枯草芽孢杆菌发酵米糠制备活性肽及其抗氧化性评价

[目的]研究枯草芽孢杆菌发酵米糠中蛋白多肽的水解度和抗氧化活性,为米糠的高值化综合利用提供技术参考。[方法]以枯草芽孢杆菌为菌种,研究米糠发酵制备活性肽的条件,并对活性肽的抗氧化活性进行评价。[结果]当枯草芽孢杆菌接种量5%、发酵时间48 h、发酵温度36℃、p H 8时,米糠发酵液中水解度较高,达到了21.74%。枯草芽孢杆菌发酵制备的米糠活性肽具有较强的清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的能力。此外,米糠活性肽分子量主要分布在100~5 000 Da,富含天冬氨酸和谷氨酸,并包含了6种人体必需氨基酸。[结论]枯草芽孢杆菌发酵具有提高米糠功能特性的潜力,可为米糠的高值化利用提供参考。     

寒地水稻病害生防菌株L1的鉴定及抑菌机理研究

本研究从寒地水稻根际筛选并鉴定了1株生防细菌,初步命名为芽孢杆菌L1,芽孢杆菌L1发酵培养5 d时发酵液中具有抑菌活性的次生代谢产物对水稻稻瘟病菌及纹枯病菌菌丝生长抑制率都达到最高,分别达74.57%和83.23%,随时间延长抑菌效果不再增加;芽孢杆菌L1的发酵液用硫酸铵梯度沉淀法提取粗蛋白,7个梯度下的粗蛋白对两种菌菌丝均具有抑菌作用,但对稻瘟病菌起主要抑菌作用的蛋白在硫酸铵饱和度50%～60%下沉淀,而对水稻纹枯病菌则在60%～70%,说明芽孢杆菌L1分泌对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌起主要抑菌活性的蛋白可能不是同一类。     

拮抗细菌EBS05生长曲线及粗提物抑菌活性测定

为探明枯草芽孢杆菌EBS05的生长曲线及其菌液粗提物的抑菌活性,特开展本试验。通过测定D600值,初步构建EBS05的生长曲线;并分别采用盐酸和40%硫酸铵对发酵液中的抑菌物质进行沉淀粗提;用对峙培养法测定了粗提物的抑菌活性,用生长效率法测定了EBS05粗提取物对黄瓜灰霉菌、西瓜炭疽菌、黄瓜枯萎菌、小麦赤霉菌和小麦纹枯菌的抑菌活性。结果表明,在NYD培养液中培养72 h后,EBS05菌体数量最大,此时抑菌活性也最强;用0.1 mol·L-1盐酸调节菌液p H至2.0,或用40%硫酸铵都能够有效沉淀出发酵液中的抑菌物质,且沉淀抑菌活性与发酵原液相当;EBS05粗提物对12种植物病原菌均具有一定的抑菌活性。总体来看,枯草芽孢杆菌EBS05是一种很有发展前景的生防微生物资源。     

小麦白粉病拮抗细菌PE4培养条件的初步研究

拮抗细菌PE4是从土壤中分离筛选到的一株对小麦白粉病有抑制作用的芽孢杆菌。对该菌的培养条件进行了研究,结果表明:温度在24~28℃,pH值为7,装液量为30 ml,接菌量为30%,发酵时间为48 h时抗菌物质的抑菌活性最高。     

解淀粉芽孢杆菌B15产脂肽的分离鉴定及抑菌机理

从葡萄表皮分离获得1株对霉菌具有明显抑制作用的解淀粉芽孢杆菌B15,对其发酵液经过酸沉、Sephadex LH-20层析柱,对抑菌脂肽的特性进行研究。结果发现,该菌株产脂肽对葡萄灰霉病菌有较好的抑制效果,60~100℃处理或p H值为2~10的脂肽对灰霉病菌的抑菌活性几乎没有影响;脂肽有效最低抑菌浓度为0.017 mg/m L。经高效液相色谱法(HPLC)和质谱分析发现,解淀粉芽孢杆菌B15产脂肽主要活性成分为iturin A、fengycin。     

