肾上腺素能受体及其调控的研究进展

肾上腺素能受体及其调控的研究进展陈刚周光宏刘清（南京农业大学动物科技学院２１００９５）肾上腺髓质能够分泌具有生物学活性的儿茶酚胺类物质,包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺等,作为激素或神经传导递质,参与体内多数器官功能的调节。这些物质具有相似的结构...     

睾丸肾上腺素能受体和胆碱能受体的分布及神经递质对睾丸间质细胞增殖的影响

试验旨在研究不同发育时期小鼠睾丸肾上腺素能受体(β1AR、β2AR、β3AR、α1A、α1B和α1D)和胆碱能受体(M1、M2、M3、M4和M5)mRNA的表达,以及神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对发育期小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。RT-PCR结果表明,β1AR和β2AR mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,β3AR、α1A和α1B mRNA在小鼠发育早期的睾丸表达,在成年期睾丸不表达,α1D mRNA在睾丸发育的早期不表达,成年期表达;胆碱能受体M1R、M2R、M3R和M5R mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,而M4R mRNA主要在成年期表达。另外通过NE和Ach处理体外培养的发育期睾丸间质细胞,发现Ach处理组BrdU阳性细胞的数量明显增加(P＜0.01)。结果表明,肾上腺素能受体和胆碱能受体在小鼠睾丸的整个发育时期都表达,Ach可促进发育期小鼠睾丸间质细胞的增殖。     

鼠β2肾上腺素能受体基因的克隆及序列分析

利用PCR扩增出中国昆明鼠β2肾上腺素能受体基因，将其与pUCm—T载体在体外连接，转化E.coli DH5α宿主菌，利用α—互补筛选出白斑后，经PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定后，进一步将克隆的基因在NCBI核酸数据库中进行序列比较，确定鼠β2肾上腺素能受体基因已被克隆。     

猪β2-肾上腺素能受体基因的克隆与鉴定

β2－肾上腺素能受体（β2－adrenergic receptor,β2-AR)是β－AR的一种亚型。本研究根据猪的β2－AR cDNA序列设计了1对引物，以肝脏基因组DNA为模板，经PCR获取了一约1．3kb目的基因片段。将该片段克隆入pMD18-T载体，构建猪β2－AR基因重组质粒pMDAR。经PCR反应、酶切鉴定和序列分析证实β2－AR基因已成功克隆。为进一步研究β2－AR的功能、调控β2－AR和研制β2－AR型基因工程疫苗奠定了基础。     

成年大鼠睾丸去精索上神经对睾丸功能及肾上腺素能受体表达的影响

试验旨在研究精索上神经（superior spermatic nerve,SSN）对睾丸功能的影响,25只成年Wistar大鼠随机分为2组,试验组左右睾丸切除精索上神经,手术30 d后两组大鼠同时处死取样分析。结果显示,睾丸去精索上神经不影响睾丸指数的大小但使附睾尾精子数极显著降低（P＜0.01）,平均日增重显著增加（P＜0.05）。增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色结果显示,睾丸去精索上神经不影响曲细精管精原细胞和初级精母细胞的增殖,但影响曲细精管的形态和生殖细胞的规则排列。RT-PCR结果显示,睾丸去精索上神经明显上调β1AR mRNA的表达,下调β2AR mRNA的表达;另外切除精索上神经不影响睾丸3β-羟胆固醇脱氢酶（3β-HSD）mRNA表达,但显著抑制类固醇快速调节蛋白（StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）mRNA表达（P＜0.05）。结果表明,支配睾丸的精索上神经通过调节肾上腺素能受体β1AR和β2AR的表达及StAR和P450scc影响睾丸睾酮的合成和精子的发生。     

肾上腺素能α2受体对二花脸猪生长激素分泌的作用

给 6头去势二花脸公猪一次注射肾上腺素能α2 受体激动剂可乐宁 ( Clonidine,6μg/ kg)后 ,GH总体水平、基础水平、峰强度明显升高 ,分别增加 10 4 .10 % ( P<0 .0 1)、113.4 0 % ( P<0 .0 1)和 5 4 .5 0 % ( P<0 .0 1) ,并保持脉冲式分泌 ,但峰值出现在注射后 6 0 min左右 ,明显提前。饲喂半胱胺 ( CS)后第 4天静脉注射 Clonidine,则 GH分泌比对照组显著提高 ,但与单独注射 Clonidine和单独口服 CS相比较未见有显著差异 ( P>0 .0 5 )。结果表明 ,α2 受体激动剂 Cloni-dine可促进 GH分泌 ,且峰值出现时间明显提前     

