,但未达到显著水平（P>0.05）。PTGS2基因外显子2 g.86A>G多态性位点显著影响初生窝重和弱仔数,可作为猪分子标记辅助选择育种的潜在位点。     

ITGB5和MUC13基因在产肠毒素大肠杆菌抗性和易感大白仔猪间的差异表达分析

为分析仔猪腹泻抗性候选基因在大白仔猪抗性和易感个体间的差异表达情况及组织表达特异性,实验利用荧光定量PCR技术检测整合素β5(ITGB5)基因和黏蛋白13(MUC13)基因在仔猪小肠、脾脏、肺脏、胸腺、肝脏和淋巴6种组织中的表达水平以及在产肠毒素大肠杆菌(ETEC F4)抗性和易感仔猪个体间的差异表达情况。结果表明:大白仔猪ITGB5基因在6种组织中均有一定的表达,在抗性个体小肠组织中的表达量低于易感个体(P>0.05);MUC13基因在小肠中高度表达,在其他组织中表达量较低,且抗性个体的表达量显著高于易感个体(P<0.05)。由此可知,小肠组织中ITGB5基因的低表达和MUC13基因的高表达可能有助于降低致病性大肠杆菌黏附到小肠上皮细胞上,进而实现对致病性大肠杆菌的抗性。ITGB5基因和MUC13基因可能与仔猪腹泻抗性存在密切关系,都可以作为抗性候选基因用于标记辅助选择,应用于抗腹泻仔猪的选育。     

猪SLA-DRA基因外显子2多态性及其与仔猪腹泻的关联分析

为探索SLA-DRA基因作为猪抗病育种分子标记的可能性,本研究采用PCR-SSCP和克隆测序方法对大白、长白和杜洛克共216头猪的SLA-DRA基因外显子2进行了多态性研究,分析了该基因与仔猪腹泻的关联性。结果,在SLA-DRA外显子2上检出了3个等位基因和6种基因型;6种基因型(AA、AB、BB、AC、BC和CC)在大白猪和长白猪中都存在,而在杜洛克猪中只检出4种基因型(AA、BB、AB和BC)。杜洛克猪与大白猪和长白猪间基因型分布均差异极显著(P<0.01);3个品种的基因型分布均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。最小二乘法分析表明,品种和性别对仔猪腹泻影响不显著(P>0.05),基因型与仔猪腹泻显著相关(P<0.05);AA和BB基因型个体腹泻评分的最小二乘均值均显著高于AC和CC基因型个体(P<0.05)。本研究表明,SLA-DRA基因不同基因型对仔猪腹泻有着重要的影响,可作为猪抗病育种应用中的一个潜在遗传标记。     

13/17罗伯逊易位猪POU1F1基因多态性与经济性状的相关分析

利用外周血淋巴细胞培养制备染色体标本,对13/17罗伯逊易位猪的3种杂交组合的394头后代猪进行分群;应用PCR-RFLP技术在POU1 F1基因的扩增片段(1746 bp)中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点A(3种基因型);应用PCR-SSCP技术检测1个POU1 F1基因第5内含子上的突变E(2种基因型),同时结合生长和胴体品质测定记录研究基因型对生产性状的遗传效应。结果表明,位点A的基因型对生长有显著影响(P<0.05),位点E基因型对生长和眼肌面积有显著影响(P<0.05)。研究结果初步揭示POU1 F1多态性与生长、眼肌面积等存在相关,推测POU1 F1多态性可作为罗伯逊易位杂合优势遗传机制的一种分子水平上的解释。     

北京黑猪HoxB簇基因多态性与脊椎数及胴体性状的关联分析

旨在对北京黑猪HoxB簇9个基因(HoxB1-7、9和13)的多态性与脊椎数和胴体性状(胴体长、胴体直长、胴体斜长及胴体重)进行关联分析。本研究提取251头220日龄的健康北京黑猪耳组织DNA,对HoxB簇的9个基因通过引物设计、聚合酶链式反应(PCR)技术、Sanger测序技术等对SNPs进行基因分型,并计算变异位点基因型频率以及等位基因频率分布,并与脊椎数和胴体性状进行关联分析。结果,本试验共筛选到4个基因共12个非编码区的(UTR)SNPs,包括HoxB2基因的1个5′UTR突变、HoxB5基因的2个3′UTR突变、HoxB9基因的2个3′UTR突变以及HoxB13基因的7个3′UTR突变。将12个SNPs分别与脊椎数和胴体性状使用Duncan′s多重检验统计分析发现,HoxB2基因的1个5′UTR突变(c.40 C>T)、HoxB5基因的2个3′UTR突变(c.1766 A>G、c.1767 A>G)均与性状关联不显著(P>0.05);而HoxB9基因中的1个3′UTR突变(c.2743 C>T)与胴体性状关联显著(P<0.05),HoxB1...     

