NaCl胁迫对黄瓜种子萌发的影响

[目的]研究NaCl胁迫对黄瓜（Cucumis sativusL.）种子萌发的影响,探讨盐胁迫影响黄瓜种子萌发的生理机理.[方法]采用培养皿发芽试验.供试黄瓜品种为津优一号.NaCl溶液浓度分别为0（CK）、30、60、90、120、150 mol/L.[结果]低浓度NaCl胁迫对黄瓜种子萌发的影响较弱,而高浓度NaCl胁迫对种子萌发起较强的抑制作用.不同浓度NaCl胁迫对黄瓜种子发芽的影响差异显著.在低浓度下,黄瓜种子发芽势和发芽率高于CK,而随着NaCl浓度的增大,对发芽的抑制作用明显增强.种子活力指数、发芽指数、胚根一级侧根数比发芽率对NaCl胁迫的反应更敏感.[结论]该研究对在盐碱地黄瓜种植和黄瓜耐盐育种都有重要意义.     

低温胁迫下水稻基因组DNA甲基化的MSAP分析

[目的]研究低温胁迫对水稻幼苗DNA甲基化水平及模式变化。[方法]以水稻幼苗为材料,利用66个不同的引物组合对来自对照(CK)、4℃低温胁迫1 d(T_1)、4℃低温胁迫2 d(T_2)、4℃低温胁迫3 d(T_3)和恢复2 d(T_4)的水稻DNA样品进行甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析,探讨低温胁迫和恢复后,DNA的甲基化水平及模式变化。[结果]甲基化水平分析表明,CK、T_1、T_2、T_3处理样本中总甲基化率分别为37.19%、33.79%、33.67%和32.67%。进一步分析表明低温胁迫处理导致水稻DNA总甲基化水平降低,然而恢复处理组(T_4)减缓了这种趋势。[结论]水稻基因组部分位点的甲基化可能参与了水稻对低温胁迫的响应。     

NaCl胁迫对黄瓜种子萌发及幼苗生长的影响

NaCl胁迫对黄瓜种子萌发及幼苗生长影响的试验结果表明:NaCl溶液浓度低于50 mmol/L时,对黄瓜种子的发芽率影响较小,而NaCl溶液浓度高于75 mmol/L时,对黄瓜种子的发芽有不同程度的抑制作用;黄瓜种子α-淀粉酶活性、幼苗地上部和根部鲜重以及根冠比(R/T)随着NaCl溶液浓度的增高,均表现为下降。幼苗叶片的过氧化物酶(POD)活性呈现先升后降趋势;丙二醛(MDA)含量在低浓度下缓慢上升,而在高浓度下急剧上升;NaCl溶液浓度低于50 mmol/L时,幼苗根系活力急剧下降,而高于此浓度时缓慢下降。     

莆田黑猪不同组织DNA甲基化的MSAP分析

为研究莆田黑猪不同组织间基因组DNA甲基化水平差异及各组织甲基化水平在不同生长发育阶段之间的变化规律,采用甲基化敏感扩增片段多态性(MSAP)方法检测了1、25和210日龄莆田黑猪的心脏、肝脏、肌肉、脂肪、耳和尾6个组织基因组DNA的甲基化水平.结果表明:心脏和肝脏组织的甲基化水平随日龄增长呈下降趋势,且日龄间的甲基化水平差异显著(P0.05);25日龄肌肉组织的甲基化水平与1日龄的差异不显著(P0.05),但显著高于210日龄(P0.05);25日龄脂肪和耳组织的甲基化水平显著高于1和210日龄(P0.05);3个日龄间尾组织的甲基化水平差异不显著(P0.05);3个日龄的肝脏与脂肪组织之间、肝脏与耳组织之间的甲基化水平均存在显著差异(P0.05),表明DNA甲基化在肝脏与脂肪组织之间、肝脏与耳组织之间存在组织特异性.     

