N-乙酰半胱氨酸对犬细小病毒诱导的MDCK细胞凋亡及活性氧的影响

为探讨N-乙酰半胱氨酸(25μg/mL)对犬细小病毒侵染MDCK细胞的保护作用,采用噻唑兰比色法来检测NAC对染毒MDCK细胞增殖率的影响,流式细胞术检测NAC对染毒MDCK细胞凋亡率及活性氧ROS水平。结果表明,与对照组相比,染毒组细胞增殖显著下降(P0.05),而NAC组细胞增殖显著高于攻毒组(P0.05);染毒组细胞凋亡率显著上升,胞内ROS水平显著升高(P0.05),呈时间-效应关系,但NAC组明显减轻上述情况。NAC可通过降低ROS的产生从而改善染毒的MDCK细胞凋亡,对细胞起到保护作用。     

镉致大鼠大脑皮质神经细胞凋亡的机理及N-乙酰半胱氨酸的保护作用

对神经细胞用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒和N-乙酰半胱氨酸(NAC)(100μmol/L)进行保护,通过流式细胞仪检测了细胞凋亡率、[Ca2+]i和活性氧(ROS)水平.结果表明,与对照组相比,各染毒组细胞凋亡率、细胞内[Ca2+]i和ROS水平明显升高,呈剂量-效应关系,除5 μmol/L组ROS水平外,均差异极显著(P<0.01).添加NAC组与相应染毒组比较,神经细胞凋亡率有降低趋势,但差异不显著(P>0.05);10、20μmol/L组细胞内[Ca2+]i和ROS水平显著降低(P<0.05或P<0.01).表明镉可诱导神经细胞凋亡,其机理可能与细胞内Ca2+和ROS水平升高有关,NAC对其有一定的保护作用.     

敌百虫对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞凋亡的影响

为探讨敌百虫对大鼠大脑皮质神经细胞的毒性作用及机理,本研究在建立体外培养新生24h内SD大鼠大脑皮质神经细胞模型的基础上,在细胞培养液中添加0、5、20、80mg/L敌百虫染毒,在染毒后的不同时间测定细胞凋亡率、线粒体膜电位、细胞内[Ca2＋]i、ROS含量和ATP酶的变化。结果显示：①染毒12h,细胞凋亡率明显增加;②染毒12h,各染毒组线粒体膜电位逐渐降低,其中80mg/L组与对照组存在极显著差异（P〈0.01）;③染毒0.5h,各染毒组细胞内[Ca2＋]i显著高于对照组（P〈0.01）;染毒12h,各染毒组细胞内[Ca2＋]i呈下降趋势,但仍显著或极显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）;④染毒12h和24h,细胞内ROS水平显著或极显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）;⑤染毒12h,细胞Na＋-K＋-ATPase和Ca2＋-Mg2＋-ATPase活性逐渐降低,20、80mg/L组与对照组有极显著差异（P〈0.01）;上述指标的变化呈显著的剂量-效应关系。结果表明,低质量浓度敌百虫暴露可致大鼠大脑皮质神经细胞凋亡率和细胞内ROS含量升高,线粒体膜电位下降,细胞内钙离子超载且ATPase活性降低,提示细胞凋亡在敌百虫所致的大脑皮质神经细胞损伤过程中发挥主导作用。     

镉对大鼠大脑皮质神经细胞的氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸的保护效应

为研究镉对新生大鼠原代大脑皮质神经细胞的脂质过氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)的保护效应,对神经细胞用不同浓度(0,5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒和NAC(100 μmol/L)进行保护,检测细胞内活性氧(ROS)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氩酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量.结果表明,与时照组比较,染毒组细胞内ROS水平、MDA含量和CAT活性极显著升高(P＜0.01),GSH-Px活性降低,20μmol/L组出现显著差异(P＜0.05);NAC保护组与相应染毒组比较,ROS水平、MDA含量和CAT活性呈不同程度降低,部分组间出现显著差异(P＜0.05);说明镉有促进神经细胞脂质过氧化的作用,NAC可提高神经细胞的抗氧化能力,对镉暴露所致的脂质过氧化损伤有一定的保护作用.     

