加酶饲料中木聚糖酶检测的影响因素及方法

综述了加酶饲料中木聚糖酶检测的影响因素,并在丹磺酰氯（DNS）还原糖法的基础上提出了酶活梯度曲线检测法的概念,以期为饲料中木聚糖酶的检测方法提供可行性参考。     

一株可降解纤维素内源真菌的产酶条件优化及酶学性质分析

利用前期从香樟叶片分离出来的1株可降解纤维素的内源真菌(Colletotrichum gloeosporioides)进行液体发酵以分析其纤维素酶的酶活力.采用DNS还原糖法测定菌株液体发酵产生的粗酶液的纤维素酶活力,对发酵条件进行了优化,并对其纤维素酶的酶学性质进行了分析.结果表明,菌龄4d、pH值为4、温度35℃、转速200 r/min、碳源为滤纸、氮源为(NH4)2SO4是最佳产酶发酵条件,最大CMC酶活达到0.263 U/mL,滤纸酶活0.057 U/mL;酶促反应最佳pH值和温度分别为5、55℃;该纤维素酶(CMC酶)酸碱稳定性较好,不耐50℃以上的高温.     

大麦β-葡聚糖的制备研究

采用酶解的方法对大麦中β葡聚糖进行分离制备,β葡聚糖的提取率为2%。DNS法和考马斯亮蓝法检测提取品无还原糖和蛋白质。与标准的β葡聚糖进行比较,可作为底物对β葡聚糖酶活性测定。     

木聚糖酶体外酶解小麦麸皮相关技术参数研究

木聚糖酶可以降解饲料中木聚糖,消除其抗营养作用,提高饲料消化利用率。本试验采用还原糖法研究了不同酶解时间、温度、pH值及不同酶浓度条件对木聚糖酶酶解小麦麸皮效果的影响,并在模拟动物胃环境条件下研究酶解麸皮的效果。结果表明,木聚糖酶对麸皮酶解的最适温度为50℃,最适pH为5.5;最适酶添加浓度在0.02 I U.mL-1,最适反应时间为20 min,经胃蛋白酶处理4 h后还原糖释放量下降不大,处理时间对酶活的影响不明显。     

利用还原糖法测定木霉菌产几丁质酶特性

分别以几丁质和胶态几丁质为唯一碳源对木霉菌（Trichoderma spp.)进行液体发酵培养，发酵上清液与胶态几丁质混合，37℃恒温水浴30min，加入3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS），沸水浴10min；通过液体的颜色变化检测是否存在还原糖，进而确定木霉产几丁质酶特性。采用此种方法筛选产几丁质酶木霉菌株，结果更为直观、准确。     

木聚糖酶高产菌株的诱变选育及产酶条件的研究

试验对黑曲霉进行紫外诱变,结合透明圈法和DNS法从中筛选出一株酶活较高的突变株N86,并对其液体发酵培养基组分进行研究。结果表明,突变株N86的液体发酵培养基最优成分为:麸皮2g,硫酸铵1.0%,葡萄糖0.1%,磷酸二氢钾0.2%,七水合硫酸镁0.05%,吐温-80为0.1%,培养基pH6,250mL三角瓶装液50mL,突变株酶活最高达139IU·mL-1,产酶高峰在72h左右。     

鼠李糖脂二糖脂强化酶解木质纤维素

将经过纯化的鼠李糖脂二糖脂添加于纤维素酶酶水解试验中,以稻草、竹叶为底物,分析水解过程中纤维素酶酶活(以FPA计)及还原糖浓度的变化特征,探讨和分析鼠李糖脂二糖脂对稻草和竹叶中木质纤维素水解产还原糖能力、纤维素酶活的稳定性、发酵液表面张力和pH值的影响作用.结果表明,添加鼠李糖脂二糖脂对木质纤维素类底物酶水解过程中还原糖浓度的增加、酶活稳定性的提高有明显的促进作用,并且其促进作用随着表面活性剂添加量的适量增加而增强,当添加量为0.24%时,稻草和竹叶还原糖的产量分别提高了17.19%和27.68%.此外,水解反应结束后,加入鼠李糖脂二糖脂的水解液表面张力值显著降低,且随着添加量的增高而降低,当添加量为0.24%时,可分别降至63.4和60.8mN·m~(-1)左右,而pH值的变化微小.     

