月季茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据.试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验.结果表明:简单玻璃化法保存时.不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5～6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS+0.15mol·L-1蔗糖)]装载30min,用PVS2(300g·L-1甘油+150g·L-1乙二醇+150g·L-1二甲基亚砜+0.4mol·L-1蔗糖+MS)于0℃下处理40min,然后液氮保存24h,在40℃水浴中化冻90s,用1.2mol·L-1蔗糖培养液洗涤,最后转入MS+6-BA1.0mol·L-1+IBA0.1mol·L-1上再培养,存活率高于53.3%.     

罗汉果茎尖玻璃化法超低温保存初探

对罗汉果试管苗茎尖玻璃化法超低温保存进行了初步研究。结果表明,切取继代15 d生长健壮的罗汉果试管苗茎尖,长2~3 mm,在25℃下用60%PVS2(玻璃化保护液)预处理40 min,再用100%PVS2在0℃处理50 min,更换新鲜PVS2后投入液氮保存24 h,于40℃水浴中快速解冻2 min,用MS+410.8 g/L蔗糖的液体培养基洗涤40 min,滤纸吸干后接种到MS+1.0 mg/L6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+0.7%琼脂粉+45 g/L蔗糖的固体培养基上,25℃暗培养7 d,转入正常光下培养。1周时的存活率最高可达94.56%。     

玻璃化法超低温保存甘薯茎尖

对甘薯离体茎尖玻璃化法保存技术进行了初步探究。结果表明,预培养2 d,100%的PVS2溶液0℃处理30 min,液氮冻存2 d,40℃快速化冻后用附加蔗糖1.2 mol/L的MS液体培养基洗涤20 min,接种在MS 6-BA1.5 mg/L NAA0.1 mg/L GA30.05 mg/L培养基上的茎尖成活率最高。     

玻璃化法超低温保存果树种质资源初探

超低温保存是果树种质资源的最佳保存方法,玻璃化冻存法克服了传统的超低温保存方法操作繁琐耗时,且需要程序降温仪等设备困难,并且在众多植物材料中取得了成功。     

玻璃化法超低温保存香石竹种质资源的研究

以香石竹"云恋蝶"离体茎尖为试材,研究玻璃化法对香石竹茎尖的高体超低温保存.通过正交设计试验对影响存活率的主要因素(预培养培养基中蔗糖浓度、预培养时间、装载时间和PVS2处理时间)进行分析,结果表明,预培养1 d,预培养基中蔗糖浓度为0.5 mol/L,装载40 min,PVS2液处理40 min,液氮处理1 d,在40℃水浴化冻后的香石竹茎尖,成活率达44.13%,且超低温再生苗与其常温苗的生理生化指标无显著差异.本试验成功地建立了香石竹种质资源玻璃化法超低温保存的技术,为香石竹种质资源的长期保存提供了一条有效途径.     

大苞鞘石斛原球茎超低温保存中生理生化变化1）

以继代培养60 d的大苞鞘石斛原球茎（矱＝2～3 mm）为材料,对比研究低温高渗（HT＋CA）和室温高渗（HT-CA）2种预处理方法对原球茎玻璃化法超低温保存冷冻前含水量以及预处理、脱水和解冻3个关键步骤中相对电导率、丙二醛质量摩尔浓度、可溶性糖和可溶性蛋白质量分数的影响,并结合显微结构观测和组织化学分析揭示高渗预处理影响超低温保存后原球茎相对存活率的生理生化基础。结果表明：在冷冻前,干样含水量显著降低,当干样含水量下降为1．06 g? g-1时,冻后相对存活率达最大值,为46．6％;预处理和脱水显著地提高了相对电导率;脱水和解冻使丙二醛质量摩尔浓度显著升高;可溶性糖和可溶性蛋白质量分数呈显著上升后明显下降的单峰变化曲线。多元相关分析表明,丙二醛质量摩尔浓度与相对存活率之间呈极显著负相关（相关系数为-0．992）,膜脂过氧化作用是影响大苞鞘石斛原球茎冻后成活的关键因素之一。显微结构观察到细胞膜在预处理和脱水过程中受到明显破坏;组织化学分析显示淀粉粒和蛋白质的分布多集中在未受损伤的顶端分生组织中,分布变化呈先增多后减少的趋势,这与生理生化分析的结果是一致的。     

玻璃化超低温保存对怀菊花再生苗形态及生理的影响

以怀菊花中的优良品种小黄菊为试材,研究了玻璃化超低温保存对怀菊花再生苗形态及生理指标的影响。结果表明,与常温苗相比,继代培养的玻璃化超低温保存再生苗前期(0～15 d)生长较慢,中期(15～30 d)开始快速生长,至45 d时,二者长势基本一致;叶片的可溶性糖、可溶性蛋白质和叶绿素含量均没有显著的差异。玻璃化超低温保存能够保持其形态和生理的稳定性。     