镉致大鼠肝细胞凋亡及N-乙酰半胱氨酸的保护作用

用两步灌流法获得大鼠肝细胞,应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法、Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞仪检测醋酸镉对肝细胞存活率和凋亡率的影响,以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的保护效应.结果表明,肝细胞暴露于浓度为2.5、5、10μmol/L的醋酸镉后,细胞相对存活率显著下降(P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.05),且具有剂量-效应关系;2 mmol/L的NAC可使细胞相对存活率明显提高(P<0.01),凋亡率下降.结果提示,一定浓度醋酸镉可引起肝细胞凋亡,NAC具有一定的保护作用.     

乙酰半胱氨酸对大鼠饮水镉暴露所致肾功能损伤的保护效应

采用饮水对大鼠进行镉染毒(CdCl2,50mg/L)和NAC保护(CdCl250mg/L+NAC1g/L)试验,为期8周,通过检测尿液中碱性磷酸酶(UALP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(UNAG)、γ-谷氨酰基转移酶(UGGT)活性的动态变化及观察肾小管上皮刷状缘超微结构,探讨镉对大鼠肾脏功能损伤以及NAC的保护作用。结果显示,镉染毒2周后UNAG,UGGT,UALP活性即显著或极显著高于对照组(P0.05或P0.01),且升高幅度与染毒时间呈正相关;与染毒组比较,保护组尿液中酶活性从试验后4周开始显著或极显著下降(P0.05或P0.01)。超微结构观察发现,镉染毒使大鼠肾小管上皮刷状缘不同程度的断裂和脱落,保护组刷状缘基本完整。结果表明,50mg/LCdCl2饮水暴露对肾功能和结构造成了明显损伤,NAC对这种损伤有显著的保护作用。     

芝麻素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

本试验旨研究在体外培养(in vitro culture,IVC)中添加芝麻素(sesamin,SES)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度(10、50、100μmol/L) SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数;采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用CMF_2HC检测早期胚胎内谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高,但无显著差异(P0.05);50μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高(P0.05),细胞凋亡率较对照组显著降低(P0.05);与对照组相比,50μmol/L SES组ROS水平显著降低(P0.05),GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高(P0.05)。结果表明,在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率,降低细胞内ROS水平,提高细胞内GSH水平,改善早期胚胎线粒体功能,减少胚胎氧化应激的损伤,提高小鼠早期胚胎发育质量。     

玉米赤霉烯酮对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的影响

本试验旨在研究玉米赤霉烯酮(ZEA)对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的影响。选用40~60日龄健康的伊莎公鸡,无菌条件下取脾脏,制备淋巴细胞悬液。ZEA染毒浓度为0(对照)、0.10、0.40、1.60、6.25和25.00μg/m L,染毒48 h后检测体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡率、坏死率、细胞线粒体膜电位、细胞内活性氧(ROS)含量以及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bak-1、p53及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达量及细胞培养液上清中上述相应凋亡基因蛋白含量。结果显示:与对照组比较,ZEA染毒导致鸡脾脏淋巴凋亡率、坏死率、ROS含量、细胞培养上清液中p53、Bax、Bak-1及caspase-3的含量以及细胞内p53、Bax、Bak-1及caspase-3的mRNA表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),且随毒素浓度升高而升高;而ZEA组细胞线粒体膜电位和上清液Bcl-2含量却极显著低于对照组(P0.01)。由此可知,ZEA染毒可促进体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