大豆根腐病拮抗菌枯草芽孢杆菌8-32抗菌物质性质的初步研究

对致病菌—尖孢镰刀菌(Fusrium oxysporum)具有较强拮抗作用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)8-32产生的理化性质进行了初步研究。结果表明,该抗菌物质80℃处理30 min,拮抗活性仍保持在90.00%,100℃以上会完全丧失活性;在p H 7.0~11.0范围内抑菌活性较稳定,最适p H为8.0;高浓度(25mmol/L)EDTA使其拮抗活性降低62%;该抗菌物质对Cu2+、Fe3+敏感,对蛋白酶K不敏感。枯草芽孢杆菌8-32产生的抗菌物质具有一定的耐热、耐碱(p H 11.0)、对蛋白酶不敏感等特性。     

拮抗旱柳枯萎病菌YQT13菌株发酵条件和抑菌稳定性

从鄂尔多斯伊金霍洛旗旱柳枯萎病疫区采集的土样中分离获得对该病原菌(成团泛氏菌Pantoea agglomerans)生长有抑制作用的菌株YQT13(米根霉Rhizopus oryzae)。通过平板打孔对峙方法对该菌株进行最佳培养基筛选、最适培养条件优化及发酵液稳定性研究。结果表明:最佳培养条件为葡萄糖40 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、初始p H值6.2、摇培速度160 r·min-1、培养温度35℃,其发酵原液抑菌直径(14.2±0.3)mm。浓缩作用能有效提高发酵液抑菌效果,发酵液于121℃灭菌30 min或-80~0℃保存20 d抑菌活性几乎不变,但光稳定性较差;p H值3.0保存24 h抑菌活性不变,随着p H值增大抑菌直径减小,p H≥10.0保存24 h会完全失活。     

具抑菌活性乳酸菌筛选及抑菌活性物质分析

以大肠杆菌O157∶H7为指示菌,采用spot-on-lawn法从食源性乳酸菌菌种库中筛选获得2株高抑菌活性乳酸菌,基于16S rRNA基因序列分析,分别鉴定为戊糖片球菌和发酵乳杆菌。利用改良牛津杯法测定2株乳酸菌发酵浓缩液对常见食源性病原菌的抑菌谱,并分析蛋白酶K、pH值、温度对抑菌物质活性的影响,结果发现2菌株均能显著抑制大肠杆菌和李斯特菌,其中戊糖片球菌发酵液具有更明显广谱抑菌效果;发酵液抑菌活性均受pH值影响,戊糖片球菌发酵液对蛋白酶、热敏感,发酵乳杆菌发酵液对蛋白酶、热不敏感。研究结果表明,戊糖片球菌发酵液抑菌活性物质有多肽(蛋白)和有机酸,发酵乳杆菌来源的抑菌物质化学成分是一些具有热稳定性的有机酸。该研究获得乳酸菌可以用于食品发酵和防腐领域,且为抑菌物质分离、鉴定和抑菌机制研究奠定基础。     

一株短短芽孢杆菌X23培养基优化及其抑菌活性研究

通过平板对峙培养试验发现短短芽孢杆菌X23对细菌、真菌、卵菌等多种植物病原菌都有拮抗作用,在NB培养基基础上通过单因素变量法进行优化,并对发酵液稳定性进行研究。结果表明:当培养基中牛肉膏1 g/L,蛋白胨5 g/L,葡萄糖10 g/L时,发酵液抑菌效果最好。60和70℃加热处理1 h的发酵液抑菌活性不变,80℃以上抑菌活性下降,100℃以上活性丧失;不同pH值中过夜处理,抑菌活性不降低;紫外光照2~8h抑菌活性不变,10 h以上活性下降。试验证明抑菌活性物质具有良好的耐热性,耐酸碱性以及紫外稳定性。     

