应用DGGE分析三疣梭子蟹养殖塘底泥细菌的多样

将传统的菌落菌体形态分类方法与分子生物学方法相结合研究了三疣梭子蟹养殖塘底泥中一个细菌类群的多样性。首先采用平板稀释法对三疣梭子蟹养殖塘底泥中的细菌进行分离与纯化,根据各菌株的菌落形态特征初步将118株分离物分为8个类群,其中最大的一个类群的菌落基本特征为圆形、边缘整齐、表面凸起、菌落有光泽,对该类群的细菌多样性分析表明,通过芽孢染色可将产芽孢菌和不产芽孢菌区分开,不产芽孢菌根据其菌体形态又分为3个亚群,其中卵圆形细菌是最大的一个亚群,共有16株。应用PCR-DGGE方法对该类群进行菌株的遗传多样性分析。结果表明,卵圆形类群16株细菌中就有11株不同系统发育型的细菌。最后,将这11株细菌进行了16S rDNA部分序列（约750 bp）的测定,并做系统发育学分析,结果显示,这些细菌的系统发育学地位相距很远,分属于γ-Proteobacteria、α-Proteobacteria和 Firmicutes等类群。试验结果表明,以菌落特征的差异来挑选不同的菌株作为分析细菌多样性的第一个筛选步骤,会大大低估可培养异养细菌的多样性。     

三疣梭子蟹池塘养殖初步研究

<正> 三疣梭子蟹Portunus trituberculatus(Miers)隶属梭子蟹科Portunidae,梭子蟹属Portunus。浙北俗称“枪蟹”,浙南俗称“江蟹”或“蜞”(闽语),台湾亦称“截”。是一种暖湿性多年生食用蟹。我国渤海、黄海、东海和南海沿海以及朝鲜、日本、菲律宾近海,均有分布。三疣梭子蟹一向是捕捞主要对象,也是我国出口创汇的重     

三疣梭子蟹池塘养殖技术

<正> 三疣梭子蟹广泛分布于我国近海,而以东海、黄渤海产量较大。近年来,由于海洋渔业资源结构的变化,梭子蟹自然资源急剧衰退,商品价值倍增,人工养殖迅速兴起。1994～1998年我们在杨岐垦区虾塘进行示范养殖,1998年100亩示范池,共收获梭子蟹6350kg(其中雄蟹2100kg,雌蟹4250kg),产值46.65万元,利税31.65万元,平均亩产63.5kg,投入产出比1:3.1,取得显著的社会经济效益。现将养殖情况总结如下:     

三疣梭子蟹综合养殖技术

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)属甲壳纲、十足目,梭子蟹科,广泛分布于我国沿海,是经济价值较高的大型海产蟹类.20世纪80年代初,山东沿海进行了三疣梭子蟹土池育肥和蓄养试验,并取得了初步成功[1].目前,我国沿海各省均开展了三疣梭子蟹人工养殖,尤其在山东、江苏和河北等省养殖规模较大.三疣梭子蟹人工养殖方式主要有两种:一种是单养[2],另一种是与对虾、贝类等综合养殖[3].笔者对三疣梭子蟹综合养殖技术进行总结,以期为三疣梭子蟹人工养殖提供技术支持.     

三疣梭子蟹池塘养殖技术

１９９９年我县开始利用对虾池，进行了三疣梭子蟹试养，取得了较为理想的试验结果。现将我县几年来养殖取得的主要技术结合有关资料总结如下：一、塘口的改造选择供排水较好的２０００亩低产盐池进行改造，按照养殖塘口要求，拓宽排水沟至６米，挖深６０厘米，加高池埂１．２米。建成１００亩池塘８个，５０亩池塘２４个。二、养殖前准备３月份对蟹池进行消毒，每亩带水施生石灰１５０千克，然后用石棉瓦搭设隐蔽场所，供蟹栖息。接着加水，使池塘水深平均达５０厘米。三、蟹苗放养５月份放养每千克９００只规格的蟹苗１８００千克，亩平均…     

