菠菜性别相关的ISSR标记

菠菜为雌雄异株植物,用CTAB法提取其雌、雄株成株幼嫩叶片DNA,分别构建雌、雄株DNA池,以之为模板,用已优化的ISSR体系扩增,在74条ISSR引物中,I62扩增出一条约1 200bp雌性连锁标记,回收纯化该特异扩增片段,将其连接于pUCm-T载体,转化进大肠杆菌JM109菌株,并检测及测序。回收克隆和测序后发现该片段全长1 176bp,富含AT,AT占57.0%。根据测序结果设计1对25bp的特异引物将这个雌性连锁的ISSR标记转化为稳定性和特异性更好的SCAR标记。该特异引物对随机选取的雌雄菠菜单株进行PCR扩增,在雌株中均有1 176bp的特异条带,而雄株中均无。此特异条带的获得为菠菜性别相关基因的克隆奠定基础。     

西瓜全雌基因连锁的SRAP分子标记

采用SRAP技术探寻与西瓜全雌基因连锁的分子标记.以全雌母本和弱雌父本为双亲杂交获得F1,自交获得F2群体,用分离群体分组分析法(bulked segregant analysis,BSA)构建全雌和弱雌2个基因池,筛选957对引物.结果发现,只有引物me16～em20能在两池之间扩增得到2条特异带.经F2代单株验证,...     

小麦抗叶锈基因Lr38的一个新标记

【目的】建立小麦抗叶锈近等基因系材料TcLr38特异的PCR标记。【方法】以Thatcher为对照,以TcLr38和TcLr38×Thatcher F2代单株构建的分离群体为材料,利用TcLr38远缘亲本中间偃麦草特异的SCAR标记引物进行PCR扩增获得单一条带,并以50个小麦抗叶锈近等基因系材料对该标记特异性进行检测,Mapmaker 3.0软件计算该标记与Lr38的遗传连锁距离。【结果】中间偃麦草特异的SCAR标记引物在TcLr38中获得单一扩增片段大小为982 bp,50个小麦抗叶锈近等基因系检测表明为TcLr38的特有条带,F2代分离群体验证表明为与Lr38共分离的分子标记,命名为Y38SCAR982。【结论】Y38SCAR982可以作为Lr38的分子标记,并证实该基因由中间偃麦草向普通小麦转移的事实。     

与黄瓜全雌性基因连锁的SSR分子标记

黄瓜(Cucumis sativus L.)是重要的蔬菜栽培作物,其雌花率的高低直接影响着黄瓜产量。目前优良的黄瓜品种都具备全雌性或强雌性特征,全雌性也是黄瓜优势育种的重要途径。但由于黄瓜性别表现受到遗传和环境等多种因素的影响,传统的从表型上进行全雌性基因的选择效率不高。然而,借助与目的基因相连锁的分子标记进行辅助育种能直接从基因型上对后代单株进行选择,准确率高,能够在苗期进行性型鉴定,从而大大地提高育种效率。以全雌品系240-1-2-2-3-1自交系和弱雌品系3-5-1-3-2-1-1-1-1-2及其F1、F2、BC1P1和BC1P2世代为试验材料,进行田间鉴定和遗传规律分析。结果表明:黄瓜性别表达由寡基因控制,并受到一些背景基因的修饰;黄瓜全雌性相关基因遗传模型符合加性-显性-上位性遗传模型。利用PCR技术和SSR分子标记方法,通过亲本、F2全雌和全雄基因池筛选,从699对SSR引物组合中获得稳定的多态性引物组合2对,即CSWCT25和SSR18956;经回收、测序,特异片段全长分别为331bp和145bp,与黄瓜全雌性基因的连锁距离分别为7.7cM和6.8cM,均可用于黄瓜全雌系品种的辅助选育。     

黄瓜性别控制基因CsACS1G的分子标记及其快速检测

根据黄瓜性别控制基因CsACS1G、CsACS1及BCAT基因DNA差异序列,设计CsACS1G基因特异标记引物G1/G2,采用碱处理法,快速提取黄瓜品种WI1983G、95、98-17、S-2-98及95×WI1983G的F1、F2群体植株DNA,并以此为模板进行PCR扩增.为了验证特异引物对检测CsACS1G基因的准确性,在黄瓜开花期间进行田间调查,结果表明,以快速提取的黄瓜DNA为PCR模板,特异引物G1/G2能稳定、准确扩增出CsACS1G基因特异片段,电泳检测结果与田间调查结果一致.     

