雌激素对奶牛输卵管组织COX-1和COX-2表达的影响

试验旨在阐明雌激素(E₂)对体外培养的奶牛输卵管组织中环氧合酶-1(cyclooxygenase-1,COX-1)与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达的影响。分离培养奶牛输卵管组织,用不同浓度的E₂作用于奶牛输卵管组织,采用实时荧光定量PCR与Western blotting检测COX-1与COX-2 mRNA和蛋白的表达量。结果表明,E₂作用浓度为10^-11 mol/L时奶牛输卵管组织中的COX-1与COX-2 mRNA相对表达量达到高峰;E₂作用时间为8 h时COX-1 mRNA的相对表达量达到高峰,E₂作用时间为2 h时COX-2 mRNA的相对表达量达到高峰;浓度为10^-11 mol/L的E₂作用不同时间后,COX-1蛋白的相对表达量在8~48 h显著升高;没有检测到COX-2蛋白的表达。     

前列腺素E2和F2α对LPS刺激后奶牛子宫内膜上皮细胞COX-1和COX-2表达的影响

试验旨在阐明前列腺素E₂（prostaglandin E₂,PGE₂）和F_2α（prostaglandin F_2α,PGF_2α）对体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞中环氧合酶-1（cyclooxygenase-1,COX-1））与环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）表达的影响。培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞和传代细胞,第4代细胞以1×10⁶个/孔接种于6孔板,以10^-7mol/L PGE₂和PGF_2α分别预处理细胞24 h,以100 ng/mL细菌脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激细胞4、8和12 h后分别提取RNA和总蛋白质,采用实时荧光定量PCR与Western blotting等技术检测COX-1与COX-2 mRNA和蛋白质的表达量。结果表明,与对照组相比,COX-1 mRNA表达量在PGE₂单独作用4、8和12 h后显著上调（P<0.05）;COX-2 mRNA表达量在PGE₂单独作用4和12 h后显著上调（P<0.05）,PGE₂单独处理使COX-1、COX-2蛋白表达量均显著上调（P<0.05）。与对照组相比,LPS刺激8和12 h时COX-1 mRNA表达量显著下调（P<0.05）,LPS刺激后COX-1蛋白表达量无显著变化（P>0.05）;LPS刺激后4、8和12 h时COX-2 mRNA表达量显著上调（P<0.05）,LPS刺激后COX-2蛋白表达量显著上调（P<0.05）。与LPS单独处理组相比,LPS+PGE₂处理组在8和12 h时COX-1和COX-2 mRNA表达量均显著上调（P<0.05）,同时COX-1和COX-2蛋白表达量也显著上调（P<0.05）。PGF_2α在LPS未刺激和刺激后对COX-1和COX-2 mRNA的表达无显著影响（P>0.05）,仅在PGF_2α单独处理8和12 h后COX-1 mRNA表达量上调（P<0.05）。两种激素联合处理与各自单独处理及LPS单独刺激相比,对COX-1和COX-2 mRNA表达具有一定的协同诱导作用。     

山豆根多糖对猪圆环病毒Ⅱ型感染猪肺泡巨噬细胞炎性因子水平的影响

试验旨在研究山豆根多糖（SSP）对猪肺泡巨噬细胞3D4/2感染猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine circovirus virus Ⅱ type,PCV2）后炎性因子水平的影响。本试验设空白对照组、PCV2感染组、脂多糖（LPS）对照组和3种浓度（100、200和400 μg/mL）的山豆根多糖组,采用PCV2体外感染猪肺泡巨噬细胞,在培养液中分别加入100、200和400 μg/mL山豆根多糖培养24 h后收集样品,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-8（IL-8）水平和胞内环氧合酶-1（COX-1）、环氧合酶-2（COX-2）的酶活性,实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、COX-2基因及其蛋白表达。结果显示,PCV2感染猪肺泡巨噬细胞后极显著提高了MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性（P<0.01）,iNOS、COX-2 mRNA和蛋白表达水平均极显著提升（P<0.01）;100、200、400 μg/mL山豆根多糖处理后,3D4/2细胞MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性均显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,其中400 μg/mL山豆根多糖处理后效果最显著,细胞内iNOS、COX-2基因mRNA表达水平同样显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）;100、200、400 μg/mL山豆根多糖处理后,显著或极显著抑制了由PCV2诱导的iNOS蛋白表达量的增加（P<0.05;P<0.01）,经200、400 μg/mL山豆根多糖处理后显著抑制COX-2蛋白表达量的增加,400 μg/mL山豆根多糖处理效果最佳。综上所述,山豆根多糖可在一定程度上抑制PCV2感染所引起的促炎症因子mRNA表达的升高及其蛋白的表达,起到一定的缓解炎症的作用。     