人胚胎角膜的肾上腺素能神经纤维分布及其特点

用乙醛酸诱发灾光技术研究了14－30周胎儿眼结膜的肾上腺素能神经纤维的分布。发现角膜巩缘的肾上腺素能神经纤维主要与角巩膜的血管伴行，纤维数量随胎龄增加而增加，角膜基质层于16周以后有少量纤维，角膜内皮层和上皮层未发现神经纤维。     

β2肾上腺素能受体的研究进展及其在兴奋剂残留检测中的应用

β肾上腺素能受体属于G蛋白偶联受体的1种,能够与一系列内源或外源性肾上腺素能物质相互作用,激活受体并引起信号转导从而引发机体的生理化学反应。目前已经研究了β2肾上腺素能受体的结构活性、蛋白表达和检测应用,但是仍然因为7次跨膜结构的蛋白表达量低等特点,造成该受体的发展进程缓慢。本文重点叙述了β2肾上腺素能受体的结构以及活性氨基酸残基,分析目前该受体蛋白在真核和原核细胞表达的现状以及在β兴奋剂药物的残留检测中的应用,总结在β2肾上腺素能受体研究方面存在的问题和发展趋势。     

肾上腺素能β-受体兴奋剂Procaterol对肉仔鸡生产性能及胴体品质的影响

选用180只4周龄星布罗商品代肉仔鸡,随机分为4组(每组45只),日粮中分别添加0ppm、5.0ppm、10.0ppm、20.Oppm的Procaterol.以玉米-豆饼作为基础日粮.试验期4周.结果表明,给药组饲料转化率提高,但4周净增重各组间无显著差异;腿肌率提高,腹脂与皮下脂肪厚度显著下降;肌肉中蛋白质含量提高,脂肪含量无显著变化.以上结果表明,肾上腺素能β-受体兴奋剂Procaterol能明显地提高肉仔鸡的饲料转化率,降低胴体脂肪含量,增加蛋白质沉积.     

雌激素受体α在雌性大鼠脑中的表达

本试验利用免疫组织化学SP法,研究了雌激素受体α在大鼠脑中的表达.结果表明,ER_α免疫反应产物主要定位于神经元细胞核,部分区域出现阳性神经元和阳性突起,在海马CA1、CA2辐射层、齿状回、下托的分子层等出现阳性星形胶质细胞;ER_α在脑中表达广泛,免疫反应产物在端脑的隔外侧核、海马锥体细胞层、大脑皮质等,间脑的缰内侧核、下丘脑室旁核、弓状核、视上核等,中脑的动眼神经核,脑桥的脑桥核外侧部等为高密度;在端脑的尾壳核、杏仁中央核、海马CA4区,间脑的下丘脑室周核、缰外侧核等,中脑的黑质致密带,脑桥的脑桥被盖核等为较高密度;在问脑的视前室周核、丘脑后核、中脑的红核、脑桥的脑桥被盖网状核等为中等密度;在端脑的苍白球,间脑的无名质,无免疫反应产物出现.结果显示,雌激素在调节脑的认知和生殖内分泌过程中,ER_α可能起主要作用;雌激素可通过ER_α调节星形胶质细胞功能.     

SD大鼠层黏蛋白受体组织特异性的分布和表达

利用RT-PCR和SABC免疫组织化学染色的方法,对SD大鼠进行了层黏蛋白受体在mRNA和蛋白2个水平上分布和表达的检测.结果表明,层黏蛋白受体mRNA和蛋白在大鼠检测组织内均有表达,表达的细胞类型为大脑、海马和小脑的神经细胞及心肌细胞、肝细胞、淋巴细胞、支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和肾小管上皮细胞.为探讨层黏蛋白受体的分布、功能及在信号转导途径中的作用提供数据.     