不同光照周期下黄鳝不同组织DNA甲基化的MSAP分析

为研究光照周期对黄鳝不同组织的基因组DNA甲基化的影响,设置3个不同的光照时间(8、10和12h)处理,对黄鳝心、肝、脾、肾、肠、肌肉和脑等组织基因组DNA甲基化用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术进行分析。结果显示,不同组织基因组DNA对光照时间有不同的反应。其中,肌肉基因组DNA甲基化对光照周期的变化较为敏感,不同光照周期下肌肉基因组DNA总甲基化差异显著,光照周期为12h半甲基化和其他处理相比差异也很显著;肾脏和脑的基因组DNA甲基化对光照周期变化最不敏感,各处理组之间全甲基化、半甲基化和总甲基化差异都不显著;肝脏、肠、脾和心脏表现比较复杂,其中肝脏不同处理下基因组DNA半甲基化和总甲基化差异都不显著,光照周期为8h时,全甲基化差异显著;肠不同处理下基因组DNA全甲基化、半甲基化差异不显著,在光照周期为10h的处理组的总甲基化和其他处理组差异显著;脾脏在光照周期为10h和8h时全甲基化和总甲基化各处理组差异显著,在光照周期为12h时半甲基化和其他处理组差异显著;心脏在光照周期为10h时半甲基化和其他处理组差异显著。     

毛白杨MSAP体系优化及DNA甲基化的初步分析

首次利用MSAP技术开展毛白杨DNA甲基化研究。在优化选择性扩增体系的基础上,对毛白杨亲子代的CCGG位点甲基化相对水平、CCGG位点胞嘧啶甲基化模式的遗传变异进行了初步分析。结果表明:①引物H/M+3、引物E+A+2、dNTP、Taq酶、预扩增产物稀释倍数分别为0.03 nmol、0.03 nmol、0.20 mmol/L、1 U(或1.5U)、40倍时组成的20μL反应体系经PCR扩增后电泳,可得到品质最佳的银染谱带。②毛白杨CCGG位点甲基化相对水平约为26.75%～29.39%,CNG甲基化相对水平低于CG甲基化相对水平,子代的甲基化相对水平低于亲本的甲基化相对水平。③子代中发生遗传变异的CCGG位点数之比为1∶1。遗传自亲本的CG甲基化位点数高于遗传自亲本的CNG甲基化位点数,遗传自父本的甲基化位点数高于遗传自母本的甲基化位点数;子代甲基化位点的变异以去甲基化为主,发生CG甲基化变异的位点数与发生CNG甲基化变异的位点数之比为1∶1。     

NaCl胁迫对黄瓜种子萌发的影响

采用培养皿发芽法研究了NaCl胁迫处理对黄瓜种子萌发的影响。结果表明：NaCl胁迫浸种、水环境下发芽对黄瓜种子萌发的影响较小，只有在高浓度NaCl胁迫下，才对种子萌发起抑制作用。不同浓度的NaCl胁迫对黄瓜种子发芽的影响有显著差异；随着NaCl胁迫浓度的增大。对发芽的抑制作用明显增强。种子活力指数、发芽指数、胚根一级侧根数比发芽率对NaCl胁迫的反应更敏感。在225mmol／L NaCl胁迫下，黄瓜种子萌发对外源Ca^2 反应较为敏感，适量的外源Ca^2 (10mmol／L CaCl2)对盐胁迫有一定的缓解效应，浓度过高对发芽起抑制作用。适当时间的吸湿-回干处理能缓解NaCl胁迫对黄瓜种子萌发的抑制作用。     

瓜实蝇DNA甲基化的MSAP体系建立与优化

瓜实蝇[Bactrocera cucurbitae(Coquillett)]是中国重要的蔬菜害虫,但其DNA甲基化研究尚未见报道。甲基化敏感扩增多态性是研究DNA甲基化的重要技术之一。通过对酶切反应、连接、PCR扩增和引物筛选等条件优化,建立瓜实蝇MSAP反应体系,即:120μL酶切体系中加入10 U的限制性内切酶与600 ng基因组DNA,于37℃酶切反应过夜;220μL连接体系中加入T4连接酶1 U,HpaⅡ-MspⅠ-adapter接头50 pmol,Eco R I-adapter接头5 pmol,并于16℃反应12 h;3连接产物稀释后进行PCR预扩增和选择性扩增,再经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测结果。通过该体系筛选出适用于瓜实蝇基因组DNA甲基化多态性研究的6对引物;瓜实蝇MSAP体系为瓜实蝇的表观遗传学研究提供了技术支持。     