5株芽孢杆菌的分离鉴定、拮抗性试验与抑菌效价测定

通过对采集样品中细菌的分离与纯化,获得5株芽孢杆菌,经纯化培养后观察其个体和群体形态特征,并进行了16项生理生化特征鉴定。结果表明,L1为地衣芽孢杆菌、L2为蜡样芽孢杆菌、L3为短小芽孢杆菌、L4为蜡样芽孢杆菌、L5为蜡样芽孢杆菌;通过对5株指示菌的拮抗试验,确定了它们的抑菌图谱;从中挑选出拮抗性最强的两株菌,采用平板琼脂扩散法,测定了其发酵液的抑菌效价。在30℃,pH7.0,150r/min的条件下,恒温振荡培养24h,测其发酵液的抑菌效价:L1、L2菌株的发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌效价分别2000IU/ml、1000IU/ml;对枯草芽孢杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、1000IU/ml;对大肠杆菌的抑菌效价分别1500IU/ml、500IU/ml。     

小麦赤霉病拮抗菌P72抗菌物质的分离纯化和性质研究

[目的]研究小麦赤霉病拮抗菌P72的抑菌活性及稳定性。[方法]将Bacillus subtilisP72接种于发酵培养液中,接种量5%,28℃摇床培养48 h后,8 000 r/min,离心10 min取菌株发酵离心所得上清液进行分离纯化、遗传稳定性、热稳定性及酸碱稳定性测定。[结果]P72菌株发酵上清液经过盐析、透析后进行DEAE-52离子交换层析,用0.5 mol/LNaCl溶液洗脱的蛋白对小麦赤霉病菌的拮抗能力最强。SDS-PAGE电泳显示具有抗菌作用的蛋白分子量约为40 kD。经过稳定性的试验测定,该抗菌物质的拮抗活性具有遗传稳定性,在60℃有较高的稳定性,无菌液对酸具有稳定性,在碱性溶液中不具有稳定性。[结论]小麦赤霉病拮抗菌P72对小麦赤霉病菌的拮抗能力较强,抗菌活性较稳定,且热稳定性较好,有广阔的开发前景。     

青藏高原云杉针叶水提物抑菌作用研究

研究青藏高原若尔盖云杉针叶水提物(NAEPA)的抗菌作用并初步分析其活性成分。NAEPA抗菌活性显著,对供试六种常见的革兰氏阳性和革兰氏阴性病原菌都有较强的抑菌作用和杀菌作用,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为3.8~15 mg/mL和7.5~30 mg/mL。抑菌物质在酸性环境中活性最强,对中性和碱性环境敏感;对121℃高温比较稳定。GC-MS分析表明,有机酸是NAEPA的主要成分;苯甲酸、间羟基苯甲酸、邻苯二酚、角鲨烯和桃金娘烯醇是主要抑菌物质。NAEPA中还含有抗氧化、降血脂以及抗血栓成分。NAEPA具有有效的抑菌物质和各种保健成分,是一种可应用于食品和饲料工业的潜在天然植物防腐剂资源。     

青藏高原云杉针叶水提物抑菌作用研究

研究青藏高原若尔盖云杉针叶水提物(NAEPA)的抗菌作用并初步分析其活性成分。NAEPA抗菌活性显著,对供试6种常见的革兰氏阳性和革兰氏阴性病原菌都有较强的抑菌作用和杀菌作用,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为3.8～15 mg/mL和7.5～30 mg/mL。抑菌物质在酸性环境中活性最强,对中性和碱性环境敏感;对121℃高温比较稳定。GC-MS分析表明,有机酸是NAEPA的主要成分;苯甲酸、间羟基苯甲酸、邻苯二酚、角鲨烯和桃金娘烯醇是主要抑菌物质。NAEPA中还含有抗氧化、降血脂以及抗血栓成分。NAEPA具有有效的抑菌物质和各种保健成分,是一种可应用于食品和饲料工业的潜在天然植物防腐剂资源。     