前列腺素D2与F2α对绵羊黄体退化的影响及其机理研究

旨在研究前列腺素（prostaglandins,PGs）D₂与F_2α对绵羊黄体（corpus luteum,CL）组织形态、生殖激素及其关键基因与受体表达的影响,并解析其在黄体退化中的相互关系及机理,为保证母畜连续性繁育提供新的理论依据。将16只哈萨克绵羊随机分成4组,在发情周期的黄体期分别子宫肌内注射PGD₂、PGF_2α、PGD₂+PGF_2α及等量生理盐水（对照组）,采用HE染色结合物理拍照对比处理前后黄体组织形态变化,ELISA法检测外周血清中P₄、E₂、PGD₂和PGF_2α浓度变化;并利用qRT-PCR和Western blot检测关键合成酶基因HPGDS、PGFS及其受体DP1、CRTH2、FP的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,发现PGD₂+PGF_2α组中黄体退化效果最明显,随后依次是PGF_2α组明显大于PGD₂组。ELISA结果显示,随着处理后时间的推移,不同试验处理组中,P₄浓度均呈显著下降趋势（P<0.05）,其中在PGD₂+PGF_2α组中该变化趋势最显著（P<0.05）;但E₂、PGD₂和PGF_2α浓度均呈现不同差异性变化,其中,PGD₂+PGF_2α组中PGD₂和PGF_2α浓度呈显著下降（P<0.05）,PGF_2α组中E₂浓度呈显著升高（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著下降（P<0.05）,PGD₂组中E₂浓度呈显著下降趋势（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著升高趋势（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,PGD₂+PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量显著下调（P<0.05）,PGFS、CRTH2及FP mRNA和蛋白表达量显著上调（P<0.05）;PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量呈显著下调（P<0.05）,其它基因mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）;PGD₂组中HPGDS、DP1、PGFS及FP mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）。同时,在不同受体基因表达量检测时,发现PGD₂组中DP1受体表达量显著高于CRTH2受体（P<0.05）,而PGF_2α组中CRTH2表达量则显著高于DP1（P<0.05）。综上,PGD₂无论单独使用还是结合PGF_2α使用,均能够促进CL的退化,尤其是二者结合时有明显的协同促溶效应,其作用机制可能与其体内激素水平、关键合成酶及受体类型的表达有关,这为全面认识哺乳动物CL退化的调控机制奠定了基础,也为进一步优化高效繁殖技术（尤其是PGs方案）提供了新的思路。     

双氢睾酮通过调控孕酮、雌二醇和细胞凋亡参与绵羊子宫功能

旨在探究双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）是否通过调节孕酮（progesterone,P₄）、雌二醇（oestrogen,E₂）和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体（androgen receptor,AR）的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT （10^-10~10^-7 mol·L^-1）和AR拮抗剂氟他胺（Flu,10^-8 mol·L^-1）处理（n=3）。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P₄和E₂水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、B细胞淋巴瘤蛋白2（B cell lymphoma protein 2,Bcl-2）、半胱天冬酶3（caspase 3,CASP3）和活化半胱天冬酶3（active-caspase 3,Act-CASP3）的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期（P<0.05）。10^-10~10^-7 mol·L^-1DHT处理后,P₄合成酶表达显著上调（P<0.05）,在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时P₄合成显著增加（P<0.05）,在10^-10~10^-8 mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加（P<0.05）,但10^-7mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降（P<0.05）;在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时E₂相关合成酶显著减少,并且E₂水平显著下降（P<0.05）,在10^-9和10^-7 mol L^-1 DHT时E₂受体ERα蛋白显著下调（P<0.05）,在10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT时ERβ和GPER显著增加（P<0.05）。经Flu处理后部分解除DHT对P₄和E₂的调控。此外,10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡（P<0.05）。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P₄和E₂合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。     