不同辣椒品种果实发育过程中DNA甲基化的MSAP分析

【目的】分析辣椒GB14和GB38果实发育过程中酶切位点的甲基化,为在分子水平上研究辣椒红素调控规律、在辣椒遗传育种中奠定理论基础。【方法】对辣椒果实发育成熟过程中的DNA甲基化修饰进行分析。【结果】DNA半甲基化条带比率与全甲基化条带比率均随着籽粒的生长发育而逐渐升高,两种辣椒果实绿熟期和红熟期基因组总体甲基化比例分别为36.51%、36.38%、35.57%和35.45%。对甲基化表现呈多态性变化的8个片段回收、测序分析表明,DNA甲基化发生的位点既存在于基因组的编码区,也存在于非编码区。【结论】在辣椒果实发育过程中,DNA甲基化修饰发生了巨大的变化;CCGG位点的半甲基化水平与辣椒红素积累呈正比。     

大麦不同组织成熟过程中DNA甲基化的MSAP分析

DNA甲基化参与调控生长植物发育。使用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)方法并结合毛细管自动电泳分析仪,对大麦(Hordeum vulgare L)的种子、根、茎、叶等4种组织在成熟过程中的DNA甲基化修饰进行了分析。结果表明,大麦不同组织在成熟过程中基因组总甲基化水平改变较小,但44.90%~65.17%的CCGG位点甲基化模式在不同组织在成熟过程中发生了改变。在大麦种子成熟过程中,CCGG位点半甲基化水平急剧升高,达到65.40%,全甲基化位点显著下降仅为13.39%,与其他组织的甲基化特征差异显著。结果显示,在大麦组织成熟的过程中,DNA甲基化修饰发生了巨大的变化。     

NaCl胁迫下腐植酸对黄瓜种子发芽特性的影响

试验以津春4号黄瓜(Cucumis sativus L.)为材料,用高活性腐植酸液剂和Na Cl处理黄瓜种子,研究Na Cl胁迫下腐植酸对黄瓜种子萌发的影响。结果表明,适宜浓度的高活性腐植酸液剂提高了黄瓜种子的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、胚根长、下胚轴长、胚根中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性,降低了丙二醛(MDA)的含量;其中高活性腐植酸600倍稀释液作用效果最佳。     

水稻干旱胁迫诱导DNA甲基化时空变化特征分析

 【目的】研究水稻抗旱导入系DK106和旱敏感轮回亲本IR64苗期和分蘖期干旱胁迫前后DNA甲基化的变化情况,并比较分析叶片和根部DNA甲基化变化特征,探讨DNA甲基化在水稻干旱胁迫反应中的作用。【方法】用甲基化敏感扩增多态性技术（methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP）和高效液相层析（high performance liquid chromatography,HPLC）方法分析DNA甲基化变化情况;从聚丙烯酰胺凝胶回收甲基化多态性片段并克隆测序及序列比对。【结果】MSAP分析结果显示,水稻基因组中约有20%的CCGG位点发生了胞嘧啶甲基化;水分胁迫导致DNA甲基化平均水平明显增加,其中根部增加幅度尤为明显;DNA甲基化水平及状态变化在品种间存在差异,同时具有时期及组织特异性。对干旱胁迫特异诱导DNA甲基化片段序列分析结果表明,基因编码区和非编码区发生DNA甲基化的频率基本相同。【结论】干旱胁迫反应过程中DNA甲基化表现出一定时空特异性和品种特异性,且与品种抗旱性差异相关。     

NaCl胁迫对萝卜种子萌发的影响

为探明盐胁迫对萝卜(Raphanus sativus L.)种子萌发的影响,用不同浓度的NaCl胁迫处理萌发期的萝卜种子。结果发现,低浓度(≤20 mmol/L)NaCl胁迫处理对萝卜种子发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数等有显著促进作用,但对胚根长度、胚芽长度、胚鲜重的促进作用不显著。NaCl显著抑制萝卜种子萌发的浓度为100 mmol/L,显著抑制胚根生长的浓度为80 mmol/L,显著抑制胚芽生长的浓度为100 mmol/L。萝卜种子萌发的耐盐浓度、耐盐半致死浓度和耐盐极限浓度分别为155.02、250.02和402.02 mmol/L。     