产几丁质酶细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

采用胶体几丁质平板产生透明圈法,从竹林附近的土壤中分离得到一株高产几丁质酶的优良菌株,以胶体几丁质为反应底物,对其所产的几丁质酶粗酶性质进行了初步研究。结果表明,该酶最适p H 7.5,在p H 6.5~9.5的缓冲液中放置12 h后,残余酶活仍在60%以上,在p H 7.0~8.5的缓冲液中残余酶活仍在80%以上,说明该酶在中性和碱性条件下具有较好的稳定性;该酶在30℃时酶活最高,在低于60℃的处理条件下残余酶活仍在80%以上,且80℃处理后仍有37%的残余酶活,说明该酶的热稳定性较好;配制蟹壳培养基发酵该菌,发现该菌能直接降解蟹壳产生壳寡糖,且每克蟹壳降解后可产生5.3 mg还原糖。通过16S r DNA基因序列比对,鉴定该菌为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。     

大麻种子萌发时总糖和还原糖含量的动态变化及其检测方法优化

以工业大麻品种云麻1号和M641萌发过程中的种子为实验材料,对DNS法(3,5-二硝基水杨酸法)测定还原糖的条件进行了研究,并采用蒽酮法测定总糖含量,分析了大麻种子在萌发过程中总糖和还原糖的动态变化。结果显示,DNS法测定还原糖的最佳检测条件为:检测波长530 nm,DNS用量2 mL,显色时间7 min。在种子萌发过程中还原糖和总糖的含量表现出先下降后上升,但整体呈上升趋势,其中,云麻1号和M641的总糖含量总体升幅分别为158%和78%,还原糖含量总体升幅分别为671%和703%。本研究探明了大麻种子萌发过程中总糖和还原糖含量的变化,可为大麻种子萌发机理研究提供参考,同时也可为今后大麻植物及种子中的还原糖和总糖的测定提供借鉴。     

利用3,5-二硝基水杨酸法测定菜用甘薯叶中的多糖含量

采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法对菜用甘薯叶片还原糖和总糖的吸收光谱、测定和提取条件进行研究,以间接测定多糖含量。结果表明,菜用甘薯叶片中还原糖的最适检测波长为493 nm,DNS显色剂用量为2.0 mL,显色反应时间为10 min,显色反应后静置时间10 min。还原糖及总糖样品液提取水浴温度为100℃,水浴时间为30 min;总糖样液酸解时盐酸用量为2.0 mL,沸水浴时间为20 min。此方法精密度、重现性和回收率符合实验要求,可准确测定菜用甘薯叶片中的多糖含量,实现了对菜用甘薯叶片中还原糖、总糖和多糖含量的同时测定。     

淡紫拟青霉MD1几丁质酶活性测定

应用胶体几丁质平板透明圈法和DNS法测定了淡紫拟青霉MD1的几丁质酶活性,首次获得淡紫拟青霉在胶体几丁质平板上的透明圈,DNS法测定MD1几丁质酶活性结果表明,粗酶液无论是否有几丁质诱导,MD1菌株的几丁质酶活力均在第7 d最高,而且几丁质诱导的粗酶液酶活明显比同期未经几丁质诱导的粗酶液酶活高.     

少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因的克隆及生物学活性

为弄清少孢节丛孢菌几丁质酶的生物学功能,对少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因进行克隆及分子特征分析,并在大肠埃希菌中进行诱导表达;采用DNS还原糖法检测经镍柱纯化的重组几丁质酶活性,将其作用于秀丽隐杆线虫幼虫,分析其生物活性。结果显示,AO-483基因编码309个氨基酸,与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)的几丁质酶AO-483基因序列的同源性为96.88%,氨基酸序列同源性为97.73%;AO-483含有1个Glyco-hydro-18结构域,位于20~297位氨基酸,属于糖苷水解酶18家族,还含有特征序列GMLGG和LDGLDLDVE;三级结构为典型的三磷酸异构酶桶形结构。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白AO-483分子质量约为52 ku,与预测大小一致;Western blot分析证实,该重组蛋白能与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆血清抗体发生特异性反应。经DNS还原糖法检测,该重组几丁质酶活性为223.31 U·mL^-1;重组几丁质酶对秀丽隐杆线虫Ⅰ期和Ⅳ期幼虫有较强的降解活性。     

