利用原生质体诱变方法选育蛹虫草高产突变菌株

对蛹虫草(Cordyceps militaris)原生质体分别进行热应激和紫外线诱变处理后,挑选再生菌株进行栽培试验,通过测定菌株子实体产量及腺苷、虫草素含量,从中筛选高产突变菌株。蛹虫草原生质体经68℃和72℃热应激后,再生菌株子实体干物质含量显著增加,且68℃处理组子实体中腺苷含量显著提高。用紫外灯照射原生质体1 min、6 min和7 min时,子实体干物质含量显著增加,腺苷含量较对照组分别提高49.4%、96.4%和15.9%,虫草素含量分别提高49.1%、20.0%和13.5%。最终从紫外线诱变1 min处理组筛选出5株高产突变菌株,其子实体干质量和生物转化率均显著高于出发原菌株,子实体中虫草素含量分别为原菌株的1.59、1.72、1.74、1.55和1.56倍,并且5株菌株目标性状的稳定性良好。试验结果表明,以原生质体为材料,采用紫外线诱变技术可以选育出蛹虫草高产突变菌株。     

人工培养蛹虫草与冬虫夏草的主要活性成分比较

蛹虫草为珍稀中药材,基于为培养出含有类似天然冬虫夏草主要活性物质的蛹虫草提供基础依据的目的,对人工培养蛹虫草及菌丝体、子实体和冬虫夏草及菌丝体中的氨基酸、多糖、虫草素等活性物质含量与组成进行了测定,结果表明:人工培养蛹虫草与冬虫夏草在氨基酸种类上完全一致,但人工培养蛹虫草中赖氨酸、酪氨酸含量显著升高,组氨酸则显著降低;二者组成的多糖基本一致,但冬虫夏草特有一个分子质量约100 kD的组分,该组分占多糖总量的1.38%,人工培养的蛹虫草的虫草素含量显著高于冬虫夏草。以上成分的细微变化是否是造成二者药理活性差异的原因还有待研究。     

利用蚕虫草培育过程的优化以提高虫草素产量的研究进展

蚕虫草是冬虫夏草的最佳替代品之一,其虫草素的含量高于冬虫夏草中虫草素的含量,而虫草素具有重要的药用价值,如何提高虫草素的产量一直是研究者关心的问题之一.本文基于过去的相关研究,对利用蚕虫草培育过程的优化来提高虫草素产量的具体方法进行阐述、分析、总结和讨论.     

家蚕蛹虫草的化学成份分析

分析表明 :家蚕蛹虫草含有虫草酸、虫草素、腺嘌呤、尿嘧啶、β 谷甾醇、麦角甾醇、生物碱和多种游离基酸 ,其化学成份的种类与冬虫夏草基本类似 ,但虫草素、腺嘌呤的含量是冬虫夏草的 3倍。氨基酸分析表明 :家蚕蛹虫草子实体中氨基酸含量高于蛹体部分 ,特别是Glu、Lys ,而Gly则明显低于蛹体部分。比较家蚕蛹虫草与蛹虫草菌粉的化学成份可知 :炽灼残渣、重金属、总氮量和腺嘌呤的含量家蚕蛹虫草高于蛹虫草菌粉 ;总糖、腺苷、甘露醇的含量低于蛹虫草菌粉。稳定性试验表明 :3个月内家蚕蛹虫草的功效成份无明显变化     

河南一化性柞蚕蛹虫草与冬虫夏草有效成分含量对比

通过测定河南一化性柞蚕蛹虫草的有效成分,并与野生的冬虫夏草进行对比,结果表明,所测得的有效成分中,河南一化性柞蚕蛹虫草氨基酸(除异亮氨酸)、虫草素、虫草多糖均高于野生冬虫夏草,超氧化物歧化酶的含量也很高,含有丰富的微量元素,铅、砷和汞含量符合国家标准。     

一化性柞蚕蛹虫草有效成分分析

测定了利用一化性柞蚕蛹培育的蛹虫草的部分营养成分及生理活性物质含量,并与野生冬虫夏草和野生蛹虫草进行了对比,结果表明：一化性柞蚕蛹虫草中氨基酸的含量高于野生冬虫夏草和野生蛹虫草,其主要的有效活性物质含量较高,重金属含量在国家规定的安全范围以内,并且不合铅元素,完全可以替代野生冬虫夏草或野生蛹虫草,可利用一化性柞蚕的蛹人工工厂化培育蛹虫草,以缓解市场的供需矛盾.     

