人参基因组DNA的提取及RAPD—PCR反应条件的优化

探讨了人参基因组DNA提取方法及RAPD—PCR反应条件的优化．结果表明,用改良的CTAB方法提取的DNA均达到了RAPD—PCR分析的要求;优化的RAPD—PCR反应条件为：在25μLRAPD—PCR反应体系中,模板DNA20ng,dNTP200μmol／L,MgCl2 1．5mmol／L,10×Buffer2．5μL,引物浓度0．4pmol／L,TaqDNA聚合酶1．0U,其余以ddH20定容至25μL．PCR反应程序为：94℃预变性5min;94℃45S,40℃退火1min,72℃1min,共40个循环;最后在72℃延伸5min．     

石榴RAPD反应体系优化及亲缘关系研究

利用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物、酶4种因素3个水平上对石榴RAPD反应体系进行优化,确立了适合石榴RAPD反应体系:在25μl反应体系中,含1×PCRbuffer、2.5mmol/LMgCl2、200μmol/LdNTP、0.2μmol/L引物、50ng模板DNA、0.5UTaq DNA聚合酶。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度37℃。利用优化的RAPD反应体系对11个石榴品种进行亲缘关系分析,结果表明,11个品种之间的多态性比较高,变异大。聚类图结果表明,11个品种被明显分为临选1号、净皮甜、新大甜、临选14号;大粒三白甜、大青皮酸、小红皮酸、白花、江石榴、薄皮糙、玉石籽两个类群。因此,这一优化体系适合于石榴品种间的亲缘关系鉴定。     

家兔RAPD分析反应体系的优化

以家兔的基因组ＤＮＡ 为模板,研究影响家兔ＲＡＰＤ 扩增的因素。实验结果表明,Ｔａｑ酶、随机引物和Ｍｇ２ ＋ 浓度及模板ＤＮＡ 的纯度对ＲＡＰＤ 扩增影响较大。本实验建立了适于家兔ＲＡＰＤ 分析的反应体系：反应体积为２０μｌ,其中含有１ ×扩增缓冲液,２ ．０ｍ ｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２ ,０ ．１ｍ ｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０－２μｍｏｌ／Ｌ 随机引物,１ ．５ＵＴａｑ 酶,９０ｎｇ 模板ＤＮＡ     

獭兔RAPD反应体系优化研究

对獭兔RAPD体系中Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、基因组DNA浓度进行研究。结果表明:Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl时,可获得清晰、稳定性好的条带。优化的RAPD反应体系为:总体积为20.0μl。10×Buffer(含Mg2+)为2.0μl;dNTPs(各2.5 mmol/L)为2.0μl;Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl;超纯水为13.8μl。PCR扩增条件为:97℃预变性7 m in,94℃1 m in,36℃退火1 m in,72℃2 m in,45个循环后,在72℃延伸10 m in结束,4℃保存。PCR扩增产物通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测。点样后,以2~3 V/cm电压降稳压电泳3.0~3.5 h。     

苎麻属植物RAPD PCR反应体系的双重正交法优化*

 以苎麻属植物为材料,研究苎麻属植物RAPD分析中的主要影响因素,采用差异性材料DNA为模板和双重正交优化设计的方法。建立苎麻属植物RAPD PCR反应体系：25μL反应体系中含Taq DNA聚合酶1.5U,Mg2+2.1 mmol/L,dNTP 0.2μmol/L,Primer 0.75μmol/L,模板DNA 150ng。最佳扩增程序：先94℃变性4min,再94℃变性45s,37℃复性45s,72℃延伸90s共36个循环,最后 72℃延伸5min,4℃保存。经检验,该体系能适应苎麻属多个种植物的RAPD PCR的正常扩增。     

中国栽培平菇的RAPD分析

采用RAPD技术对我国大规模栽培的54个平菇商业菌株进行RAPD分析。结果表明,3l条随机引物中有10条引物对所有菌株扩增效果较好,共扩增出122条不同分子量的DNA条带。聚类分析表明,在阈值为20（约60％的相似水平）,可将供试菌株分成六大类：第一大类包括以肺形侧耳为代表的6个菌株;第二大类包括8个未定名菌株;第三大类包括糙皮侧耳为代表的20个菌株;第四大类包括以杂交种为代表的8个菌株;第五大类包括以佛罗里达侧耳为代表的5个菌株;第六大类包括以白黄侧耳为代表的7个菌株。     