PARP-1蛋白在镉致NRK-52E细胞凋亡中的作用研究

为了探究PARP-1蛋白在镉(Cd)致大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡中的作用。本研究用RTCA技术检测Cd对细胞增殖的影响,用Western Blot方法检测细胞中PARP-1与AIF蛋白的表达情况,用流式细胞术或免疫荧光的方法检测Cd与NAC或DPQ共孵育对细胞凋亡率、线粒体膜电位以及活性氧的影响。结果显示,Cd影响了细胞的增殖并上调PARP-1蛋白的表达和活性氧(ROS)的生成,抑制PARP-1的活性后细胞凋亡率下降并且线粒体膜电位与细胞内ROS的含量都恢复到相对正常水平;添加NAC处理后减弱了Cd对细胞增殖的抑制作用同时降低了细胞凋亡率。结果表明,PARP-1蛋白和氧化应激在Cd致NRK-52E细胞凋亡中发挥了重要作用。     

穿心莲内酯抑制镉诱导的PC12细胞凋亡

旨在研究中药穿心莲的有效活性成分穿心莲内酯(andrographolide, Ad)在镉致神经细胞凋亡中的保护效应。试验采用PC12细胞作为神经细胞模型,用7μmol/L Ad和10μmol/L镉(Cd)单独或联合处理细胞12 h,在显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,DCFH-DA作为荧光探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,JC-10作为荧光探针检测细胞线粒体膜电位变化,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3表达水平,Annexin V-FITC/PI双标染色法检测细胞凋亡率。结果显示,与Cd单独处理组相比,Ad与Cd共处理组损伤细胞数量减少,细胞活性显著升高(P<0.01),细胞ROS显著降低(P<0.01),线粒体膜电位显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.01),cleaved Caspase 3表达水平显著下降(P<0.01),细胞凋亡率显著下降(P<0.01),表明Ad能够抑制Cd诱导的PC12细胞凋亡。本研究可为预防和治疗Cd诱导的神经系统损伤药物的鉴定...     

钙稳态失衡在镉诱导大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中的作用

用不同浓度醋酸镉（0、5、10、20μmol／L）以及细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM（10μmol／L）单独或联合作用于大鼠大脑皮质神经细胞12h,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内[Ca2＋];、活性氧（ROS）水平以及线粒体膜电位（△ψm）。结果显示,与对照组相比,各镉染毒组细胞凋亡率、细胞内[Ca2＋]i和ROS水平显著或极显著升高（P〈0．05或P〈0．01）,△ψm显著或极显著降低（P〈0．05或P〈0O．01）。BAPTA-AM联合组与相应镉染毒组相比,细胞凋亡率、细胞内[Ca2＋]i和ROS水平降低,△ψm升高,部分组间差异显著或极显著（P〈0．05或P〈0．01）。结果表明,镉可诱导大脑皮质神经细胞凋亡,细胞内钙稳态失衡在镉诱导大脑皮质神经细胞凋亡中起着重要作用,凋亡机理可能与细胞内钙超栽引起ROS水平升高和△ψm下降有关。     

米托蒽醌通过活性氧诱导大鼠肝癌RH35细胞凋亡的研究

试验旨在探讨米托蒽醌（mitoxantrone,MTN）对大鼠肝癌RH35细胞毒性及其作用机制。以MTT法检测MTN的细胞毒性,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生,Western blotting检测相关蛋白的表达。结果显示,MTN时间和剂量依赖性地抑制RH35细胞的生长;15 μmol/L MTN作用于细胞24、48 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性地诱导凋亡细胞比率的增加及ROS的产生;ROS清除剂NAC可以极显著降低MTN诱导的RH35细胞的ROS的产生和凋亡率（P<0.01）;15 mmol/L NAC可以下调MTN诱导的caspase-3、Bax及CytC表达增加,上调MTN诱导的Bcl-2表达降低。结果提示,MTN通过增加细胞内ROS而诱导RH35细胞发生凋亡。     

乐果引起大鼠肝细胞凋亡的机理

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(0、3、10、30、100、300μmol/L),染毒122、4 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,探讨乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响。结果显示,肝细胞染毒12、24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3μmol/L组外,与对照组相比差异显著(P0.05或P0.01),且呈时间-剂量效应。3μmol/L组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3~100μmol/L随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300μmol/L组略有下降,除3μmol/L组外,与对照组相比均差异极显著(P0.01);Δψm除24 h 300μmol/L组外均出现持续下降。结果表明,低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和Δψm可能参与了这一过程。     