木薯蚕蛹虫草有效成分含量分析初报

对以常规技术人工栽培的木薯蚕蛹虫草进行成分含量检测分析,发现其干物质中含蛋白质71.00%,脂肪0.94%,总糖0.36%;18种氨基酸含量占虫草总量的19.21%;含虫草素0.02%,含虫草酸5.6%,未检测到虫草多糖;富含多种无机盐,对人体有益的Ca、Fe、Zn、Se等元素含量较高;同时含有维生素A、E及B族维生素,但未检测到维生素D和维生素C。木薯蚕蛹虫草与柞蚕蛹虫草、冬虫夏草相比较,木薯蚕蛹虫草尚不能成为冬虫夏草的替代品。     

蛹虫草中虫草素差异表达基因cDNA的克隆

采用抑制差减杂交技术（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）分离与虫草素合成相关的差异表达基因的cDNA片段，为克隆相关基因提供研究基础。对虫草素表达产生的差异进行基因水平的分析，做了双向调控的分析，即以高表达虫草素的突变型菌株作为检测子，以未作移码诱变处理的出发野生型菌株作为驱动子，同时，以未作移码诱变处理的出发野生型菌株作为检测子，以高表达虫草素的突变型菌株作为驱动子。经过消减杂交后得到一组正调控基因片段的克隆，并对该组克隆进行了序列测定。     

不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量测定

虫草素和腺苷是蛹虫草的重要活性成分,通过高效液相色谱(HPLC)法测定不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量,筛选能生产高品质蛹虫草的培养基。测定结果表明,用不同培养基培育的蛹虫草子实体中,其虫草素和腺苷含量存在显著差异,总体表现为粳米+家蚕蛹浸提液培养基>糯米+家蚕蛹浸提液培养基>粳米培养基>糯米培养基,其中用粳米+家蚕蛹浸提液培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素和腺苷质量比分别高达15.37 mg/g和39.96 mg/g。此外,相同培养基培育的蛹虫草子实体、菌丝体和培养基质中的虫草素与腺苷含量存在极显著差异,总体表现为子实体>菌丝体>基质。试验结果表明,粳米培养基中添加家蚕蛹浸提液可显著提高蛹虫草中的虫草素和腺苷含量。     

蚕体和蛹粉代料培养基上的蛹虫草生长状况与品质检测

在实验室条件下以优选的蛹虫草菌株YCC-XD-2在家蚕蛹、蛾培养基和蛹粉代料培养基上培育蛹虫草,比较不同培养基上的蛹虫草的生长状况和虫草素含量,探究高产优质蛹虫草的培养方式。蛹虫草菌种在蚕体和蛹粉代料培养基上均生长良好,其中:蚕体培养基以蚕蛾培养基上的蛹虫草生长较好;蛹粉代料培养基以糯米+蛹粉培养基上的蛹虫草生长较好。蚕体培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素含量显著高于蛹粉代料培养基培育的蛹虫草,其中,蚕蛾培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素质量比高达21.97 mg/g。在相同培养条件下,蛹虫草子实体中的虫草素含量高于菌丝体和培养基质。试验结果表明,利用家蚕蛹、蛾培养基可以生产出高品质蛹虫草。     

蛹虫草菌株原生质体的制备方法试验研究

蛹虫草具有与冬虫夏草极相似的药理作用,可作为冬虫夏草代替品.本试验以蛹虫草菌株CM-1为出发菌株,结果表明蛹虫草菌原生质体制备的快速简便方法为:菌体液体培养96h,用0.6 mol/L甘露醇溶液作为渗透压稳定剂,取1g菌丝体以1∶20比例加入复合酶液,在pH6.8、28℃条件下酶解2.5h,获得原生质体数最多,达到5.08 × 108个/mL;原生质体再生培养基为含0.6 mol/L甘露醇PDA培养基,原生质体再生率最高为4.69％.     

用不同蛹虫草菌株和家蚕品种幼虫覆土栽培蚕蛹虫草的试验

采用覆土培育的方法人工栽培蚕蛹虫草,在相同的培育环境条件下以6株蛹虫草菌(Cordyceps militaris)菌株和4个家蚕品种的5龄第6天幼虫供试,筛选合适的菌株和蚕品种。同一个家蚕品种的幼虫接种不同蛹虫草菌株的感染率差异显著;接种相同蛹虫草菌株120 h时,家蚕二元杂交组合与四元杂交组合幼虫间的感染率差异显著,至168 h,仅接种菌株H24的2个家蚕二元杂交组合间幼虫的感染率差异显著,各家蚕品种幼虫接种其余菌株的感染率已无显著差异,家蚕品种7532×湘晖的幼虫接种菌株LP4的感染率最高达到93.33%,并且该菌株对4个家蚕品种幼虫的感染能力显著高于其他菌株。不同菌株接种各家蚕品种幼虫的发菌率无显著差异。各家蚕品种幼虫接种菌株H24和H7未获得子实体,接种菌株H10和LP4的出草率最高,平均值分别为84.73%和88.70%。供试菌株和家蚕品种均显著影响蚕蛹虫草中3种活性成分的含量,并且菌株的影响更显著:以菌株L2接种7532×湘晖的幼虫培育蚕蛹虫草中的虫草素含量最高;以菌株H0接种932·芙蓉×7532·湘晖的幼虫培育蚕蛹虫草中的腺苷含量最高;以菌株H0接种洞·庭×碧·波的幼虫培育蚕蛹虫草中的虫草多糖含量最高。综合各项试验成绩初步认为:蛹虫草菌L2菌株和LP4菌株具有较高的生产应用价值;家蚕品种直接影响菌株的感染速度,对培育蚕蛹虫草中活性成分的含量也有一定影响。     