三疣梭子蟹土池养殖试验

随着三疣梭子蟹自然资源的锐减,进行人工养殖势在必行,根据１９９６－１９９８年连续３年的土池养殖试验,详细介绍了三疣梭子蟹的养殖技术。     

利用虾池养殖三疣梭子蟹技术

三疣梭子蟹个大、味美,且具有生长快、适应性强、病害少等特点,适于池塘养殖,且近几年发展较为迅速,已成为北方海水池塘养殖的主要品种之一。自１９９６年始,我们在万平口养殖区对其在虾池养殖高产技术方面进行了探索,取得了比较显著的经济效益,现将其技术要点总结如下。一、池塘条件与清整池塘面积１０～２５亩为宜,沙质、沙泥质为好,泥质较差,池塘能利用潮差进排水,能保持１０ｍ左右的水位。秋冬收获后,封闸晒池,晾干后,最好将池底整成波形沟垄,以增加梭子蟹的活动面积和隐蔽场所。３月中、下旬,用６０目的进水网纳水０５ｍ,施敌杀死００…     

三疣梭子蟹单体筐立体养殖技术研究

鉴于传统三疣梭子蟹的土塘养殖由于养殖环境受诸多情况影响,导致养殖成活率低。研究采用单个体筐养设施进行三疣梭子蟹高产立体养殖技术。结果表明:使用新技术后,单体筐养成活率达到71.95%和立体养殖平均产量达到4 500kg/hm2,单位面积产量大幅度提高。     

三疣梭子蟹养殖技术

三疣梭子蟹是我国出口创汇的重要水产品之一。但由于多种原因 ,梭子蟹天然捕捞量急剧下降 ,难以满足国内外市场需求。开展梭子蟹人工养殖 ,既增加养殖品种 ,又能提高虾池的综合利用 ,还能增加收入。现将三疣梭子蟹人工养殖的主要技术措施介绍如下 :一、养殖池的整理和放苗前的准备工作1 .三疣梭子蟹养殖池可利用旧虾池 ,面积 5- 6 0亩为宜 ,便于管理。泥沙底质较好 ,底质要经过曝晒后进行清淤 ,再用生石灰或漂白粉消毒处理。2 .进水 ,池子通过消毒后进水 ,要掌握好适用水质条件 ,水深 1 2 0 cm,海水比重 1 .0 1 2 - 1 .0 2 2 ,p H值 6 .8- …     

三疣梭子蟹虾池养殖技术

我们自１９９６年开始,在虾池中进行了大面积养蟹技术研究,并获得了良好的效果,现报告如下：１材料与方法１．１池塘条件秦楼办事处万平口虾场５个池塘,面积分别为２０亩、２５亩、３０亩,水深１～１．５ ｍ,泥沙底质。水质良好,进、排水方便。１．２清池肥水池塘冬闲时,封池曝晒２０～３０天后清淤。１月下旬进水浸没滩面。使用“敌杀死”０．１～０． ２×１０－６,清除以杂蟹类为主的甲壳类敌害生物。３月上旬,当池水温度达８～１０℃时,使用２０～２５×１０－６的茶籽饼清除害鱼。毒性消失后,注入用６０目筛绢网过滤的海水…     

梭子蟹牙膏病病原菌——溶藻弧菌的鉴定及其系统发育分析

从山东潍坊池塘养殖的患有牙膏病的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)中分离到1株病原菌(PX25),经回接感染证实为该病的病原菌。经生理生化试验及形态结构观察显示,该菌株革兰氏阴性,短杆状,直或稍弯曲,两端钝圆;固体培养基上培养后进行染色具有周生侧毛,液体培养基中培养后进行鞭毛染色具一极生单鞭毛;悬滴法观察PX25菌株具有很强的运动性。对其16SrRNA基因进行PCR扩增、测序和系统发育分析。结果表明,该菌株与溶藻弧菌亲缘关系最近,相似性达99.35%。综合菌体在形态、生理生化、API20NE与API20E自动鉴定结果、16S rRNA同源性等方面的特性,确认PX25为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。     