Mitoxantrone Induced Apoptosis through ROS in Rat Hepatama RH35 Cell Line

The assay was aimed to study the cytotoxicity and mechanisms of mitoxantrone (MTN) in rat hepatama cell line RH35. MTT assay was performed to assess the cytotoxicity of MTN, and microscope was used to observe cellular morphologic changes. Apoptotic ratio and intracellular ROS generation were measured by flow cytometric analysis. The protein expression was examined by Western blotting analysis. The results showed that MTN inhibited RH35 cell growth in a time-and concentration-dependent manner. The morphologic changes were observed in the cells, including cell shrinkage, membrane blebbing and apoptotic bodies when treated with 15 μmol/L MTN for 24 and 48 h. And MTN also induced the increase of apoptotic ratio and generation of ROS in a time dependent manner. In addition, the intracellular ROS generation ratio and the apoptotic ratio of MTN treated group were extremely decreased by the ROS scavenger NAC (P<0.01). The pretreatment of RH35 cells with 15 mmol/L NAC thoroughly reversed the MTN-induced enhancement of caspase-3, Bax and CytC level and attenuation of Bcl-2 level. In conclusion, MTN induced apoptosis in RH35 cells through increasing the generation of ROS.     

母鼠妊娠期铅镉联合暴露对新生鼠体内微量元素含量的影响及NAC的保护效应

为了研究母鼠妊娠期铅镉联合暴露对新生鼠体内微量元素Cu、Fe、Zn、Mn和Se及N-乙酰半胱氨酸(N-Ace-tylcysteine,NAC)的保护作用,35只怀孕SD母鼠被随机分为7组,即A组为对照组(饮用蒸馏水)、B组为铅组(300 mg/L)、C组为铅+NAC组(300 mg/L+20 mmol/L)、D组为镉组(10 mg/L)、E组为镉+NAC组(10 mg/L+20 mmol/L),F组为铅+镉组(300 mg/L+10 mg/L)、G组为铅+镉+NAC组(300 mg/L+10 mg/L+20 mmol/L).采用饮水染毒.染毒时间为21 d,分娩后应用电感耦合等离子体质谱仪(Inductively coupled plasma mass spec-troscopy,ICP-MS)检测新生鼠体内微量元素Cu、Fe、Zn、Mn和Se含量.结果表明,与对照组比较,各染毒组新生鼠体内微量元素Cu、Fe、Zn、Mn和Se含量均显著低于对照组(P<0.05).D组较B组降低明显,F组降低最为显著,铅镉联合表现协同毒性效应,镉在铅镉联合毒性损伤中发挥主要作用,与各染毒组比较,NAC保护组新生鼠体内微量元素Cu、Fe、Zn、Mn和Se含量均有不同程度升高,部分组间有显著差异(P<0.05),说明NAC对铅、镉致新生鼠体内微量元素平衡紊乱具有一定的保护作用.     

母鼠围产期铅暴露对仔鼠的氧化损伤及乙酰半胱氨酸的保护效应

为探讨发育期铅暴露所致仔鼠氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的保护效应,从母鼠怀孕开始通过饮水染铅至仔鼠21日龄断奶建立动物模型,测定断奶仔鼠脑组织和血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性和丙二醛(MDA)含量,并观察海马的组织结构变化。结果显示,染铅使出生后21d仔鼠脑组织和血清MDA含量极显著升高(P0.01),GSH-Px,SOD,AchE活性极显著降低(P0.01),血清CAT活性极显著降低(P0.01);NAC拮抗组与染毒组比较,血清和脑组织MDA含量极显著或显著降低(P0.01或P0.05),脑组织SOD活性显著升高(P0.05),血清SOD,GSH-Px,CAT,AchE活性极显著升高(P0.01),其余指标均差异不显著(P0.05)。组织学观察表明,海马神经细胞形态正常,组间未见明显病理组织学变化,超微结构可见染毒组部分神经细胞异常。结果表明,母鼠铅暴露可致仔鼠脑组织脂质过氧化损伤,NAC可提高仔鼠脑组织的抗氧化能力,对铅损伤具有一定的保护作用。     