亚临界芝麻饼粕中糖类与蛋白质的综合利用研究

为充分利用亚临界芝麻饼粕中糖类和蛋白质,以可溶性糖质量浓度和产率为考察指标,选择最佳工具酶酶解芝麻饼粕中的糖类,在单因素试验基础上,采用响应面试验对酶解工艺条件进行优化,制备可溶性糖,随后利用碱提酸沉法从酶解后的芝麻饼粕中提取芝麻蛋白质。结果表明,酶解制备可溶性糖的最佳工艺条件为:采用α-淀粉酶与纤维素酶(酶活力之比为1∶1)组成的复合酶、酶解温度37.0℃、酶解时间2.5 h、pH值5.0、料液比5%、加酶量69.4 U/g,芝麻中可溶性糖产率达86.8%。在pH值10.5、温度45℃、料液比5.6%、酶解时间20 min的工艺条件下,对酶解后得到的芝麻饼粕沉淀采用碱提酸沉法提取蛋白质,蛋白质的提取率为41.2%,纯度为86.5%。以上研究证实,酶解结合碱提酸沉可以实现芝麻饼粕中糖类与蛋白质的综合利用,为亚临界芝麻饼粕的综合开发开辟了新的途径。     

紫薯浆制备及酶解工艺的研究

对于紫薯饮料加工的研究,首先要制备紫薯原浆。由于紫薯中含有大量淀粉、糖类和纤维素等物质,导致打浆后不易过滤,直接调配易产生混浊或分层沉淀,制成饮料后稳定性差等现象。因此,研究紫薯饮料的制备工艺问题,首先要解决紫薯浆中淀粉、糖类等物质的处理问题。一般解决该类问题有两种方法:一是过滤去除;二是将其降解为低分子的可溶性物质。由于在打浆过程中加热步骤会使淀粉糊化,不易过滤,因此本文考虑采用饮料加工中常用的酶解方法来解决饮料分层的问题。酶解法制备饮料的相关研究已有很多报道,但来源不同的淀粉和糖类,酶解条件也会有所不同,这就需要进行专门的筛选和研究。因此,本节将采用高温α-淀粉酶酶解紫薯浆液,以还原糖含量为指标,通过研究酶解温度、时间、酶量及pH值等条件,得到适宜的酶解参数,并综合考虑加工工艺,提高酶的作用效率。     

响应曲面法优化板栗酶解工艺研究

以板栗为原料研究了板栗浆的酶解工艺,通过单因素试验,对影响板栗酶解工艺的因素酶加量、料液比、温度、时间、p H值进行研究。根据单因素试验结果,采用Box-Behnken试验设计和响应面分析建立还原糖含量的二次多项式数学模型,确定了影响因素依次为加酶量温度时间p H,得到的最佳酶解工艺条件为α-淀粉酶的添加量0.3%,料液比(g∶m L)1∶4,温度65℃,p H值6.5,酶解时间60 min,还原糖含量(DE值)可达14.56%。     

紫苏梗酶解糖化条件优化

[目的]研究复合酶制剂催化水解紫苏梗的适宜条件,为紫苏梗生物质资源化利用提供技术支持.[方法]选用质量比4:25:12的纤维素酶、木聚糖酶和漆酶为复合酶制剂,在单因素试验的基础上,采用响应曲面法,以还原糖含量(Y)为响应值,建立紫苏梗水解糖化的数学模型和优化其工艺参数,并探究复合酶制剂投加量(A)、酶解时间(B)、酶解温度(C)和pH(D)4个因素对复合酶制剂催化水解紫苏梗组织纤维的影响.[结果]建立的紫苏梗催化水解二次多项回归方程为Y=107.28+7.26A+6.88B+3.09C-1.68D-20.57A2-19.41B2-18.42C2-28.26D2-3.63AB-4.98AC-2.93AD+1.93BC-1.20BD-1.33CD,其中复合酶制剂投加量对紫苏梗还原糖含量影响极显著(P<0.01),酶解时间影响显著(P<0.05).复合酶制剂催化水解紫苏梗的最佳工艺条件为:在复合酶制剂投加量1.0 g、酶解温度45℃、pH 5的条件下酶解5.4 h,可水解产还原糖108.8 mg/g,与预测值相差0.1 mg/g.[结论]采用响应曲面法优化获得的复合酶制剂催化水解紫苏梗产糖工艺,具有试验周期短、耗能低等优点,建立的数学模型对优化工艺具有可行性,可用于实际预测.     

