粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达质粒对断奶仔猪生长及相关激素的影响

选择40头断奶的长大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ～Ⅳ组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS,分析这些DNA疫苗对断奶仔猪的生产性能和相关激素分泌的影响.结果显示,与Ⅱ组和Ⅳ组相比,Ⅲ组平均日增重分别提高了8.37%(P＞0.05)和17.2%(P＜0.05),饲料利用率分别提高了14.8%和6.7%.Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GH的含量有升高的趋势.Ⅱ组IGF-Ⅰ的含量一直处于较高的水平,Ⅲ和Ⅳ组在第2周后处于较低的分泌水平,Ⅲ组IGF-Ⅰ的峰值高于其他组.Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组T3的含量呈下降的趋势,而Ⅲ组呈上升趋势,免疫后第8周,Ⅲ组的T3分泌水平显著高于Ⅱ和Ⅳ组(P＜0.05),而与对照组差异不显著.Ⅰ组T4的含量不断降低,而Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组有不断升高的趋势,Ⅱ组和Ⅲ组T4的分泌一直保持在较高的水平.上述结果表明,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对SS DNA疫苗有一定的免疫增强作用,pGM-CSF/SS的免疫效果要优于pGM-CSF+pcS/2SS共免疫.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达质粒对断奶仔猪生长及相关激素的影响

选择40头断奶的长大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ～Ⅳ组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF pcS/2SS,分析这些DNA疫苗对断奶仔猪的生产性能和相关激素分泌的影响.结果显示,与Ⅱ组和Ⅳ组相比,Ⅲ组平均日增重分别提高了8.37%(P＞0.05)和17.2%(P＜0.05),饲料利用率分别提高了14.8%和6.7%.Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GH的含量有升高的趋势.Ⅱ组IGF-Ⅰ的含量一直处于较高的水平,Ⅲ和Ⅳ组在第2周后处于较低的分泌水平,Ⅲ组IGF-Ⅰ的峰值高于其他组.Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组T3的含量呈下降的趋势,而Ⅲ组呈上升趋势,免疫后第8周,Ⅲ组的T3分泌水平显著高于Ⅱ和Ⅳ组(P＜0.05),而与对照组差异不显著.Ⅰ组T4的含量不断降低,而Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组有不断升高的趋势,Ⅱ组和Ⅲ组T4的分泌一直保持在较高的水平.上述结果表明,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对SS DNA疫苗有一定的免疫增强作用,pGM-CSF/SS的免疫效果要优于pGM-CSF pcS/2SS共免疫.     

超鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的克隆与真核表达

    为了研究鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的生物学功能,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从刀豆蛋白(ConA)刺激的四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞中扩增出GM-CSF基因,进一步通过PCR等方法将该基因亚克隆入真核表达载体pCI-neo,构建出重组表达质粒pCI-GM-CSF,将pCI-GM-CSF转染COS-7细胞,提取表达产物进行活性检测.序列测定表明,四川山地乌骨鸡GM-CSF全基因长为435 bp,编码144个氨基酸,与GenBank 上公布的瓦赫宁鸡GM-CSF基因(AJ621740)氨基酸序列同源性达95.1%,与其他哺乳动物GM-CSF基因的氨基酸序列同源性低于30%.骨髓细胞增殖实验证实四川山地乌骨鸡GM-CSF能明显促进鸡骨髓细胞的增殖.以上结果表明,本实验成功克隆了四川山地乌骨鸡GM-CSF基因,证实四川山地乌骨鸡GM-CSF重组蛋白具有明显的生物学活性.     

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子研究进展

人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是重要的造血细胞因子。hGM-CSF基因表达受转录和转录后水平调控。hGM-CSF受体由1个α亚基和1个βc亚基组成，它涉及Ras／Raf／MAPK和JAK／STAT途径。hGM-CSF有促进靶细胞分化、存活和增殖等多种功能。介绍了重组hGM-CSF在大肠杆菌、酵母、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物等多种体系中表达后的异同及在临床上的应用。     