催乳激素对山羊脂肪酸合酶基因转录活性的影响

为探讨催乳激素对体外培养的山羊乳腺上皮细胞脂肪酸合酶（fatty acid synthase，FASN）基因转录活性的调控作用，试验分别用不同浓度的胰岛素（insulin，INS）、雌激素（estradiol，E₂）、催乳素（prolactin，PRL）及不同激素组合（INS+PRL、E₂+INS+PRL）处理山羊乳腺上皮细胞24 h，提取细胞总RNA，采用实时荧光定量PCR检测催乳激素对FASN基因mRNA表达水平的影响。细胞转染山羊FASN基因启动子报告基因载体，同样用不同浓度的胰岛素、雌激素、催乳素及激素组合处理24 h，利用双荧光素酶报告基因系统检测催乳激素对FASN基因启动子活性的影响。结果发现，用雌激素、催乳素处理山羊乳腺上皮细胞后，FASN基因启动子活性及mRNA水平极显著或显著上调（P<0.01；P<0.05），雌激素浓度为10、100 μmol/L和催乳素浓度为0.1和1 μg/mL时效果最为明显，而胰岛素对FASN基因的启动子活性及mRNA水平没有显著影响（P>0.05）。用不同激素组合（INS+PRL、E₂+INS+PRL）处理细胞均能显著上调FASN基因启动子活性及mRNA表达水平（P<0.05）。结果表明，雌激素和催乳素能够调控FASN基因的转录活性，为进一步研究泌乳过程中FASN基因的分子调控机制提供理论依据。     

胸腺上皮细胞中雌激素诱导lncRNA的鉴定分析及表达载体构建

为研究胸腺上皮细胞（thymic epithelial cells,TECs）中雌激素（estradiol,E₂）对长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）表达的调节作用,本研究首先培养小鼠胸腺髓质上皮细胞系1（medullary thymic epithelial cell line 1,MTEC1）,经50 nmol/L E₂作用24 h后,观察对细胞表型变化的影响,并用CCK-8试剂盒检测细胞活力;提取细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术验证E₂对lncRNA-2410006H16Rik表达的调节作用;最后运用RT-PCR技术扩增其目的基因,构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik重组过表达载体。结果显示,50 nmol/L E₂能够明显抑制MTEC1的增殖,且相较于对照组细胞,50 nmol/L E₂处理组细胞的D_{450 nm}值极显著降低（P<0.01）,表明其细胞活力极显著下降。实时荧光定量PCR结果显示,在E₂作用下,lncRNA-2410006H16Rik在MTEC1细胞中的表达极显著上调（P<0.01）,约是对照组的2倍,与高通量测序结果一致。经RT-PCR、双酶切及测序结果分析显示,试验成功构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik表达载体。结果表明,TECs中lncRNA-2410006H16Rik的表达与E₂作用密切相关,为后续在细胞水平上进一步验证lncRNA-2410006H16Rik的调节功能奠定了基础。     

CYP19A1调控内源性雌激素合成促进牦牛COCs细胞自噬和早期发育能力

旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom, CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol, E₂)分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)体外成熟过程中,分别用等体积生理盐水、最佳浓度E₂(10^-7 mol·L^-1)、CYP19A1诱导剂黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1, AFB1)、CYP19A1抑制剂双酚A(bisphenol A, BPA)处理,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光技术检测各组成熟COCs中CYP19A1表达水平,酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测诱导和抑制CYP19A1处理组牦牛成熟COCs培养液中E₂水平;分析不同处理组C...     

白藜芦醇对体外培养的水牛卵丘细胞增殖活力及其相关基因mRNA表达的影响

【目的】研究白藜芦醇(resveratrol, RES)对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响。【方法】用不同浓度(0(对照组)、1、10、20、30、40、50和60μmol/L)RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验。用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇(estradiol, E₂)和孕酮(progesterone, P₄)的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量。【结果】与对照组相比,在体外培养24～36 h内,1、10和20μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理。体外培养36 h时,10μmol/L RES组细胞增殖能力和E₂、P₄的分泌显著增加(P<0.05);10μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3(PTX3)、前列腺素...     