猪Leptin基因多态性及其与产仔性状的相关性分析

试验旨在探究Leptin基因对猪产仔性状的影响,为其新品种持续选育提供遗传学依据。参考GenBank发布的猪Leptin基因DNA序列（登录号:U66254、AF026976）设计3对引物,采用PCR-SSCP技术分析Leptin基因在苏姜猪和姜曲海猪中的单核苷酸多态性（SNP）,并用统计学方法分析基因座多态性与产仔性状的相关性。结果发现,Leptin基因在苏姜猪、姜曲海猪群体中均具有多态性,检测到3种基因型:AA、AB和BB;测序结果发现,编码区第3 469位碱基处发生单碱基突变（T3469C）,为同义突变。χ²适合性检验显示,2个猪种Leptin基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）。多态信息含量（PIC）分析显示,苏姜猪为中度多态,姜曲海猪为低度多态。Leptin基因型与产仔性状关联分析显示,不同基因型间产仔性状差异不显著（P>0.05）,但T3469C位点AB基因型平均产仔数较AA和BB基因型高,初步推断Leptin基因T3469C位点可能是影响猪产仔性状潜在的遗传标记,建议做进一步的研究。     

The Association Analysis Between the SNPs of Leptin Gene and Litter Size Trait in Pigs

The research was aimed to analyze the association of Leptingene and breed traits on pigs. Three pairs of primers were designed which based on DNA sequence of pig Leptin gene (GenBank accession No.U66254, AF026976),the single nucleotide polymorphisms (SNPs) of Leptin gene were detected by PCR-SSCP in Sujiang and Jiangquhai pigs. The results showed that three genotypes of AA,AB and BB were identified, and the mutation (T3469C) in CDS of Leptin gene was found,but amino acid change weren't happened. The Chi-square test results showed that the Leptin genotype distribution of Sujiang and Jiangquhai pigs was in Hardy-Weinberg equilibrium (P>0.05). The polymorphism information content (PIC) were moderate polymorphism in Sujiang pigs,and low polymorphism in Jiangquhai pigs. The statistic analysis results showed that there were no significant association between the SNP of Leptin genotype and litter size trait(P>0.05). But the average litter size of T3469C site AB genotype was higher than AA and BB genotypes, it was concluded that the T3469C polymorphism of Leptingene might be the genetic marker which potentially affected pig breed traits.     

宁乡猪FABPs、SLC13A5和NR1H4基因多态性及其与IMF含量的关联分析

旨在研究宁乡猪FABPs、SLC13A5和NR1H4基因的多态性及其与肌内脂肪（IMF）含量的关联性。本试验采用PCR-RFLP和Sanger测序的方法对172头宁乡阉公猪FABPs、SLC13A5和NR1H4基因的多态性进行检测,并探究多态性与宁乡猪IMF含量的关联性。结果表明,宁乡猪H-FABP-Hinf Ⅰ酶切位点存在多态性,其中Hh基因型个体的IMF含量最高,与HH、hh基因型个体的IMF含量差异极显著（P<0.01）;H-FABP-Hae Ⅲ酶切只检测到DD和Dd两种基因型,Dd基因型个体的IMF含量极显著高于DD基因型个体（P<0.01）;H-FABP基因的Hinf Ⅰ和Hae Ⅲ多态性位点共形成3种单倍型和5种单倍型组合,其中单倍型组合HD/hd个体具有最佳的IMF含量。H-FABP的Msp I酶切结果及A-FABP基因测序结果显示,宁乡猪不存在多态现象;SLC13A5基因多态性位点g.50705299T/C和NR1H4基因多态性位点g.83607915G/A处不同基因型间IMF含量的差异均不显著（P>0.05）。综上所述,H-FABP基因Hinf Ⅰ和Hae Ⅲ酶切位点多态性与宁乡猪IMF含量显著关联,其形成的单倍型组合HD/hd的IMF含量最高。以上结果可为宁乡猪IMF含量性状的早期分子选育提供参考。     

巴马小型猪动物模型在医学领域的研究进展

巴马小型猪是中国原产地闭锁繁殖的优质品种,具有遗传稳定性、理想的毛色分布、体型小、多产性、饲养要求低、抗病力强等优势,且在生理学、解剖结构、药物代谢、生化指标和疾病发生机制等方面与人类相似,已用于心血管、皮肤整形、内分泌及代谢、消化、口腔医学、异种移植、中医、麻醉学、神经系统等广泛医学领域的研究,建立了心肌缺血、冠脉微栓塞、卵圆孔未闭、动脉粥样硬化、皮肤创伤、经皮给药、代谢综合征、糖尿病及其并发症、梗阻性黄疸、慢性胰腺炎、肝硬化、肝脏射频消融、牙周组织炎症、下颌骨缺损、异种器官/细胞移植、中医征候、手术麻醉、脑缺血、支架植入、休克等一系列类似于人类疾病的动物模型,表明巴马小型猪作为理想的试验动物在生物医学研究中具有广阔的应用前景。作者综述了巴马小型猪作为试验动物在各医学领域的应用进展,了解现有巴马小型猪疾病模型的种类、构建方法及病理特征,有助于进一步探索具体的病因、发病机制、并发症和防制手段等,为拓展研究范围、提高医学水平奠定了科学基础。     