枯草芽孢杆菌Y-3生长特性及抗性研究

[目的]为枯草芽孢杆菌Y-3规模化发酵和降低成本提供理论依据。[方法]以分离的枯草芽孢杆菌Y-3为研究对象,对其生长特性、耐热性、耐酸、耐胆盐以及抗菌性进行研究。[结果]枯草芽孢杆菌Y．3培养14h生物活性量达到最高。初始pH6．3-8．0、培养温度30～37℃、装液量为20—100ml枯草芽孢杆菌Y-3均生长较好。枯草芽孢杆菌Y-3热力致死曲线线性方程为：y=-4．3365x＋435．58。分别在80、90℃热接触30s。存活率为97．45％和95．93％;在pH2—4酸性环境中作用3h后存活率超过73％;在猪胆盐浓度为0．5％以下的存活率超过80％。培养枯草芽孢杆菌Y-3产生抗菌活性效果的最佳条件为：初始pH7,温度25℃、装液量50ml,最佳试验条件下的抑菌圈为3．09cm。[结论]枯草芽孢杆菌Y-3能满足发酵饲料菌种要求。     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取、大孔吸附树脂吸附、硅胶层析和制备型高效液相色谱（HPLC）等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH 2.0～10.0、100℃和紫外照射24 h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供理论依据。     

轮纹大茎点菌葡糖淀粉酶部分酶学性质研究

轮纹大茎点菌在液体培养条件下产葡糖淀粉酶酶活很低,而在固态培养条件下酶活相对较高。对粗酶液中葡糖淀粉酶的部分酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为50℃,30~50℃之间有较高活性;40℃以下稳定,50℃保温1 h酶活性损失60%以上。酶的最适pH为8.0,在pH 7.0~11.0之间有较高的酶活性:pH 5.0以下酶不稳定,活性迅速丧失,5.0~10.0之间酶相对稳定。K+、Fe2+、Ca2+对酶的活性基本没有影响,而Cu2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Na+对酶的催化活性有激活作用,其中Mn2+激活作用最为强烈。     

具抗菌活性的红树林细菌的分离筛选

从广西山口红树林保护区采集的样品中分离得到32株细菌,以金黄葡萄球菌为指示菌初筛得到7株细菌具有抗菌活性,同时检测它们对其他4株指示菌的抗菌情况,结果发现SK-01对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉均有明显的抗菌活性。选取SK-01进行初步研究,结果发现SK-01在3号培养基、pH值7.0、盐浓度0的条件下生长最好;在1号培养基、pH值7.0、培养时间48 h、盐浓度1%的条件下产活性物质效果最好;对SK-01进行传代试验,结果显示SK-01具有良好的遗传稳定性,可以进行进一步的开发和利用。     

产几丁质酶细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

采用胶体几丁质平板产生透明圈法,从竹林附近的土壤中分离得到一株高产几丁质酶的优良菌株,以胶体几丁质为反应底物,对其所产的几丁质酶粗酶性质进行了初步研究。结果表明,该酶最适p H 7.5,在p H 6.5~9.5的缓冲液中放置12 h后,残余酶活仍在60%以上,在p H 7.0~8.5的缓冲液中残余酶活仍在80%以上,说明该酶在中性和碱性条件下具有较好的稳定性;该酶在30℃时酶活最高,在低于60℃的处理条件下残余酶活仍在80%以上,且80℃处理后仍有37%的残余酶活,说明该酶的热稳定性较好;配制蟹壳培养基发酵该菌,发现该菌能直接降解蟹壳产生壳寡糖,且每克蟹壳降解后可产生5.3 mg还原糖。通过16S r DNA基因序列比对,鉴定该菌为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究(英文)

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取,大孔吸附树脂吸附,硅胶层析和制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH2.0-pH10.0、100℃和紫外照射24h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供了理论依据。     

抗生素S-A稳定性研究

对抗生素S-A的热稳定性、酸碱稳定性、光稳定性和紫外稳定性进行了研究.结果表明,该抗生素对光照、紫外照射稳定性好,对热稳定性较好,60℃加热10min其活性比率为83.1%;对酸碱较为敏感,pH值为6时,活性比率最大,为77.6%.