Biomarkers of inflammation in cattle determining the effectiveness of anti-inflammatory drugs

Myers, M. J., Scott, M. L., Deaver, C. M., Farrell, D. E., Yancy, H. F. Biomarkers of inflammation in cattle determining the effectiveness of anti-inflammatory drugs. J. vet. Pharmacol. Therap. 33 , 1–8.
The impact of nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAID) on prostaglandin E₂ (PGE₂) production and cyclooxygenase 2 (COX-2) mRNA expression in bovine whole blood (WB) cultures stimulated by lipopolysaccharide (LPS) was determined, using the blood from six Holstein dairy cattle in various stages of lactation. Peak production of PGE₂ occurred 24 h after LPS stimulation but did not result in detectable concentrations of thromboxane B₂ (TXB₂). The NSAID indomethacin, aspirin, flunixin meglumine, and 4-[5-phenyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl] benzene sulfonamide (PTPBS; celecoxib analogue), along with dexamethasone, were all equally effective in reducing the concentration of PGE₂ in the bovine WB culture supernatants. Bradykinin exhibited peak supernatant concentrations 1 h after LPS stimulation. Dexamethasone and the NSAID used in this study were equally effective at inhibiting bradykinin production. Peak induction of COX-2 mRNA occurred 3 h post-LPS stimulation. However, neither dexamethasone nor any of the NSAID used in this study altered COX-2 mRNA concentrations. In contrast, aspirin, flunixin meglumine, and PTPBS reduced tumor necrosis factor-alpha (TNFα) mRNA concentration. These results demonstrate that bovine blood cells respond to NSAID therapy like other mammalian cells with respect to inhibition of PGE₂ production and suppression of TNF mRNA induction, but do not inhibit induction of COX-2 mRNA.     

BMP4诱导的Smad9在小鼠卵泡发育中的作用及其机制的初步研究

本研究旨在探讨Smad9在小鼠卵泡发育中的作用，为卵泡生长发育及其调控机制的研究提供新思路。将6周龄的雌性昆明小鼠随机分成3组，分别腹腔注射生理盐水、骨形态发生蛋白-4（BMP4）和Smad9抑制剂（LDN-193189），依次作为对照组、BMP4组和LDN组。48 h后收集卵巢制作石蜡切片，HE染色后观察卵泡发育情况并对各级卵泡进行计数；采用Western blotting和实时荧光定量PCR技术检测Smad9蛋白和mRNA水平。同时通过ELISA试验测定各组小鼠血清中雌二醇（E₂）、孕酮（P₄）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）和芳香化酶等的浓度，并检测了CYP19a1、LHR、PRLR和FSHR基因的表达情况，进一步探究Smad9可能的作用机制。结果显示，与对照组相比，BMP4组Smad9蛋白和mRNA水平较高，而LDN组较低；BMP4组有腔卵泡显著增加（P<0.05），而LDN组显著减少（P<0.05）。此外，ELISA试验结果显示，BMP4组血清E₂、FSH和芳香化酶含量增加，而P₄和LH含量降低；LDN组中E₂和芳香化酶的含量降低。实时荧光定量PCR结果显示，BMP4组FSHR和CYP19a1基因的mRNA水平升高，而LHR和PRLR基因的mRNA水平降低；LDN组PRLR基因的mRNA水平升高，而CYP19a1基因的mRNA水平降低。由以上试验结果可以得出，BMP4诱导的Smad9能促进小鼠有腔卵泡的发育，而其可能主要通过影响E₂、PRL和芳香化酶等的产生而起作用。     