濒危竹种小蓬竹（Drepanostachyum luodianense） RAPD PCR反应体系优化

为了建立小蓬竹（Drepanostachyum luodianense） RAPD PCR反应的最优体系,以小蓬竹基因组DNA为模板,对影响其RAPD扩增的dNTPs浓度、模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶量、引物浓度、Mg2+浓度等重要参数进行了单因子和正交试验。试验得出小蓬竹RAPD最优反应体系为: 20 μL反应体系,10×PCR buffer为1/10体积,dNTPs为100 μmol·L-1,模板DNA量为30 ng,Taq DNA聚合酶为10 U,引物浓度为02 μmol·L-1,Mg2+浓度为15 mmol·L-1。优化后的RAPD PCR反应程序为: 94℃预变性5 min,然后进入35个循环,即94℃变性1 min,35℃退火30 s,72℃延伸90 s,循环完毕后于72℃延伸7 min,最后在4℃保持。     

油菜RAPD反应体系的优化研究

针对RAPD反应体系中Taq聚合酶，dNTP和引物这3个影响较大的因素，设计了一组3因素3水平试验，根据试验结果，筛选了油菜random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中3因素的最佳浓度配比，即Taq 1.6U,dNTP 0.2mmol/L，引物0．3umol/L。     

滩羊生长激素基因PCR—RFLPs反应体系的优化

以宁夏滩羊基因组DNA为模板，研究影响滩羊PCR—RFLPs扩增的因素，实验结果表明：特异性引物的浓度、Mg^ 浓度、模板DNA的完整性，浓度、纯度、TaqDNA聚合酶、变性温度、退火温度和循环次数等诸多因素对PCR—RFLPs扩增影响较大。为此我们对PCR—RFLPs的反应体系和反应程序进行了研究和浓度梯度对比试验，建立了滩羊GH基因PCR—RFLPs扩增的反应体系和操作技术。     

甜瓜RAPD反应体系的优化

以甜瓜单性花类型植株为材料,采用改良的CTAB法提取基因组,对影响RAPD反应的各种因子进行筛选。结果表明:在20μL反应体积中,RAPD优化反应体系为:模板DNA浓度2.5ng/μL,dNTP 0.25 mmol/L,随机引物0.8μmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U。利用此优化的反应体系,采用BSA法筛选出一条长约550bp与甜瓜单性花相关基因连锁的分子标记。     

甘薯RAPD-PCR反应条件的优化

以徐薯22的基因组DNA作为PCR反应模板,以随机引物进行RAPD-PCR反应,通过设置ToqDNA聚合酶加量、MgCl2 浓度、dNTPs 浓度、模板DNA加量、引物加量的不同梯度,探索出一套适合甘薯RAPD-PCR的最优反应条件.试验结果表明,最优反应条件为反应体系25.0μL,2.5μL的PCR 10xBuffer、0.15U 的Taq DNA 聚合酶、3.0 nmol·μL-1的MgCl2、0.6 nmol·μL-1的dNTPs、40 ng的DNA模板、40 ng的RAPD引物.     

荷包猪RAPD-PCR反应条件研究

[目的]建立适合荷包猪RAPD-PCR反应的最佳反应体系。[方法]以荷包猪为试验材料,以MgCl2浓度、引物浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量及退火温度为影响因子,在保持其他影响因子一致的条件下,变化单一因子,筛选最优参数,研究各影响因子对RAPD-PCR反应的影响。[结果]最佳反应体系的总体积为20.0μl,MgCl2浓度为2.5μmol/L、引物浓度2.0μmol/L、dNTP浓度400.0μmol/L、模板DNA为100 ng/μl、TaqDNA聚合酶为1.0 U。PCR反应程序:94℃预变性2 min(94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,循环40次),72℃延伸5 min。此反应体系所扩增出来的结果比较稳定,带型清晰且亮度适中。[结论]该研究为应用RAPD技术对荷包猪作进一步的遗传分析奠定了基础。     