Research Progress on Animal Models of Bama Miniature Pigs in the Field of Medicine

Bama miniature pigs, which are local high-quality species of China, have the advantages of genetic stability, ideal hair distribution, microsomatia, prolificacy, low fodder demand, strong disease resistance, and they are similar to human beings in aspects of physiology, anatomical structure, drug metabolism, biochemical indicators, disease mechanism, etc. Bama miniature pigs have been used in the wide fields of medical research, such as cardiovascular system, skin plastic, endocrine and metabolism, digestive system, oral medicine, heterograft, Chinese medicine, anesthesiology, nervous system, etc., and been applied to establish the animal models which are similar to human diseases, such as myocardial ischemia, coronary micro-embolization, atrial septal defect, atherosclerosis, skin injury, transdermal drug, metabolic syndrome, diabetes mellitus and complications, obstructive jaundice, chronic pancreatitis, liver cirrhosis, liver radiofrequency ablation, periodontal tissue inflammation, mandibular defect, heterogeneous organ/cell transplantation, syndrome of Chinese medicine, anesthesia, cerebral ischemia, stent implantation, shock, etc. Bama miniature pigs, as an ideal experimental animal, have broad application prospects in biomedical research.In this article,we mainly summarized the progress of Bama miniature pigs in the field of medicine, to understand the types, construction methods and pathological characteristics of Bama miniature pigs disease models, which contribute to further explore the specific etiology, pathogenesis, complications, prevention and control measures, etc., and laid the scientific foundation for expanding the research scope and improving the medical level.     

长白种猪抗腹泻后代选育探究

为探索利用现代生物技术培育种猪抗腹泻专门化品系,采长白种猪耳组织样品27份,送江西农业大学动物生物技术国家重点实验室培育基地进行抗腹泻基因检测,检测结果为：腹泻抗性有利基因GG型个体比例占40.74%（11/27）,G的基因频率为0.67,A的基因频率为0.33。将作过基因检测的种猪按照不同基因型进行选配,分别为对照组（GG×GG）、试验1组（GG×GA）、试验2组（GA×GA）,观察、统计、比较不同组合所产仔猪在断奶前的腹泻发生率、腹泻死亡率、断奶成活率等指标。试验结果表明：1）对照组（GG×GG）哺乳仔猪腹泻发生率3.08%（2/65）,哺乳仔猪腹泻死亡率0（0/65）,30日龄断奶仔猪成活率98.46%（64/65）,这3个指标均与试验1组、试验2组差异显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）;2）试验1组（GG×GA）后代腹泻发生率20.75%（11/53）与试验2组（GA×GA）后代腹泻发生率40.91%（18/44）差异显著（P＜0.05）,这可能与试验1组的选配公猪是抗腹泻基因型（GG）个体有关;试验1组与试验2组腹泻死亡率差异极显著（P＜0.01）,断奶成活率差异不显著（P＞0.05）;3）携带腹泻抗性有利基因GG型比例高的后代,哺乳仔猪腹泻率和腹泻死亡率低,断奶仔猪成活率高,表现出较强的抗腹泻力,在种猪世代选育中,加大GG纯合抗性个体的选留比例,最终可以建立长白种猪抗K88（F4）腹泻专门化品系。     

Polymorphism of IGFBP2 Gene and Its Association with Meat Quality Traits in Pigs

This study was aimed to analyze the genetic variation of insulin-like growth factor binding protein 2 (IGFBP2) gene effect on meat quality traits in pigs. A pair of primer was designed,which based on DNA sequence of IGFBP2 gene (GenBank accession No.:BV727778). The genetic polymorphism of IGFBP2 gene was detected by PCR-RFLP in Sujiang pig, Jiangquhai pig and Landrace pig, and the association between IGFBP2 gene polymorphism and meat quality traits in three pig breeds was analyzed. The results showed that three genotypes (AA, AB and BB) were detected. The Chi-square test results showed that the genotype distribution of three pig breeds was in Hardy-Weinberg equilibrium (P > 0.05). The polymorphism information content (PIC) were moderately polymorphic in three pig breeds. According to the association analysis of different genotypes, significant difference was found in color value, intramuscular fat content and marbling, the color value (except for Jianquhai pig) and intramuscular fat content of AA genotype were significantly higher than AB and BB genotypes (P < 0.05), the marbling of AA and AB genotypes was significantly higher than BB genotype (P < 0.05). In conclusion,the polymorphism of IGFBP2 gene intron 3 had significant effects on meat quality traits, and was candidate gene for the potential impact on meat quality traits of pigs.