日粮粗蛋白质水平对伊犁鹅产蛋规律、繁殖激素分泌及相关基因mRNA表达的影响

为探讨日粮粗蛋白质水平对伊犁鹅的产蛋规律、繁殖激素分泌及生殖轴相关基因mRNA表达量的影响,本研究随机选取200只3岁伊犁鹅（年龄、饲养管理水平一致及体重相近）,随机分为4个组,每组10个重复。对照组及公鹅饲喂鹅场自配料（粗蛋白质水平11.20%）,试验组母鹅分别饲喂粗蛋白质水平为13.86%、15.20%和16.48%的日粮,其余营养指标基本一致。预试期1周,正试期9周。结果表明：①试验期内伊犁鹅的产蛋率呈波动变化,对照组伊犁鹅的产蛋率在第1~2周逐渐上升,第4~5周出现小幅度增长,其余阶段表现为下滑趋势;各试验组伊犁鹅的产蛋率在第1~2、4~5周出现较大幅度增长,且在第5周时达到产蛋高峰,此后逐渐下滑。15.20%粗蛋白质组伊犁鹅就巢率显著低于11.20%、13.86%粗蛋白质组。②与对照组相比,13.86%粗蛋白质组血清促性腺激素释放激素（GnRH）浓度极显著升高（P<0.01）,且血清雌二醇（E₂）、促黄体素（LH）浓度均显著升高（P<0.05）;15.20%、16.48%粗蛋白质组血清GnRH、E₂及LH浓度均极显著升高（P<0.01）,且血清促卵泡素（FSH）浓度显著升高（P<0.05）。各试验组血清催乳素（PRL）浓度均显著降低（P<0.05）。③与对照组相比,15.20%粗蛋白质组下丘脑GnRH、LHR基因表达量显著上调（P<0.05）,PRL、PRLR基因表达量显著下调（P<0.05）;垂体中LH基因表达量显著上调（P<0.05）;卵巢中LH与ESR2基因表达量显著或极显著上调（P<0.05,P<0.01）。综上所述,基于日粮粗蛋白质水平对伊犁鹅的产蛋率、就巢率、血清生殖激素浓度及生殖轴相关基因mRNA相对表达量影响的综合评估,建议产蛋期伊犁鹅日粮粗蛋白质水平为15.20%。     

Expression of Nupr1 mRNA in Mouse Uterus During Early Pregnancy

The test was aimed to study the expression of nuclear protein 1 (Nupr1) mRNA in mouse uterus during early pregnancy.The method of in situ hybridization was used to investigate Nupr1 mRNA expression in animal models that included early pregnancy,pseudopregnancy,delayed implantation and activation,artificial decidualization and hormonal treatments.The relative expression level of Nupr1 mRNA was detected in early pregnancy and pseudopregnancy using Real-time PCR.During mouse early pregnancy,the signal of Nupr1 mRNA was detected in luminal epithelium and glandular epithelium during the 1st to 4th day and in the decidua area during the 5th to 8th day.Nupr1 mRNA was mainly expressed in the luminal epithelium and glandular epithelium of mose uterus on the 1st to 5th day of pseudopregnancy.The signal was detected in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus in the delayed implantation,which was similar to the results of early pregnancy on the 4th day.The signal was detected in decidua in the model of delayed activation,which was similar to the results of early pregnancy on the 5th day.The expression of Nupr1 mRNA in the model of artificial decidualization was detected in decidua area.In the control of artificial decidualization the slight signal appeared in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus.After treated with oestrogen (E₂) the signal appeared in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus,and the signal was enhanced.After treated with both of E₂ and progesterone (P₄), the expression of the signal was not changed significantly.Real-time PCR result showed that the relative expression on the 2nd day was higher than other days in early pregnancy and pseudopregnancy.The results indicated that the expression of Nupr1 mRNA in mouse uterus was related to the process of mouse early pregnancy.The expression of signal in luminal epithelium and glandular epithelium of the mouse uterus might be regulated by hormones.Nupr1 mRNA expression in uterine stroma was associated with decidualization and active blastocysts.     