盐胁迫对黄瓜种子萌发特性的影响

对盐(NaCl)胁迫下黄瓜种子萌发特性进行了研究和品种间比较。考察了不同浓度盐处理下种子发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数及幼苗生长情况的变化。结果表明:盐胁迫下,各品种黄瓜发芽势、发芽率均呈总体下降趋势,个别品种低浓度下的发芽势和发芽率高于对照;随盐浓度升高,各品种发芽指数和活力指数均下降;发芽率、发芽指数和活力指数的受抑程度为:活力指数>发芽指数>发芽率。幼根生长受盐胁迫抑制明显,而低浓度盐处理促进了下胚轴和子叶生长的生长,从而表现为幼苗总重的增加。综合各指标对品种耐盐性进行评价,申绿64号、巴罗尼耐盐性较强,宝杨5号耐盐性较弱。     

NaCl胁迫对宽叶独行菜种子萌发的影响

对宽叶独行菜的种子进行了不同浓度的盐处理试验,结果表明:盐胁迫下种子萌发受到显著抑制,并且随着浓度增加其抑制作用越明显;宽叶独行菜种子萌发的NaCl临界浓度是200mmoL/L。     

NaCl胁迫对辣椒种子发芽特性的影响

以绿洲椒霸、日本天鹰椒、新优一号和高产懒椒王4个辣椒品种为材料,研究了NaCl胁迫对辣椒种子发芽特性的影响。结果表明:在低浓度NaCl(30mmol/L)胁迫下,绿洲椒霸、日本天鹰椒、新优一号和高产懒椒王4个辣椒品种的活力指数与对照相比均显著提高,侧根数分别比对照下降了4.7%、29.9%、51.3%、45.0%,绿洲椒霸和高产懒椒王的发芽势、发芽率、发芽指数和根长显著提高;高浓度NaCl胁迫(≥60mmol/L)对以上4个辣椒品种的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、根长和侧根数均有不同程度的抑制作用,并且随着NaCl浓度的增加,各指标抑制作用逐渐增强,其中日本天鹰椒和新优一号的降幅较小,而绿洲椒霸与高产懒椒王则有较大的降幅。     

NaCl胁迫及Cd2+对黄瓜和番茄种子发芽及生长的影响

针对NaCl胁迫黄瓜、番茄种子萌发的影响及在170 mmol/L NaCl胁迫下,不同浓度外源Cd 2+ 对黄瓜、番茄种子发芽的影响进行实验.其结果是,NaCl浓度在30～170 mmol/L时,对番茄和黄瓜种子发芽率、发芽指数影响不明显.在NaCl浓度170 mmol/L时,黄瓜的4项发芽指标均达到最高.在240 mmol/L NaCl胁迫下,黄瓜、番茄种子4项发芽指标值均显著下降.170 mmol/L NaCl胁迫下,当Cd 2+ 浓度在10 mmol/L时,能够提高黄瓜发芽率,促进黄瓜芽与幼苗的生长;当Cd 2+ 浓度达到50 mmol/L时,抑制幼根生长;外源Cd 2+ 对番茄的影响较大,当Cd 2+ 浓度为10 mmol/L时,活力指数为0;当Cd2+浓度为20 mmol/L时,发芽率为20;,侧根数全部为0.     

NaCl胁迫对菊苣种子萌发的影响

分别用0、50、100、150、200、250、300mmol/L的NaCl溶液对3种菊苣种子进行处理,并对发芽率、发芽势、根长、苗长和鲜重等生理指标进行研究。结果表明：种子萌发率与NaC1浓度呈明显的负相关。150mmol/L的NaCl浓度为菊苣种子耐盐半致死浓度,250mmol/L的NaCl浓度为菊苣种子耐盐极限浓度。100mmol/L的NaCl对菊苣种子萌发后的生长影响显著。