黄皮RAPD-PCR反应体系的优化

以5′-GTCGTTCCTG-3′为随机引物,以酸黄皮为试材,对黄皮RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:20μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2 、随机引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度和用量分别为2.0 U、2.5 mmol/L、0.5 umol/L、50 ng、0.20 mmol/L。适宜的扩增程序为94℃预变性3 min,1个循环;94℃变性45 s,36℃退火45 s,72℃延伸1 min,38个循环;72℃后延伸7 min。     

白僵菌RAPD-PCR反应体系优化

为了建立一套适宜于白僵菌(Beauveria bassiana)退化研究的RAPD-PCR反应体系及反应程序,通过采用L16( 45)正交试验及退火温度和循环次数的单因素优化对反应体系中的各因素进行优化组合.结果表明:20μL PCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为,10×Buffer 2 μL,MgCl2(25 mmol/L)2.4 μL,4种dNTP(各2.5mmol/L)0.8 μL,随机引物(10 μmol/L)1.4 μL,TaqDNA聚合酶(5 U/μL)0.4 μL,模板DNA( 10 mg/L)1 μL.反应条件为,94℃预变性2 min,94℃变性30 s,38℃退火40 s,72℃延伸1 min,循环次数40次,72℃延伸5 min.     

天牛干标本DNA的提取及RAPD-PCR扩增反应

对标本馆保存多年的天牛标本进行基因组DNA的提取,并成功用于PAPD-PCR的扩增.结果显示基因组DNA的提取与标本的保存时间无直接的联系,而与标本保存的质量关系密切.用同一引物扩增,不同种天牛的扩增片段呈现多态性.     

北五味子RAPD-PCR反应条件优化

以采自吉林省汪清地区野生北五味子叶片为材料,提取其基因组DNA,并以此为模板进行北五味子RAPD—PCR反应条件的优化．结果表明,PCR反应混合液为：25μLPCR反应体系中加入20ng模板DNA,200μmol／LdNTPs,0．3μmol／L引物,2．0mmol／LMg^2＋,1UTaqDNA聚合酶,2．5μL 10×Buffer;PCR反应程序为：94℃预变性5min后,在94℃变性1rain,40℃退火1min,72℃延伸2min,共40个循环后,在72℃下最后延伸5min时,在不同引物中均扩增出清晰而稳定的DNA电泳谱带．     

平菇栽培环境条件及病虫害防治

总结了平菇栽培环境条件,包括温度、湿度、空气、光线、酸碱度,并介绍了平菇栽培中的主要生理性病害、杂菌、害虫的防治措施及老菇房处理措施,以期为平菇高产高效栽培提供参考。     

正交法优化白平菇深层培养基的研究

采用液体深层培养的方法,研究了白平菇对碳氮源的利用情况,并以三因素三水平的正交试验进行了培养基配方的优化。结果表明:最适碳源为红糖、乳糖、淀粉,最适氮源为麦麸、酵母粉、蛋白胨,最适碳氮比为20~30∶1,最适培养基为红糖1.5%、麦麸3%、硫酸镁0.1%。     

平菇原生质体制备条件的研究

从综合酶种类、酶浓度、菌龄、酶解温度、酶解时间及稳渗剂等方面,探讨平菇原生质体制备的条件。     

侧耳RSAP-PCR体系的建立和优化

采用单因素试验和正交设计相结合进行了侧耳(Pleurotus ostreatus)RSAP-PCR反应体系的建立和优化,并对优化后体系的稳定性进行了验证.讨论了Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq聚合酶用量和模板DNA含量对侧耳RSAP-PCR反应的影响,最终得出总体积为25μL的反应体系:30 ng模板DNA,2.0 μL 10倍PCR buffer,Mg2+ 2.5 mmol/L,dNTPs o.25 mmol/L,引物0.32 μmol/L,Taq DNA聚合酶2U,ddH2O 13.2 μL.