Circulation of estrogens introduced into the rectum or duodenum in pigs

To determine the absorption and metabolism of 17β-estradiol (E₂) by the rectum of the pig, 10 mg of crystalline E₂ was placed in the rectum of prepubertal gilts in Experiment 1. Blood samples were subsequently obtained from hepatic portal and jugular veins and plasma was assayed for E₂, estrone (E₁), 17β-estradiol-glucuronide (E₂G), estrone-glucuronide (E₁G) and estrone-sulfate (E₁S). Concentration of E₂, E₁, E₂G, E₁G, and E₁S rose in the hepatic portal vein within 30 min and remained elevated for several hr. Concentrations of E₂ in the hepatic portal vein represented 3% of the total estrogen detected in the hepatic portal vein during the 5 hr sampling period, indicating that most of the E₂ was metabolized prior to entering the hepatic portal vein after absorption by the rectal mucosa. Concentrations of E₂, E₁, E₂G, E₁G, and E₁S rose in the jugular vein and remained elevated for several hr. The rise in E₂ and E₁ in the jugular vein may have come from E₂ and E₁ in venous circulation from the rectum that entered the inferior vena cava bypassing the hepatic portal vein and liver. The net result of absorption of E₂ from the rectum of gilts was a large rise in unconjugated and conjugated E₂ and E₁ in the peripheral circulation. In Experiment 2 prepubertal gilts fitted with jugular, hepatic portal, duodenal, and gall bladder catheters were infused into the duodenum with bile from pregnant gilts. Concentrations of E₂, E₁, E₂G, and E₁G were determined in gallbladder bile of gilts before infusion and at 470 min. Concentrations of E₂G and E₁G were determined in hepatic portal and jugular plasma before and after infusion of bile. A cholagogue was given at 480 min and E₂G and E₁G were measured in plasma from 490 min to 960 min. Concentrations of E₂ and E₁ in gallbladder bile rose at 470 min and fell to basal concentrations at 970 min. In gilts given the cholagogue, E₂G and E₁G in both the jugular and hepatic portal veins rose significantly over those in gilts not given the cholagogue. Bile estrogens circulate via the enterohepatic route and factors that influence secretion of estrogens in bile can influence concentrations of circulating estrogens.     

原花青素对玉米赤霉烯酮诱导牦牛颗粒细胞氧化损伤的保护作用研究

旨在探究原花青素（procyanidins,PC）在玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）诱导牦牛颗粒细胞产生氧化损伤后,对颗粒细胞生长增殖、抗氧化性以及激素分泌的影响。本试验选取3～5岁的健康牦牛（n=3）,完成卵巢颗粒细胞的分离培养,并通过免疫荧光染色鉴定颗粒细胞纯度。通过CCK-8法分别比较不同浓度ZEA （0（对照组）、5、10、20、40、60、80和100 μmol·mL^-1）、不同浓度PC （0（对照组）、0.05、0.5、2.5、5、10、50和100 μg·mL^-1）以及50 μmol·mL^-1 ZEA+5 μg·mL^-1 PC联合处理对牦牛颗粒细胞活性的影响。通过ELISA法检测对照组（未添加ZEA及PC）、50 μmol·mL^-1 ZEA组和50 μmol·mL^-1ZEA+5 μg·mL^-1PC联合处理组牦牛颗粒细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）以及雌二醇（E₂）水平。采用实时荧光定量PCR法检测不同组颗粒细胞中部分增殖生长、凋亡、抗氧化及E₂合成相关基因的表达水平。结果显示,本研究所分离培养得到的细胞表达颗粒细胞标志蛋白FSHR,具有较高的纯度,可以满足后续试验要求。添加不同浓度ZEA后,颗粒细胞活力随着ZEA浓度的升高而显著降低（P<0.05）。在一定浓度范围内（0~5 μg·mL^-1）,随着浓度的上升,PC对颗粒细胞的活力有显著提高作用（P<0.05）,且在浓度为5 μg·mL^-1时对细胞活力的提高作用最明显。与ZEA处理组相比,ZEA与PC联合处理后颗粒细胞的数量增加且细胞活力极显著提高（P<0.05）,颗粒细胞增殖生长相关基因PCNA和IGF-Ⅱ 以及抗凋亡相关基因XIAP和BCL-2的表达显著上调（P<0.05）。相反,促凋亡相关基因BAX和CASP3的表达显著下调（P<0.05）。同时,ZEA+PC联合处理后能显著降低牦牛颗粒细胞活性氧水平并促进颗粒细胞分泌E₂（P<0.05）,颗粒细胞中的抗氧化相关基因SOD2、GPX1及CAT和E₂合成相关基因STAR、CYP11A1及HSD3B的表达量显著上调（P<0.05）。上述结果表明,PC可提高经ZEA处理后颗粒细胞的生长增殖能力,上调颗粒细胞的活力,提高抗氧化能力,降低ROS水平以及提高E₂的分泌水平。综上所述,PC对ZEA诱导的牦牛颗粒细胞氧化损伤有一定保护作用。本研究为ZEA毒性的防治和畜牧业生产中PC的应用提供了一定的研究数据和理论支持。     