梭子蟹养殖环境及生物体内细菌的数量动态及区系组成

研究结果表明:随着养殖的结束,池塘水体和底泥中总异养菌数和反硝化细菌、氨化细菌、硫酸还原菌等特殊生理类群的数量均显著降低。从梭子蟹养殖环境及生物体内分离到115株细菌,经鉴定可归于9个属与肠杆菌科的部分属。通过监控养殖环境中异养细菌和弧菌的数量波动,可以预警梭子蟹病害的发生,及时采取有效的应急防治措施。     

三疣梭子蟹病原弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及定居因子抗原基因检测

2009年10月江苏赣榆地区某养殖场养殖的三疣梭子蟹出现大量死亡,症状主要表现为:病蟹行动缓慢、不摄食,蟹体消瘦,打开头胸甲可见肝胰腺、鳃、肌肉等内脏组织水肿,部分肝胰腺和肌肉组织呈腐烂状。从患病梭子蟹肌肉、肝胰脏、体内积液中分离到大量优势生长的细菌。人工感染试验,证明分离菌(JG091120-1)对健康三疣梭子蟹具有很强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等常规表型生物学检验,同时利用分子生物学方法测定了代表菌株的16S rRNA和gyrB基因序列,其中分离菌16S rRNA基因序列长度为1 451 bp(登录号HQ170626),gyrB基因序列长度为1 186 bp(登录号HQ170627),分析了16S rRNA和gyrB两种基因序列的同源性。根据分离菌的表型及分子生物学特性,判定该菌为肠杆菌科枸橼酸属的弗氏柠檬酸杆菌。定居因子抗原cfa是肠杆菌科产肠毒素细菌的一种重要致病因子,利用特异性引物进行cfa基因的PCR扩增,分离菌可以扩增出大小在100 bp的基因片段,表明本次分离的病原弗氏柠檬酸杆菌具有cfa毒力因子。     

三疣梭子蟹个体发育早期的同工酶谱变化

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究了三疣梭子蟹个体发育早期（从未受精卵到第一期幼蟹）11种同工酶（LDH、GDH、ADH、SOD、EST、ME、MDH、SDH、GOT、ACP和α-AMY）酶谱的变化：结果表明,三疣梭子蟹EST、ME、MDH、SDH、GOT、ACP和α-AMY等7种同工酶电泳图谱显示了明显的发育阶段差异性,大都随发育渐趋复杂。个体发育阶段特异性的同工酶可以作为一项生化指标用于三疣梭子蟹发育阶段的鉴别。在三疣梭子蟹整个胚胎和幼体发育过程中均未能检测出LDH和GDH活性,而ADH和SOD酶活性则有持续和较稳定的表现。根据各同工酶的个体发育谱式,三疣梭子蟹个体发育过程中同工酶的表达类型被划分为4种。讨论了三疣梭子蟹同工酶的个体发生多念性和刚孵化的第一期涵状幼体的同工酶活性。     

三疣梭子蟹体内As的蓄积特异性研究

本研究以三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)为实验生物,应用半静态双箱模型的方法在室内模拟了三疣梭子蟹对砷(As)生物富集过程,As暴露浓度梯度分别为5、20和100 μg/L。通过对三疣梭子蟹体内总砷含量变化进行非线性拟合,得到其对总砷的生物富集系数(BCF)、生物富集动力学参数。结果显示,三疣梭子蟹肝胰腺组织对总砷的BCF明显高于肌肉组织。到富集实验结束时,三疣梭子蟹肝胰腺组织中由低到高浓度组对总砷的BCF分别为21.21、15.07和10.31,吸收速率常数(k1)及BCF均随水体中As浓度的增加而减少;肌肉组织中,由低到高浓度组对总砷的BCF分别为5.17、3.74和5.83,5、100 μg/L实验组各动力学参数较为接近,但20 μg/L实验组的富集速率常数k1最小,释放速率常数(k2)最大。研究表明,三疣梭子蟹BCF和生物学半衰期B1/2最小。     