GM-CSF与生长抑素共表达基因疫苗的构建和鉴定

以基因疫苗pVGS/2SS-asd为模板,采用分子生物学方法,分别获得目的片段粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（ GM-CSF）和含有乙肝表面抗原S基因的生长抑素基因（ SS）。以共表达质粒pIRES为载体,采用基因工程方法,将GM-CSF和SS基因片段分别克隆到载体的多克隆位点A和多克隆位点B上,构建共表达基因疫苗pIRES-GM-CSF/2SS,旨在同时表达GM-CSF和SS两种蛋白。获得表达质粒后,酶切和测序鉴定该共表达基因疫苗,结果显示,该共表达基因疫苗pIRES-GM-CSF/2SS构建成功,为该共表达基因疫苗的后续研究奠定了良好的基础。     

GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠肌肉组织GHR和IGF-I mRNA表达的影响

选择70只小白鼠,随机分为7组,每组10只,雌雄各半。其中第1组为对照组,第2-4组分别肌肉注射pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS DNA疫苗;第5～7组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF+pcS/2SS DNA疫苗,以β-actin作为内参,利用相对半定量RT-PCR,检测小鼠肌肉组织GHR和IGF-I mRNA的表达。结果表明:第3、5和6组的GHR mRNA表达显著高于1组和7组(P<0.05),第5和6组的IGF-I mRNA表达显著高于1组、2组、4组和7组(P<0.05),GM-CSF与SS的融合表达质粒(pGM-CSF/SS)的GHR和IGF-I mRNA表达高于pGM-CSF+pcS/2SS共同免疫,同种DNA疫苗,口服免疫组的GHR和IGF-I mRNA表达总体上比肌肉注射组要高。这些结果证明,GM-CSF可促进SS DNA疫苗的免疫效果,提高肌肉组织中GHR和IGF-I mRNA的表达;pGM-CSF/SS效果优于pGM-CSF+pcS/2SS,口服免疫组要优于肌肉注射免疫组。     

猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的克隆和序列分析及其基因表达

采取三元杂交猪的外周血,提取单核细胞总RNA,采用RT-PCR克隆猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA(GenBank登录号为DQ108393)。以pcDNA3.1(-)为质粒载体,构建猪GM-CSF基因真核表达质粒pGM-CSF,对克隆片段进行测序,并进行不同物种间同源性的比较。将重组质粒转染COS-7细胞,Western blotting鉴定表达蛋白的特异性。序列分析表明,GM-CSF的cDNA开放阅读框为435 bp,编码144个氨基酸和大部分信号肽,与用作PCR引物设计的参考序列比较,其核苷酸的同源性为97.5%,氨基酸的同源性为95.1%,同绵羊、人、牛、小鼠和犬的GM-CSF序列比较,其核苷酸的同源性分别为86.2%、80.5%、81.7%、69.7%和81.8%,氨基酸的同源性分别为78.5%、71.3%、70.3%、55.9%和71.5%。Western blotting证实目的基因可以在真核细胞中特异性的表达GM-CSF蛋白。以上结果表明,猪的GM-CSF基因被成功克隆,它存在着种属特异性。这为进一步研究该基因的生物学作用特别是利用GM-CSF增强DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。     

人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（hGM—CSF）在大肠杆菌中的融合表达初步研究

用融合表达质粒载体ＰＧＥＸＫＴ构建了人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭＣＳＦ）的表达质粒ＰＧＥＸＫＴ／ＧＭＣＳＦ。质粒转化大肠杆菌后，经ＩＰＴＧ诱导，超声波裂解，谷胱苷肽琼脂糖亲和胶进一步纯化，表达的ｈＧＭＣＳＦ融合蛋白纯度达到８０％以上，融合蛋白经凝血酶的作用后，再纯化，以ＭＴＴ法测定纯化的ｈＧＭＣＳＦ活性，结果其活性达１．７×１０６单位／升菌液。     

融合6个组氨酸的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在家蚕幼虫中的表达

将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒BmBacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBacPAKHis-GMCSF.用重组病毒感染家蚕五龄起蚕,分别在24、48、72、96、120 h和144 h剪腹足取蚕血淋巴,ELISA法测得rhGM-CSF融合蛋白在120 h的蚕血淋巴中表达量最高,约为15μg/mL蚕血淋巴.融合蛋白通过Poly-His Protein Purification Kit纯化.SDS-PAGE和Western blotting分析表明,表达产物是3种糖基化程度不同的,分子量分别约为18、20、31 kD的蛋白质.     