人绒毛膜促性腺激素对母驴促排卵效果的研究

[目的]研究人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）对母驴卵泡发育、排卵率、受胎率以及血清生殖激素水平的影响。[方法]选择优势卵泡直径在30~35 mm以及大于35 mm的母驴各30头,不同优势卵泡直径的母驴群体分别设置1个500 IU/头hCG处理组（n=10）、1个1 000 IU/头hCG处理组（n=10）、1个不接受hCG处理的对照组（n=10）。采用肌肉注射方法对各组母驴进行hCG处理。每隔24 h进行1次B超检查,观察各组母驴卵泡发育情况,测量卵泡直径;记录各组发生排卵的母驴数量,计算排卵率。对各组母驴进行人工输精,输精后第18天进行孕检,记录各组受胎母驴头数,计算各组受胎率。于hCG处理后0、24、48、72 h分别测定各组母驴血清中雌二醇（estradiol,E₂）和孕酮（progesterone,PROG）水平。[结果]2个群体母驴的卵泡直径随hCG注射剂量的增加而增大;优势卵泡直径大于35 mm的母驴群体中,肌肉注射hCG的2个组在处理后24 h内均出现排卵,而对照组母驴没有排卵;优势卵泡直径不同的2个母驴群体,在hCG处理48 h后排卵母驴数和排卵率与对照组相比均有所提高,其中,hCG处理后72 h,优势卵泡直径大于35 mm的母驴群体中,1 000 IU/头 hCG处理组的排卵率达到100%。2个母驴群体中,接受hCG处理的母驴,受胎率均高于对照,并且随hCG剂量的增加,受胎率有所提高;优势卵泡直径大于35 mm的母驴群体中,1 000 IU/头 hCG处理组的受胎率达到50%。2个母驴群体中,1 000 IU/头处理组在hCG处理后24 h的血清E₂浓度均较0 h时有较大幅度的提升,在0~72 h内血清PROG浓度的总体提升幅度较大。[结论]hCG处理可提高母驴的排卵率、受胎率以及血清中E₂和PROG水平,1 000 IU/头剂量的效果更好。     

Effect of GDF9 on Sheep Cumulus Cell Proliferation

The purpose of this study was to investigate the effect of growth differentiation factor 9 (GDF9) on the gene expression of cumulus cells expansion and hormone receptors as well as hormone secretion,in order to provide evidence for the role of GDF9 in the development of sheep cumulus cells.Sheep cumulus cells were used as the research object in this study,and were cultured for 48 h by adding different concentrations (0,50,100,200,400 ng/mL) GDF9 to low serum cell culture medium.Total RNA were extracted from the cells,using β-actin as the reference gene,Real-time quantitative PCR technology were used to detect the cumulus cells expansion related genes hyaluronic acid synthase gene 2 (HAS2),prostaglandin lead oxide synthase 2 (PTGS2),pentraxin 3 (PTX3) and hormone receptor genes follicle-stimulating hormone receptor (FSHR),luteinizing hormone receptor (LHR) and estrogen receptors (E₂R).Using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method to test the content of E₂ and P₄.The results showed that HAS2,PTX3,FSHR,E₂R and LHR mRNA relative expression of 200 ng/mL GDF9 group was extremely significantly higher than the control group and other GDF9 groups (P<0.01),PTGS2 mRNA relative expression was extremely significantly higher than the control group and 50,400 ng/mL GDF9 groups (P<0.01),and significantly higher than 100 ng/mL GDF9 group (P<0.05).When added 400 ng/mL GDF9,the relative mRNA expression of all the mentioned-above genes were all extremely significantly lower than that of the 200 ng/mL GDF9 group.Moreover,the E₂ secretion level was extremely significantly higher than that of the control group and 50 ng/mL GDF9 group (P<0.01),significantly higher than that of the 100 ng/mL GDF9 group(P<0.05),while had no significant difference from the 200 ng/mL GDF9 group (P>0.05).When added 100,200 and 400 ng/mL GDF9,the concentration of P₄ was significantly higher than the control group (P<0.05),and there was no significant difference from the 50 ng/mL group (P>0.05),and there was no significant difference between 100,200 and 400 ng/mL GDF9 groups (P>0.05).To sum up,GDF9 could promote the expansion of sheep cumulus cells and participated in the regulation of hormone secretion of sheep cumulus cells.