三疣梭子蟹促雄腺显微和亚显微结构的研究

采用解剖镜观察及组织切片和电镜技术,研究了三疣梭子蟹促雄腺的位置、形态、显微及亚显微结构。结果发现,三疣梭子蟹促雄腺1对,附着在左右射精管的表面,呈不规则索状。随着个体繁殖周期的变化,促雄腺结构各异,可划分为增殖期、合成期和分泌期3个发育时期。腺体进行全浆分泌,有A、B2种细胞类型,A型细胞具常染色质,粗面内质网和线粒体丰富,B型细胞具异染色质,细胞核固缩。处于增殖期的促雄腺量少,体积小,细胞界限清晰;合成期促雄腺体积大,呈索状,内质网和线粒体发达,A型细胞居多;分泌期分为分泌前期和分泌后期,分泌前期促雄腺体积较大,以B型细胞居多,分泌后期促雄腺体积小,部分有脱落现象,细胞器解体,细胞内存在大量空泡,有的细胞已经解体。     

三疣梭子蟹Sox基因HMG盒的克隆分析

利用能扩增人类SRY基因HMG盒的一对简并引物,分别对三疣梭子蟹雌雄个体基因组DNA进行扩增,均得到216 bp和约400 bp的两条带,不存在性别差异,通过PCR-SSCP分析,未发现雌蟹或雄蟹所特有的Sox基因。对216 bp的带进行克隆测序得到6个Sox基因,分别命名为PTSox21、PTSox12、PTSox11a、PTSox11b、PTSox11c和PTSox4。其中,PTSox21、PTSox12和PTSox4氨基酸序列与人类Sox21、Sox12和Sox4基因的同源性分别为90%、66%和63%,PTSox11a、PTSox11b和PTSox11c氨基酸序列均与人类Sox11基因有63%的同源性。此外,PTSox11a和PTSox11b的氨基酸序列之间的同源性达到了98.6%,只在第44位氨基酸残基不同。与其他物种Sox基因氨基酸序列的同源性比较发现,PTSox21与饰纹姬蛙Sox2a有92%的同源性,而PTSox12、PTSox11a、PTSox11b和PTSox11c均与意大利蜜蜂的Sox1有73%的同源性,PTSox4与意大利蜜蜂的Sox1有72%的同源性。     

三疣梭子蟹自交与杂交家系子一代生长和存活的比较

选择繁殖性能好的A家系(F6)和生长与存活好的B家系(F3),设计家系内自繁和家系间杂交,比较其自交组与杂交组子一代的生长与存活,评价杂交效应。由自交组F66(A♀×A♂)、F33(B♀×B♂)和杂交组F63(A♂×B♀)、F36(B♂×A♀)4个实验组组成,比较各实验组子一代在80、100、120、150日龄时的各生长指标杂种优势。研究表明,同一生长发育阶段的同一杂交群体的不同性状,表现的杂种优势大小有很大差异,而且同一杂交群体的同一性状在不同生长发育阶段表现的杂种优势大小同样有差异。自交组各阶段全甲宽、甲宽、甲长和体高的生长趋势比较一致,为F33F66;不同生长性状的生长速度方面,杂交组具有不同程度的总体杂种优势(-3.50%-19.47%)。结果显示,就存活而言,杂交组比自交组的存活率杂交优势明显,总体杂种优势率为24.8%,与存活相关的养殖产量的总体杂种优势率为15.99%,无论是生长性状还是存活,杂交使A家系获得的改良效果比B家系的好。A、B两个家系间存在的遗传差异获得杂种优势,是性状得到改良的基础。     

温度对三疣梭子蟹行为的影响

描述了三疣梭子蟹的摄食、领域、防御、攻击及清洁行为。三疣梭子蟹在水温12℃以上摄食行为加强,领域与攻防行为也很明显,攻防主要其螯肢。三疣梭子蟹的清洁行为比较复杂,在光强度变化较大时较为明显,一般要持续15~20min。随着温度的降低,三疣梭子蟹的摄食、攻防、领域行为都明显减弱。     

地膜池塘三疣梭子蟹育苗试验

设计一种地膜池塘,进行梭子蟹育苗试验,结果表明:试验地膜池塘梭子蟹育苗的成活率比较对照池塘有显著提高(p0.05),试验池塘成活率6.95%,对照池塘4.25%,单位出苗量试验池塘1325.8 ind/m3,对照池塘1140.5 ind/m3。试验池塘可以彻底避免才女虫的滋生和天津厚蟹的危害。该方法为蟹类生态池塘育苗新模式,具有良好的推广价值。