Effects of aflatoxin B1 on mitochondrial respiration,ROS generation and apoptosis in broiler cardiomyocytes

Aflatoxin B1 (AFB1) develops various toxic effects in the liver by impairing mitochondrial function, inducing cell apoptosis. However, little is focused on its toxicity to broiler cardiomyocytes (BCMs). Here, the mitochondrial membrane potential (MMP), reactive oxygen species (ROS) generation, cardiac troponin T (cTnT) location, apoptosis induced by AFB1, and antioxidative genes were investigated in BCMs. It was found that AFB1 evoked intracellular ROS generation, and induced apoptosis in BCMs. AFB1 treatment resulted in increased percentage of apoptotic cells, increased location range of cTnT in cytoplasm, upregulated messenger RNA (mRNA) expression of nuclear factor erythroid 2‐related factor 2 (Nrf2) and downregulated mRNA expressions of Mn‐superoxide dismutase in BCMs. These findings suggested AFB1 treatment caused significant cardiomyocyte damage and cardiotoxicity, impairment of mitochondrial functions, activated ROS generation, and induced apoptosis, and probably was involved in the Nrf2 signal pathway in BCMs.     

Effect of Several Antioxidants on Thawed Ram Spermatozoa Submitted to 37°C up to Four Hours

Thawed ram spermatozoa were incubated at 37°C in the presence of dehydroascorbic acid (DHA), TEMPOL (TPL), N‐acetyl‐cysteine (NAC) and rutin (RUT), at 0.1 and 1 mm , in order to test their effects on sperm physiology. Cryopreserved spermatozoa from four rams were thawed, pooled, washed and incubated in TALP‐Hepes with 1 mm or 0.1 mm of each antioxidant, performing a replicate with induced oxidative stress (Fe²⁺/ascorbate). Motility (CASA), viability and mitochondrial membrane potential (flow cytometry) were analysed at 2 and 4 h. Lipoperoxidation (MDA production), intracellular reactive oxygen species (ROS) and DNA status (TUNEL) were analysed at 4 h. Antioxidants, except DHA 0.1 mm , decreased motility and kinematic parameters, but had little effect on viability or mitochondrial activity. Except 1 mm DHA, the antioxidants reduced ROS at 4 h. Moreover, NAC 1 mm , rutin and TEMPOL reduced ROS and DNA damage in the presence of oxidative stress. N‐acetyl‐cysteine, rutin 1 mm and TEMPOL reduced lipoperoxidation in the presence of oxidative stress. However, DHA did not affect lipoperoxidation. At 1 mm , DHA increased DNA damage in the absence of oxidative stress. Dehydroascorbic acid effects could arise from spermatozoa having a low capacity for reducing it to ascorbic acid, and it may be tested in the presence of other antioxidants or reducing power. Future research should focus in testing whether the inhibition of motility observed for NAC, rutin and TEMPOL is reversible. These antioxidants might be useful at lower temperatures (refrigerated storage or cryopreservation) when their protective effects could be advantageous.     

线粒体凋亡途径在锰致鸡支持-生精细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在锰致鸡支持-生精细胞凋亡中的作用。取对数生长期鸡支持-生精细胞,用含0、2、3、4mmol.L-1MnCl2的DMEM培养液,培养24h,采用吖啶橙-溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法检测鸡支持-生精细胞凋亡,流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm),Westernblot法检测胞浆内细胞色素C(Cytc)蛋白表达含量,分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9,3(Caspase-9,3)活性。用含MnCl2的DMEM培养液培养24h后,处理组细胞与对照组相比,鸡支持-生精细胞凋亡指数逐渐升高(P0.01);线粒体膜电位显著降低(P0.01);胞浆中Cytc蛋白表达量逐渐增加;Caspase-9,3活性逐渐升高(P0.01)。线粒体途径介导的凋亡是锰对鸡生殖毒性作用的主要机制之一。