玻璃化法及小液滴玻璃化法对香石竹茎尖超低温保存效果的影响

[目的]探索更有效的香石竹茎尖超低温保存方法,为球宿根花卉的超低温保存提供相关技术支持。[方法]以香石竹茎尖为材料,研究预培养条件(蔗糖浓度、预培养时间)、玻璃化处理时间和玻璃化方法(常规玻璃化法、小液滴玻璃化法)对香石竹茎尖超低温保存效果的影响。[结果]在0.5 mol/L的蔗糖浓度培养基上预培养5 d香石竹茎尖成活率最高,为88.3%;玻璃化处理80 min成活率最高,可达86.7%;常规玻璃化法成活率及再生率在80%以上,小液滴玻璃化法成活率可达90%以上且全部再生,小液滴玻璃化法再生天数比常规玻璃化法少3~5 d。[结论]小液滴玻璃化法是一种有发展前景的超低温保存方法。     

大豆花叶病毒超低温保存对毒力的影响

大豆花叶病毒叶片分5个不同时期,冰冻于-86℃超低温冰箱中,次年取出接种于感病品种上。经测定,在-86℃超低温保存状态下,1个月以内能保持较强的病毒毒力,可以直接作为大豆花叶病毒毒源用于抗性鉴定接种。8～9个月毒力明显降低。在用于抗性鉴定之前,应先增加一次活体繁毒程序。     

两种乙烯抑制剂对文心兰原球茎的培养效果

以文心兰原球茎(PLB)为外植体,分别接种于改良MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+200 mg/L椰子汁+不同浓度的乙烯抑制剂(AgNO3或CoCl2)的增殖培养基和改良MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+200 mg/L椰子汁+不同浓度AgNO3的壮苗培养基中,研究AgNO3和CoCl2对文心兰原球茎的培养效果.结果表明,在培养基中附加适宜浓度的AgNO3和CoCl2均能提高文心兰原球茎的增殖系数,其中AgNO3的最佳浓度是20mg/L,CoCl2的为10mg/L.研究还发现,AgNO3有促进原球茎分化的作用,其促进分化的最佳浓度是1mg/L.     

霍山石斛原球茎的诱导及培养方式对原球茎增殖的影响

以霍山石斛试管苗带节的茎段为材料,研究不同激素组合对霍山石斛原球茎诱导的影响,并比较4种不同培养方式对霍山石斛原球茎增殖的影响。结果表明,生长物质2,4-D是霍山石斛原球茎诱导的关键因子,霍山石斛原球茎诱导的适宜培养基为Knudson 2,4-D 0.1 mg.L-1 KT 0.05 mg.L-1;霍山石斛原球茎增殖培养阶段,主要采用液体振荡培养方式,适时转接于固体培养基上交替培养,调节原球茎生长状态,采用这种改进的培养方式生产的原球茎可用于生物反应器的大规模培养。     

抗氧化剂减缓长期继代蝴蝶兰类原球茎衰老及生理指标变化

为减缓长期继代蝴蝶兰类原球茎增殖、萌发能力降低,在培养基中添加抗氧化剂继代类原球茎24个月,观测类原球茎增殖能力、成活率及萌发率,并分析其生理学指标。结果表明:100 mg/L半胱氨酸与8.0 g/L甘露醇组合为适宜抗氧化剂浓度;在培养第24个月,处理组每瓶鲜重较对照组显著提高,萌发率极显著提高;培养期间对照组和处理组类原球茎的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性均有不同程度的下降,处理组总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性较对照极显著提高(主要在第16个月),对照组与处理组叶绿素水平均变化不明显。     

蝴蝶兰类原球茎增殖和脱分化的研究

培养基添加物、切割方式、植物生长调节剂对从蝴蝶兰花梗芽诱导的类原球茎（PLB）的增殖有明显的效应。粉红品系Hi、T5、T10以马铃薯添加物为适宜；白花品系1、D以苹果匀浆添加物为适宜。切割可以刺激形成新的PLB，横切方式更有利于新PLB的形成。较高的蔗糖含量（6％）和植物生长调节剂组合（BA0．01mg／L＋2．4-D0．1mg／L）能有效促进PLB的脱分化，形成类愈伤组织。     

微波复温对玻璃化冻存大鼠胚脑细胞活性的影响

以孕17～19 d的SD大鼠为材料,对胚脑细胞进行玻璃化深低温保存,在冻存3、10、20、30、60d后,胚脑细胞样品分别采用常规的38℃水浴复温和微波复温即在300mL 10℃水中,控制微波功率为800 W,频率2450MHz,复温时间80 s.检测胚脑细胞的功能变化,比较两种复温方法对细胞活性的影响.结果表明:胚脑细胞玻璃化冻存3～30 d,细胞的回收率、存活率、细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性都有下降的趋势,过氧化氢(H2O2)含量显著增加,但冻存30 d后这些指标保持基本稳定,与第60 d比较无显著差异(P＞0.05).微波复温组的细胞存活率,细胞内SDH、SOD的活性高于水浴复温组,细胞内H2O2含量明显低于水浴复温组.说明微波复温能够提高复温速率,对胚脑细胞的损伤要低于水浴复温.     

