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本试验采用SephadexG-200层析技术纯化猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)的囊液粗抗原。共获得两种(CF1、CF2)层析抗原,以酶联免疫吸附试验(ELISA)判定抗原的最适包被浓度以及抗体的最适稀释倍数,各阶段最适反应条件,结果证明CF1具有特异性强、敏感性高、稳定性好、重复性强的特点可以作为免疫诊断囊尾蚴病猪IgG。 相似文献
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猪伪狂犬重组抗原间接ELISA诊断方法的建立 总被引:5,自引:0,他引:5
本研究应用重组抗原,成功建立了检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法。通过方阵滴定确定了抗原最适包被量为1.45μg/孔,血清最适稀释度为1∶80,其作用时间为60 min,酶标抗体最适作用时间为60 min。其阳性临界值为OD≥0.123。此外,该抗原不与猪其他疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内重复试验,变异系数小于10%。该方法与进口诊断试剂盒的符合率为96.3%。本研究为现地免疫猪群抗体检测和进行PRV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 相似文献
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基于重组猪囊虫18 ku抗原的间接ELISA方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从猪囊尾蚴中克隆到18 ku蛋白基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接后测序分析.将目的基因亚克隆至表达载体,构建重组质粒pGEX-CE18,经转化大肠杆菌BL21 (DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物.表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接ELISA方法.结果表明,18 ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物约为35 ku的融合蛋白,并能被猪囊虫感染血清识别.经薄层扫描分析,表达量占菌体蛋白总量的28%.与商品化ELISA试剂盒平行检测178份阳性血清样品,二者的符合率为98.83%,说明建立的重组蛋白ELISA方法可用于猪囊虫病的诊断. 相似文献
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应用琼脂双扩散(DID),免疫电泳(IEP),聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对猪囊尾蚴的匀浆抗原和囊液抗原进行分析。结果表明,两种抗原间存在相同的抗原成份,囊液的免疫化学性质优于匀浆抗原,并从免疫学和生物化学角度初步探索了囊液抗原和匀浆抗原中蛋白质之间的相互关系及主要蛋白质组分。 相似文献
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为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测,作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法.在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后,选择后者作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化.最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接ELISA检测方法.批间与批内试验结果证明该方法具有很好的稳定性.初步应用表明,该方法可用于猪肺炎支原体感染或免疫状态的临床监测. 相似文献
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ELISA诊断猪囊尾蚴病的试验研究 总被引:5,自引:1,他引:4
ELISA诊断猪囊尾蚴病的试验研究霍细香,周源昌(湖北省医科院寄研所)(东北农业大学兽医系)鉴于猪囊尾蚴病对人畜的共同危害和所造成的经济损失,其生前诊断显得尤为重要。随着免疫学方法不断发展而形成的猪囊尾蚴病血清学试验是生前诊断的重要方法。八十年代出现... 相似文献
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以纯化的PRV抗原为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立了可检测PRV血清抗体的间接ELISA诊断方法。标定抗原的最佳包被量为0.802μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶100,最佳作用时间为60min,判定标准为OD 450nm值大于0.357为阳性,小于0.296为阴性,在0.296与0.357之间为可疑。该方法检测其他6种常见猪病病毒(CSFV、PCV-2、PRRSV、PPV、JEV、TGEV)的阳性血清均为阴性;与商品化ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为90.0%、87.1%、92.3%。本研究建立的PRV间接ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV免疫猪群抗体监测、快速诊断和PR流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。 相似文献