α_2—肾上腺素能受体(adrenergic receptor)的生理作用

儿茶酚胺类的作用是通过α受体和β受体的介导实现的,α受体分α_1和α_2。α_2受体在生理方面的功能在最近才弄清楚。这些受体在体内广泛分布,可存在于突触前或突触后,在调节血压、清醒程度、胃肠道电解质的吸收、瞳孔大小和血糖浓度方面发挥着作用。     

SD大鼠层粘蛋白受体基因的克隆与序列分析

以大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层粘蛋白受体基因, 并将其克隆到pMD18-T Simple载体中进行测序,运用分子生物学软件对获得序列进行了分析.结果表明所克隆的SD大鼠层粘蛋白受体基因的ORF片段包含了朊蛋白基因的完整编码区,共888个核苷酸, 该基因内无内含子,编码295个氨基酸的前体蛋白,推测其相对分子质量约32.6 kD.与已报道的绵羊、家鼠、猪、牛、人相应序列作比较,发现其核苷酸序列和氨基酸序列具有较高的同源性.氨基酸序列分析表明,SD大鼠层粘蛋白受体的氨基酸点突变位点为V176M,G243E.研究结果为探讨层粘连蛋白受体基因的功能及其在疾病发生、发展过程中的作用提供了基础数据.     

液相色谱-质谱联用分析饲料中新型的β2-肾上腺素能激动剂——齐帕特罗

建立了饲料中齐帕特罗的液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测方法.液相色谱条件为Waters AntantisTM C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,3μm);柱温30℃;流动相为乙腈-0.2%甲酸(892,V/V);流速0.2 mL/min;进样量20μL.质谱条件为电喷雾离子源(ESI+),选择离子监测质荷比(m/z)为262、244、202、185带正电荷的准分子离子和碎片离子.齐帕特罗的线性范围为0.01～4μg/mL,最低定量检测限0.01μg/g,回收率为(90±10)%.     

1株H1N1亚型猪流感病毒的全基因组特征及其对小鼠的致病性

旨在了解河南省猪流感病毒的流行情况及其遗传进化和基因组特征。2018年4月,从河南省某一出现疑似流感症状猪群中采集鼻拭子样品150份用于分离病毒,对分离病毒的全基因组进行序列测定和分析。同时感染6周龄BALB/c小鼠,研究其对小鼠的致病性。结果显示,获得1株H1N1亚型病毒[命名为A/swine/Henan/NY20/2018（H1N1）]。遗传进化表明,其HA和NA基因属于欧亚类禽H1N1分支,PB2、PB1、PA、NP和M基因属于2009甲型H1N1分支,NS基因属于经典H1N1分支。HA蛋白的裂解位点序列为PSIQSR↓GL,具有低致病性流感病毒的分子特征,在小鼠肺和鼻甲有效复制并能引起肺组织病理学变化。本研究分离到1株3源重排H1N1亚型病毒,对小鼠呈现一定致病力,提示应进一步加强对SIV的监测。     

猪β_2-肾上腺素能受体初级克隆质粒的改造与鉴定

猪 β2 肾上腺素能受体 (beta2 adrenergicreceptor,β2 AR)基因初级克隆质粒 (pMDAR)在 β2 AR基因 5′端外侧含有 2个EcoRⅠ酶切位点。用EcoRⅠ酶切消化和T4DNA连接酶连接后 ,获得了具有EcoRⅠ单一酶切位点的改造质粒。对经过修饰后的质粒进行了多酶切和 β2 AR基因片段回切等方法鉴定。     

大鼠原代肝脏细胞的分离培养及其膜受体鉴定

本研究采用改良的两步胶原酶灌流法分离培养大鼠肝脏细胞,并对其进行了形态学观察、功能检测及表面受体的鉴定,以探索其短期培养的最佳功能状态。结果表明,平均每只大鼠可获取2.12×10⁸个肝脏细胞,平均活率达94.23%;光镜下观察发现肝脏细胞呈多角形并成片生长;对肝脏细胞的LDH、Alb和尿素进行连续检测,结果发现细胞离体培养第3天功能较好;Mab263-PE单抗鉴定结果显示,肝脏细胞生长激素受体功能健全尚未受损,为细胞信号转导等相关试验奠定了基础。