酸酶双解稻草纸浆制备燃料乙醇的新工艺

研究酸酶双解稻草纸浆、发酵制备燃料乙醇的新工艺,考察时间、温度、底物浓度、催化剂用量等因素对酸解和酶解过程的影响。通过对酸酶解液及残渣成分分析,考察稻草纸浆降解产物中糖含量的变化趋势。结果表明,在170~180℃、液固比20 mL∶1 g、硫酸质量分数为2.4%、反应2 h酸解,还原糖得率为28.9%;在50℃、酶用量80 U/g、底物质量浓度0.01 g/mL、反应30 h酶解,还原糖得率为67.1%。酸酶解总还原糖得率62.6%;稻草纸浆降解液经发酵制得乙醇质量浓度为26.6 g/L,乙醇得率为49%,达到理论转化率的96%,转化率最高为0.28 g/g(乙醇/稻草纸浆)。     

高产葡聚糖酶微生物的分离筛选

β-葡聚糖是饲料谷物中的主要成分之一,为了帮助动物摄取后更好的消化吸收,选择高产β-葡聚糖酶的微生物作为添加剂以提高饲料的利用率十分必要。从丁香树下土壤中分离具有产β-葡聚糖酶的微生物,通过DNS法测定其产酶活,筛选酶活较高的菌株,测定其生长曲线,并采用分子生物学方法对其进行初步鉴定。结果显示：分离得到3株高产β-葡聚糖酶的菌株,其中菌株D-1酶活力最高可以达到103.67 U·m L^-1。通过对该菌株的生长曲线测,得知其对数生长期在8～24 h。对其进行16S r RNA扩增并构建系统发育树,发现D-1菌株与芽孢杆菌Bacillus sp.同源性达到了99%以上,与蜡样芽孢杆菌聚为一个分支,确定该菌属于蜡样芽孢杆菌。综上,分离菌株可为高产β-葡聚糖酶微生物提供种质资源。     

七味白术散总苷含量测定方法的探索与优化

以七味白术散总苷酸解前后还原糖的差值表征七味白术散总苷的含量,对3,5-二硝基水杨酸法(DNS)中的DNS用量、显色时间、显色温度和酸解时的硫酸浓度、酸解温度、酸解时间、料液比进行单因素分析,并进行方法学考察,以建立DNS法测定七味白术散总苷含量的检测分析方法.结果表明:DNS法测定七味白术散总苷含量的最优条件为检测波...     

响应面法优化鱿鱼内脏酶解液与还原糖美拉德反应工艺

[目的]对影响鱿鱼内脏酶解液与还原糖美拉德反应的因素进行优化,得出最佳的美拉德反应条件。[方法]通过Box-Benhnken响应面法优化鱿鱼内脏酶解液与还原糖美拉德反应条件,根据单因素试验设计中心组合试验,以综合感官评分为指标,采用响应面分析法确定最优工艺参数。采用气相色谱和质谱联用技术对鱿鱼内脏酶解液与还原糖的美拉德反应风味物质进行分析。[结果]试验表明,鱿鱼内脏和还原糖美拉德反应的最适条件为pH 8.05、反应温度112℃、反应时间59 min、底物蛋白浓度25.3%,在此条件下,反应产物综合感官评分为2.50,和预测值2.46相比,相对误差约为1.62%。对鱿鱼内脏酶解液与还原糖的美拉德反应风味物质的分析,共检测出53种风味化合物。[结论]研究不仅提高了鱿鱼下脚料的利用价值,也开发了新的食品调味剂,具有极大的经济和社会价值。