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为了满足我国现阶段猪伪狂犬病病毒(PRV)高频突变引发新疫情诊断的需求,本实验通过生物信息学分析比较,设计合成了针对PRV g B糖蛋白高度保守的抗原优势表位区肽段,命名为g B872。以此肽段为包被抗原,经条件优化建立了新型的PRV-g B间接ELISA抗体检测方法。该ELISA方法检测结果显示,其仅对PRV血清检测为阳性,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒(O型)、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法具有较强的特异性;最低检测下限血清稀释度为1∶128,高于IDEXX PRV/ADV g B抗体检测试剂盒检测下限稀释度(1∶4),表明该方法敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均低于10%,重复性良好。利用该方法与Bio Chek PRV-g B抗体检测试剂盒检测90份临床血清样品,对比结果分析显示,两者阳性符合率为100%,阴性符合率为97.67%,总体符合率为97.78%;同时,采用该方法与IDEXX-g I(gE)和IDEXX-g B试剂盒分别对野毒感染血清和疫苗免疫血清同时检测,该方法可以准确识别野毒阳性血清和疫苗免疫阳性血清,与IDEXX两种试剂盒的结果一致。本研究建立的间接ELISA检测方法对PRV疫苗免疫效果评价、流行病学调查及防控提供了可靠的方法。 相似文献
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异源性抗原抗猪囊尾蚴感染的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道了泡状带绦虫活化六钩蚴的超声裂解抗原可以诱导猪体产生抗猪带绦虫攻击感染的交叉保护作用。猪囊尾蚴匀浆抗原也使猪体产生了较强的抗猪带绦虫攻击感染的保护作用。泡状带绦虫六钩蚴超裂抗原免疫组与猪囊尾蚴匀浆抗原免疫组的保护情况是相似的,这表明异源免疫也可使猪体产生较好的抗猪囊尾蚴感染的免疫。由于制备异源性抗原的泡状带绦虫能够从狗的体内获得,因此在体外培养猪带绦虫未获成功之前可以解决从人体获取猪带绦虫的困难。 相似文献
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猪囊尾蚴病病原入侵与免疫机理以及免疫预防研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
猪囊尾蚴病是危害严重的人畜共患寄生虫病,其病原是复杂的真核生物,有猪带绦虫成虫、六钩蚴、囊尾蚴等多个发育阶段,在人猪之间循环感染寄生发育。目前国内外已在病原和宿主个体、细胞和分子水平上对猪囊尾蚴入侵与免疫、免疫与免疫逃避以及免疫预防等方面进行了大量的研究,初步明确了虫体的组成成分与结构形态以及发育形式,与病原入侵和免疫的关系,为免疫预防控制,特别是分子免疫预防奠定了坚实的基础。但要完全控制和消灭该病,要走的路还很长。 相似文献
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建立了8株抗猪囊虫循环抗原(CA)的杂交病细胞系。其中6F12和2E7为抗囊虫特异McAb;McAb 1C6、1C7、1B5、4D9、2B9和8D8与囊虫、(?)球蚴、细颈囊尾蚴抗原均可发生反应。这些McAb的腹水ELISA效价为105~107,细胞培养上清液效价为102,并均可与病猪血清中的囊虫CA反应形成沉淀线。用1B5、6F12和8D8分别致敏血球,以反向间接血凝试验检测98份囊虫病猪血清,检出率分别为70.41%(69/98)、6.12%(6/98)和7.14%(7/98)。本研究制备的McAb可用于猪囊虫循环抗原检测。 相似文献
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通过SDS-PAGE方法对猪囊尾蚴囊液抗原成分进行了分离鉴定,并分别分离纯化了其中的16 000和10 000特异性蛋白质成分;将16 000和10 000纯化蛋白质成分分别做成佛氏佐剂苗,分组免疫BALB/c小鼠,超免后,无菌取脾脏制备脾细胞,分别与NS0骨髓瘤细胞进行融合,经阳性筛选和特异性鉴定获得2株分泌猪囊尾蚴特异性单抗的杂交瘤细胞,命名为TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5。免疫学鉴定结果表明,单抗TSCF-1611H12B8和TSCF-1012G5B5与猪细颈囊尾蚴、旋毛虫、住肉孢子虫和蛔虫抗原间不存在交叉反应;单抗TSCF-1611H12B8识别囊液中16 000和10 000蛋白质抗原条带,而单抗TSCF-1012G5B5识别囊液中的10 000蛋白质条带。 相似文献
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猪脑心肌炎病毒重组抗原间接ELISA诊断方法的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
以猪脑心肌炎病毒VP1重组蛋白为抗原,建立了检测猪脑心肌炎病毒(EMCV)血清抗体的间接ELISA诊断方法。经优化后抗原最适包被浓度为2μg/mL,血清最适稀释度为1∶50,其作用时间为90 min,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为30 min。判定标准为OD450≥0.427为阳性,OD450≤0.35为阴性,介于二者之间为可疑。该重组蛋白与PRRSV、猪瘟、PCV2、FMDV抗体反应呈阴性,证明具有良好的特异性。应用该方法检测了来自我国不同地区的26家猪场的156份临床血清,结果证明我国部分规模化猪场已有猪脑心肌炎疾病存在。 相似文献
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本研究以纯化的原核表达的猪轮状病毒VP7抗原表位区域为抗原,建立了检测猪轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他7种常见猪病病毒(TGEV、PEDV、CSFV、PCV2、PRRSV、PPV、PrV)的阳性血清不发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%;对来自不同猪场的血清的检测结果表明,该ELISA方法与中和试验检测结果符合率达94.8%。本试验建立的ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和轮状病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 相似文献