植物生长调节剂对3个大花蕙兰(Cymbidium hybridium)品种类原球茎及不定芽诱导的影响

研究了多种植物生长调节剂(Plant growth regulator,PGR)对3个大花蕙兰品种‘金色年华’、‘绿洲’和‘华尔兹’类原球茎(Protocorm-like body,PLB)和不定芽诱导的影响。结果表明:PGR在一定浓度下能促进类原球茎的产生,MS培养基上PLB诱导的最适PGR配比为BA 4 mg/L+NAA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+TDZ 0.2 mg/L,增殖系数分别为11.12、9.65和7.54,与对照(BA 4 mg/L+NAA 0.5 mg/L)相比差异达到极显著水平。选取PLB诱导率最低的品种‘华尔兹’建立诱导不定芽的离体再生途径,筛选出不定芽诱导的最佳PGR配比为BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+PIC(毒莠定,Picloram)1 mg/L,平均增殖系数为5.08。于MS培养基中添加NAA 0.2 mg/L+HMI(恶霉灵,Hymexazol)2 mg/L,4 d时的生根率高达85%。试验表明:大花蕙兰通过类原球茎和不定芽的诱导均能实现产业化繁殖种苗的目的,前者增殖速度快,后者则再生植株生长势强、驯化移栽易于成活。     

蝴蝶兰类原球茎分化苗生根培养基的筛选

以银斑蝴蝶兰(Phalaenopsis schilleriaria)花梗切段诱导并增殖后的类原球茎分化苗为材料,以培养基种类、NAA、IBA、pH值、蔗糖为试验因子,每因子设置4个水平,以不同培养基的原球茎生根数为测定指标,通过L16(45)正交试验,筛选出适宜蝴蝶兰类原球茎分化苗生根的培养基,即white基本培养基附加NAA O.3～0.5mg/L、IBA 0.3 mg/L、蔗糖30～40 g/L,pH值调至4.O～4.5.     

文心兰茎尖诱导原球茎的影响因子研究

以文心兰无菌幼苗茎尖为试材,研究了基本培养基、植物生长调节剂、碳源、培养基pH值及茎尖放置方式对原球茎诱导的影响。结果表明:1/2MS为原球茎诱导的适宜培养基,0.1 mg/L TDZ最适合原球茎诱导且无不定芽分化、诱导率达80%,30 g/L蔗糖是原球茎诱导的适宜碳源,培养基pH值为5.2时原球茎诱导效果最佳,茎尖竖直放置比水平放置更有利于原球茎诱导。     

外源一氧化氮对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响

以硝普钠（SNP）为一氧化氮（NO）供体,研究了不同浓度的外源NO对铁皮石斛原球茎生长、叶绿素含量、蔗糖合成酶（SS）活性和多糖积累的影响。结果总体表现为低浓度的SNP有利于铁皮石斛原球茎的生长,而高浓度的SNP可以促进多糖的合成。在添加0.50 mmol·L-1SNP的培养基中培养28 d时其干质量比对照高36.9％,总叶绿素含量在14 d时为对照的1.33倍;在添加1.00 mmol·L-1 SNP的培养基中培养7 d时其多糖含量为对照的1.59倍,同时SS活性显著升高。综合多糖产量来看,0.50 mmol·L-1SNP效果最佳,在处理期间显著高于其他处理,且对其干质量、叶绿素含量、SS活性和多糖积累均有促进作用。添加NO清除剂（cPTIO）后,铁皮石斛原球茎的生长、SS活性和多糖合成受到抑制。     

蝴蝶兰类原球茎液体培养中用秋水仙素诱导多倍体

采用0.05%、0.10%和0.20%3种浓度的秋水仙素分别对液体培养过程中的蝴蝶兰类原球茎进行1、3和7 d的诱变处理,考察各处理蝴蝶兰类原球茎的生长状态、组织学特征及其分化成苗的状况,并对多倍体进行鉴定。结果表明:不同浓度秋水仙素对蝴蝶兰类原球茎的生长状况均产生一定影响,类原球茎相对膨大,表面粗糙,呈暗绿色,浓度越大、处理时间越长,影响越明显;不同浓度秋水仙素诱变时间长短与类原球茎细胞内部结构发生变化的程度关系密切;秋水仙素处理后的类原球茎分化苗周期增长,成苗率降低;不同处理的多倍体诱导频率不同,最高诱变率可达30.0%;多倍体在形态、细胞组织学上与二倍体差异明显,细胞核变大,染色体数目加倍。     

两种石斛多糖的抑菌作用研究

[目的]探讨铁皮石斛多糖和金耳石斛多糖在体外对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用。[方法]采用滤纸片抑菌圈法研究2种石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用。[结果]铁皮石斛多糖对大肠杆菌抑制作用最强,最小抑菌浓度（MIC）为0.5%,抑菌圈直径为15.8 mm;金耳石斛多糖对枯草芽孢杆菌抑制作用最强,MIC为0.5%,抑菌圈直径为12.8 mm。[结论]体外条件下,铁皮石斛多糖对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用,但对金黄色葡萄球菌无抑制作用;金耳石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌均有抑制作用。