GM-CSF与猪瘟病毒E2基因共表达载体的构建及其诱导的免疫应答

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对猪瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫应答诱导的影响,将CSFVE2基因和GM-CSF片段插入真核表达载体pcDNA3.0内构建pcE2,pcE2-GF及pcGF核酸疫苗.动物试验时,50只雌性供试小鼠随机分为5组,即pcE2,pcE2-GF,pcDNA3.0,pcGF,生理盐水组,每组10只.0,2,4周于小鼠左后肢胫前肌进行肌注免疫,质粒量为每只每次50μg.每次免疫前和末次免疫后2周尾静脉采血收集血清,ELISA检测血清内特异性IgG水平.末次免疫后1周每组随机选3只无菌取脾,MTT法检测淋巴细胞增殖情况.结果表明,与对照组比较,pcE2和pcE2-GF第3次免疫2周后,免疫小鼠IgG抗体水平逐渐增高,淋巴细胞的转化率也明显增高,且pcE2-GF免疫组的IgG抗体水平和淋巴细胞的转化率高于pcE2免疫组.可见,细胞因子GM-CSF可有效提高猪瘟病毒E2基因核酸疫苗的免疫应答.     

不同水平玉米赤霉烯酮对断奶仔猪血清代谢产物和肝肾组织病理学影响

目的】玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEA）是由谷物及其产品滋生禾谷镰刀菌产生的一种具有雌激素活性的真菌毒素。试验研究不同水平玉米赤霉烯酮污染日粮对断奶仔猪血清代谢产物、肝肾组织病理学和肝脏超微结构的影响。【方法】将20头健康三元（斯格×长×大）杂交断奶母猪（10.36±1.21）kg按照体重随机分为4个处理,仔猪采用试验笼单独饲养。对照组饲喂基础日粮,试验1、2和3组分别在基础日粮的基础上添加ZEA 1.1、2.0和3.2 mg·kg^-1。预饲期7 d,正式期18 d。试验结束后,对仔猪禁食12 h后进行前腔静脉空腹采血,分离血清,待测血清代谢产物含量。采血后,仔猪电击致死放血屠宰,切取肝脏和肾脏组织块迅速固定于10%的福尔马林溶液,待做组织切片检测。切取0.5 mm³大小的肝脏组织块,迅速用2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液固定,待做电镜切片进行超微结构观察。【结果】与对照组相比,3.2 mg·kg^-1 ZEA处理组仔猪血清胆红素显著高于对照仔猪（P＜0.05）,而血清球蛋白和甘油三酯则显著低于对照组（P＜0.05）。随日粮ZEA水平的增加,血清球蛋白和甘油三酯呈一次线性降低（P＜0.05）。与对照组相比,1.1、2.0和3.2 mg·kg^-1 ZEA处理组肝细胞肿胀,颗粒变性。与对照组相比,2.0 和3.2 mg·kg^-1 ZEA处理组肾小管上皮细胞颗粒变性,管腔变窄,有些管腔内充满大量透明底状物或蛋白尿。2.0和3.2 mg·kg^-1 ZEA处理组肝细胞膜上可见自噬体和嗜中性白细胞。【结论】2.0 mg·kg^-1的ZEA足以诱导仔猪的肝肾毒性,此结果对人类健康和指导动物生产具有重要的借鉴意义。     

生长抑素DNA疫苗pEGS/2SS在大鼠体内的表达与分布

给SD大鼠股四头肌注射带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒pEGS／2SS,每只100μg。注射后不同时间剖杀,取注射部位肌肉、心、脑、垂体、肝、脾、肾、小肠、胃、子宫、卵巢作冰冻切片,于荧光显微镜下检查。发现pEGS／2SS仅在注射部位肌肉表达,72h表达最强,10d后明显减弱,2周后消失。其他组织及对照组未检测到绿色荧光。表明pEGS／2SS在体内表达、分布方面具有较好的安全性。     

新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建

应用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得新城疫病毒(NDV)Lasota株的血凝素神经氨酸酶(HN)基因片段,其长度约为1.7 kb,与已报道的NDV-HN基因片段大小一致.再将该HN基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,表明构建的重组质粒含有NDV-HN基因片段.     