鹌鹑性别鉴定的分子标记方法

采用PCR方法扩增北京白羽蛋用鹌鹑基因组中性别基因CHD相关片段,探讨鹌鹑性别的分子标记方法。通过特异引物2550F/2718R,对3对已知性别和14只未知性别鹌鹑性别基因片段进行特异性扩增。结果表明,这对引物从雄性鹌鹑中扩增出1条片段,从雌性鹌鹑中扩增出2条片段,可以对鹌鹑的性别作出准确鉴定。该方法可以应用于初生鹌鹑的性别筛选,降低饲养成本,提高经济效益。对2条片段进行克隆测序,片段长度分别为613和446bp。     

苹果抗斑点落叶病基因的一个RAPD标记的SCAR转换

将苹果抗斑点落叶病相关基因的一个RAPD标记成功转换为重复性和特异性更好的SCAR标记。由序列特点设计特异SCAR引物,并用所设计引物对两亲本和抗病、感病基因池及F1代单株进行PCR扩增。结果表明,秦冠×富士F1代群体在抗病后代个体中扩增出470 bp条带,而在感病后代个体中无此扩增条带,故将该标记命名为SCAR470。同时,分析分离群体的扩增,重复率为4.69%,表明该标记可以用于苹果斑点落叶病的分子鉴定。     

黄瓜性别决定基因相关的分子标记

以不同性别类型的黄瓜高代自交系为材料,根据GenBank中提供的乙烯合成、信号转导有关基因序列、花器官发育相关的黄瓜性别决定蛋白基因、AGMOUS同源异型基因、与性别表达相关的RAPD和ISSR引物,采用Primer Premier 5.00专业引物设计软件,设计可能与性别表达有关特异引物.结果表明,ACSl号引物对(ACS-Fl,5'-ArrcAGATGGGT一3';ACCS.Rl,5'-GCC从AGCTCGACAT-3'),CsACSlG.SCAR引物对(ACS.FI,5'TTAACTACTTCGGACGGACGGGCATAG-3';ACCS-Rl,5'-AOGTGl广11CAGCAAA CATAGGGTG-3')及RAPD引物S12对不同性别类型的黄瓜基因组DNA的PCR扩增产物表现出明显的多态性.用Mapmaker/Exp 3.0进行连锁分析,发现雌性F基因和ACS_280,CsACSlG.SCAR_430均连锁群,遗传距离分别为3L4,10.0 cM,与S12_280标记不在一个连锁群上.     

小麦抗叶锈基因Lr45的SCAR标记

 【目的】建立小麦抗叶锈基因Lr45 SCAR（sequenced characterized amplified region序列特征扩增区域）标记。【方法】以小麦抗叶锈病基因材料TcLr45和感病材料Thatcher为亲本,利用黑麦基因组特异的RAPD标记引物OPH20进行PCR扩增,对获得的与预期大小相同的1.5kb的特异片段进行克隆测序,并根据该序列设计一对特异PCR引物LRYR和LRYF,对TcLr45×Thatcher F2代单株构建的分离群体进行扩增,验证该标记与Lr45的连锁关系,Mapmaker 3.0软件绘制遗传连锁图。【结果】该标记在TcLr45中扩增出单一条带,片段大小为1 272 bp（命名为Ypsc20H1272）,而在感病亲本中则无扩增条带。F2代分离群体进行连锁分析,遗传距离为8.2 cM,该标记为与Lr45连锁的SCAR标记。【结论】将Lr45的RAPD标记转化成SCAR标记。     

贵农001中抗白粉病基因的RAPD标记研究

运用RAPD技术,采用分离群体分组分析法（BSA）对小麦种质贵农001中的抗白粉病基因进行了分子标记研究。结果表明,引物S2018可在抗病亲本贵农001和抗病单株中扩增出特异的DNA片段,而在感病材料和感病亲本龙96—6239中不能扩增出同样的DNA片段,该特异DNA片段分子长度约为900bp。用F2分离群体（110株植株）进行遗传连锁性分析,引物S2018扩增的特异DNA片段与贵农001抗白粉病基因相连锁,其遗传距离为1．7cM。该标记的获得为将贵农001中抗白粉病基因向其它小麦育种材料的转移提供了有效的选择手段。