采用固相分离与反相色谱法制备柞蚕蛹虫草虫草素

虫草素是蛹虫草中具有药用功能的活性成分。采用超声波技术获得柞蚕蛹虫草虫草素萃取液后,利用固相萃取柱对虫草素进行预分离,再利用反相制备型高效液相色谱监测制备虫草素。试验结果表明,采用固相萃取柱可以高效地分离柞蚕蛹虫草萃取液中的虫草素,虫草素洗脱液中的虫草素质量分数达47.05%,经反相高效液相色谱监测制备的虫草素样品纯度达到99%以上,其萃取、分离、制备工艺简单,具有实用价值。     

蛹虫草药理作用研究进展

蛹虫草(Cordycepsm ilitaris(L.)Link.)又名北虫草、蛹草、北冬虫夏草。属子囊菌亚门、核菌纲、球壳菌目、麦角菌科、虫草属川,是与冬虫夏草极为相似的一个种。广泛分布于世界各地,在我国吉林、辽宁、河北、陕西、甘肃、安徽、山东、湖北、湖南、四川、贵州、福建、广东、广西、云南等地均有发现。蛹虫草的寄主不十分专一,多在春季发生于阔叶林或混交林地上或树皮缝内的鳞翅目蛹上。也有发现感染鞘翅目和双翅目等昆虫的蛹、茧、成虫或幼虫体。蛹虫草既是药用真菌,又是高档滋补食用菌,不仅具有极高的营养价值,而且具有完美的保健功能。1蛹…     

蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。     

不同蛹虫草菌株栽培蚕蛹虫草的形态性状及活性成分含量比较

选择5株蛹虫草菌株感染家蚕5龄第3天幼虫生产蚕蛹虫草,通过观察检测蚕蛹虫草的形态性状及采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定虫草素和腺苷的含量,为筛选高产优质蛹虫草菌株提供依据。不同菌株栽培生产的蚕蛹虫草的外观形状、生长状况以及活性成分含量均有明显差异:1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体形状较接近于野生的冬虫夏草,MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座形状较佳,17-3菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体形状较佳;1-1菌株栽培的蚕蛹虫草总质量和僵虫体质量均最高,干质量分别达到1.460 g和1.170 g;MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座总数量、子座总长度及子座质量占虫草总质量的比率等指标均极显著高于其他菌株(P0.01),分别达15.100根、44.877 cm和41.357%;1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含虫草素最高,达8.92 mg/g,MS菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含腺苷最高,达2.22 mg/g,并且5株供试菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体中的虫草素含量均高于子座,而子座中的腺苷含量均高于僵虫体。研究结果表明,蛹虫草菌株是影响人工栽培蚕蛹虫草形态性状及活性成分含量的重要因素,初步认为1-Y菌株和MS菌株具有较高的生产应用价值。     

用干蚕蛹栽培蛹虫草技术

蛹虫草又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草,虫草属的模式种,是极具药用和滋补价值的食用菌。经现代药理、药化和临床应用研究证明,其药用成分和功效可与冬虫夏草相媲美。利用桑蚕蛹栽培的蛹虫草,全草入药,特别是其主要活性成分虫草素(3′-脱氧腺苷)、虫草酸(D-甘露醇)、虫草多糖(高度分支的甘露聚糖)等明显地高于冬虫夏草。其性平味甘,无毒副作用,具有滋肺补肾、抗疲劳、抗衰老、抗缺氧、增强人体免疫能力并有明显的雄性激素样功效,有望成为冬虫夏草的替代品。我国蚕桑生产历史悠久,蚕茧产量占世界总产量的80%,经缫丝后每年产生37.5万t干蚕蛹,目…     

蛹虫草菌保藏方法对其生产能力的影响

蛹虫草菌的保藏方法对柞蚕蛹虫草的产量及活性物质含量影响较大,随着冷冻保藏时间的延长,蛹虫草菌注蛹后的生产能力逐渐降低;随着冷藏保藏时间的延长,蛹虫草菌注蛹后的生产能力及虫草素含量均逐渐降低。丰富培养基和PDA培养基中蛹虫草菌随继代培育次数的增加其生产能力均出现降低的现象,但PDA培养基中降低的速度较慢,故PDA培养基更适合蛹虫草菌的保藏。     

蛹虫草退化菌株的研究进展

蛹虫草是一种具有药用兼食用的经济真菌,在国内外广泛用作天然药物和民间滋补食品。蛹虫草菌株在继代培养以及保藏过程中非常容易退化,是目前蛹虫草行业急需解决的难题。本文阐述了蛹虫草菌株退化后生物学特征的变化,以及引起退化的原因和防治措施,以期对今后蛹虫草菌株的退化机理研究有所启发,为甄别蛹虫草退化菌株提供依据。     

蛹虫草研究进展

概述蛹虫草的生物学特性,综述其在人工栽培技术、液体深层发酵、化学成分和药用价值等方面所取得的研究进展及开发现状.探讨了蛹虫草是否可以作为冬虫夏草的替代品仍需做大量的研究工作.