注射pGRF基因质粒对猪血液生理生化指标和肉品质的影响

通过检测注射pGRF基因质粒(pig growth hormone-releasing factor gene plasmid)后生长猪血液生化指标与肌肉品质指标,探讨该制剂对生长猪的健康水平、肉品质和安全性的影响。将8头二元杂交、60日龄左右的阉后公猪随机分为两组,一组注射pGRF基因质粒,一组注射等量生理盐水,进行了60 d对比试验,于处理后第7、14、28、56天早晨空腹采血制备血清,测定生化指标。结果表明:注射pGRF基因质粒后第14天,除血清尿素氮提高39.88%外,血糖、尿素氮、肌酐、甘油三酯、胆固醇浓度变化均不显著。由此可见,注射pGRF基因质粒后,除血清尿素氮升高外,生长猪的其他生化指标都没有明显变化。于处理后第60天,每组随机选3头屠宰,称量器官质量,并采样测定肉品质。与对照组相比,试验组猪肉剪切力下降7.28%(P0.05),滴水损失降低20.86%(P0.05),而熟肉率提高4.38%(P0.05);但肌间脂肪比对照组提高68.83%(P0.05);肉色a*值降低14.30%(P0.05),b*、L*值有所提高,但差异均未达到显著水平;pGRF基因质粒对胴体pH影响不明显,器官与胴体的比值差异均未达显著水平(P0.05),其中从平均值看心脏质量比例略有增加,脾、肾比例有所下降。从本试验结果看,注射pGRF基因质粒对各项猪肉品质指标无不良影响,还可改善肌肉嫩度,降低滴水损失和提高肌间脂肪含量。     

乳酸菌对断奶仔猪生产性能及免疫力的影响

为了研究植物源性乳酸菌对断奶仔猪生产性能及免疫功能的影响,选取35日龄左右、断奶后平均个体质量为(7.48±0.23)kg的大长二元杂阉公猪165头,随机分成5个处理组,每个处理组3个重复,每个重复11头,试验期28 d,分别饲喂基础日粮(I组)、基础日粮 金霉素300 mg.kg-1(II组)、基础日粮 乳酸菌10 mL.头-1.d-1(III组)、基础日粮 乳酸菌30 mL.头-1.d-1(IV组)、基础日粮 乳酸菌60 mL.头-1.d-1(V组),结果表明:在断奶仔猪日粮中添加乳酸菌和金霉素能提高仔猪的平均日增质量、降低料增质量比,1~28 d,II、III、IV、V组同I组比较,平均日增质量分别提高了14.8%、8.9%、30.5%和29.6%,料增质量比分别下降了9.6%、7.0%、20.5%和17.9%,1~14和1~28 d的Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ组的腹泻率为0,试验得出乳酸菌的最适添加量为30 mL.头-1.d-1;乳酸菌可以提高血清T4和IGF-I的水平;IV组和I组比较:14 d时淋巴细胞转化率显著提高(P<0.05),28 d时有增高的趋势但差异不显著(P>0.05);28 d时血清中IgG显著提高(P<0.05),IgA、IgM有增高的趋势但差异不显著(P>0.05);表明乳酸菌对断奶仔猪的免疫功能有促进作用.     

不同播种期下甜高粱秸秆SS、SPS酶活性的研究

[目的]以新高粱3号(XT -2)和新高粱9号(T601)为研究对象,分析不同播期甜高粱不同生育阶段茎秆SS和SPS酶活性的变化规律及相关性.[方法]在5个不同播期条件下进行了蔗糖和酶活性测定试验.[结果]茎秆的蔗糖含量随着生育期不断升高,成熟期达到最高值.不同品种和不同播期秸秆蔗糖含量有差异,新高粱3号第二播期的蔗糖含量最高,高达7.66;,第五播期最低,仅为1.87;.对于新高粱9号来说第三播期蔗糖含量最高,达9.17;,第二播期最低,仅为6.19;.不同播期和不同品种之间秸秆蔗糖含量与SS、SPS酶活性的相关趋势有差异.除新高粱3号第一播期、第三播期的蔗糖含量与SS酶活性呈极显著相关外,其余播期的蔗糖含量与SS酶活性均呈相关性不显著.不同播期下秸秆蔗糖含量与SPS酶活性均呈相关不显著.[结论]早播时新高粱3号蔗糖含量比较高,晚播时新高粱9号蔗糖含量高.因此新疆,尤其是在北疆新高粱3号糖分积累的最适播期为5月初旬,新高粱9号最适播期为5月中旬.