双夹心ELISA检测鸡EDS-76病毒抗原的研究

应用鸡抗EDS-76病毒、兔抗EDS-76病毒抗体和羊抗兔抗体,建立了检测EDS-76的双夹心ELISA方法,本试验确定的鸡抗EDS-76病毒抗体、兔抗EDS-76病毒抗体和HRP-羊抗兔抗体的最佳工作浓度分别为1∶160、1∶300和1∶1000。本法对纯化EDS-76病毒的最低检出量约为5 ng/孔。通过对EDS-76病毒试验感染鸡脏器带毒、排毒情况和临床样本的检测,表明双夹心ELISA方法对EDS-76病毒的检测特异性强、敏感度高、适合于成批样本的检测。     

禽流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒（AIV）抗原的双抗体夹心ELISA方法。经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件：兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1：8000（浓度为3.531μg/ml）,抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1：800,酶标二抗的工作浓度为1：4000。与其他禽易感病毒（NDV、IBV、EDS-76V）等均没有交叉反应。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,可应用于AIV的检测和流行病学调查。     

猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用特异性好的鼠源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体为捕获抗体,兔源多克隆抗体为检测抗体,建立PEDV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳反应条件为:抗PEDV单克隆抗体E1包被质量浓度4.40μg·mL~(-1),37℃包被2h,采用5%BSA封闭液封闭1h,兔抗PEDV抗体工作质量浓度为5.91μg·mL~(-1),酶标二抗稀释度为1∶2000,以OD450nm≥0.381作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应。敏感度可达30μg·mL~(-1)(5×103.12);重复性变异系数小于10%。采用该方法和RT-PCR方法同时检测临床样品42份,阳性样品符合率为92.30%,表明建立的PEDV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高和方便快捷等优点,可用于PEDV快速检测。     

减蛋综合征1976病毒单克隆抗体的制备及其初步鉴定

采用经层析方法提纯的减蛋综合征１９７６（ＥＤＳ‘７６）病毒免疫ＢＬＡＢ／ｃ小鼠。最后一次加强免疫后第３ｄ制备脾脏细胞，然后用５０％的聚乙二醇（ＰＥＧ，分子量４００）融合脾脏细胞和ＳＰ２／０骨髓瘤细胞。通过选择培养、特异性抗体检测、筛选和克隆詈笾票赋觯抵攴置诳固宓南赴辏停玻停常停保埃停保春停停保怠Ｎ⒘垦种剖匝椋ǎ龋桑┲っ鳎停保档タ寺】固寰哂醒种苹钚裕龋杉畚叮ǎ欤铮纾玻     

双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV

用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。     

减蛋综合征病毒单克隆抗体的生物学特性鉴定

该研究在建立分泌减蛋综合征病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的基础上，鉴定了１０株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体（４Ｂ１，１Ｄ４，２Ｄ６，３Ｄ６，２Ａ１，３Ａ５，３Ｃ６，３Ｃ１，１Ｂ３和２Ｃ５）和生物学活性，这１０株杂交瘤细胞分泌的抗体有高度的特异性，只特异地作用于减蛋综合征病毒，微量血凝抑制试验（ＨＩ）发现４Ｂ１，３Ｃ１，２Ｃ５和３Ｃ６有血凝抑制活性，腹水效价分别为２４（ｌｏｇ２），４（ｌｏｇ２），７（ｌ     

抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×10~5～1.02×10~6;IPMA效价分别为6.40×10~4、1.28×10~5、2.56×10~5、1.28×10~5;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×10~4。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。     

犬瘟热病毒单抗夹心ELISA检测方法的建立

以2株犬瘟热病毒(CDV)特异性单克隆抗体2H11和1G7为基础建立了检测CDV的单抗夹心ELISA方法.用单抗2H11作为捕获抗体,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗1G7为检测抗体,通过方阵试验确定2H11和1G7-HRP的最佳工作浓度分别为200和475 ng· mL-1.建立的单抗夹心ELISA方法具有良好的...     

鸡减蛋综合征病毒的分离与鉴定

从产蛋率下降．出现软壳蛋、薄壳蛋等畸形蛋的鸡场采集病料，接种鸭胚后分离到1株病毒，经过电镜观察，脂溶剂敏感性试验、HA试验、HI试验、AGP试验，分离病毒被鉴定为EDS-76病毒。     

猪伪狂犬病病毒单抗双夹心ELISA的构建

建立了检测猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验(Enzyme linkedimmunosor bentassay,ELISA)方法,为该病的快速诊断奠定了基础.作者对其组装条件进行了筛选,认为兔抗PRVIgG最佳包被质量浓度为4.59mg·L-1;抗PRV的单克隆抗体(Monoclonalantibodies,McAb)的最佳质量浓度为6.45mg·L-1;最佳封闭剂为10g·L-1BSA(牛血清白蛋白),封闭时间为60min,制定了科学的结果判定标准,最低病毒检出量为200μg·L-1.与病毒分离、动物试验和中和试验相比较,该方法特异、灵敏、可靠、方便.     

ELISA双抗体夹心法检测河蟹“颤抖病”病毒

用纯化的河蟹“颤抖病”（暂定名）病毒分别免疫家兔和山羊,制备高效价的抗血清。羊抗血清经硫酸铵盐析纯化。经方阵滴定,选择P／N＝2．95时作1：100稀释的血清为工作浓度,建立ELISA双抗体夹心法检测样本144份,包括来自长江水域的野生河蟹、人工感染发病的河蟹、1999年和2000年从江苏采集的自然发病的病蟹及市场购买河蟹。结果显示,病蟹和市场购买河蟹的阳性率为66．7％－100％,人工感染的病蟹和人工感染石蟹致病组阳性率均为100％,来自长江水域的健康河蟹及未接种病毒的对照石蟹阳性率均为0,表明建立的方法可以用于检测河蟹“颤抖病”的病原。     

双抗体夹心ELISA在转基因生物检测中的应用研究

随着转基因产品种类和数量的不断增加,转基因生物及其产品的安全性也越来越受到关注,各国一直以来也都高度重视转基因生物及产品的管理.作为转基因生物安全评价的第一步,转基因生物的准确检测显得格外重要.该文综述了双抗夹心ELISA方法的原理、技术要点及其在转基因植物及产品检测中的应用,并对该方法在转基因动物检测中的应用前景进行分析,为双抗夹心ELISA方法的合理利用提供依据.     

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。     

猪囊尾蚴头节蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

采用抗猪囊尾蚴头节蛋白单克隆抗体包被ELISA板,以兔抗猪囊尾蚴头节蛋白多抗作为捕获抗体,建立了猪囊尾蚴头节双抗体夹心ELISA检测方法,用该方法分别检测猪囊尾蚴、棘球蚴和猪蛔虫具有良好的特异性。用ELISA和RT-PCR同时检测120份样品,ELISA的特异性和敏感性分别为98.1%和80.0%,2种方法的符合率为95.8%。     

猪囊尾蚴头节蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

采用抗猪囊尾蚴头节蛋白单克隆抗体包被ELISA板,以兔抗猪囊尾蚴头节蛋白多抗作为捕获抗体,建立了猪囊尾蚴头节双抗体夹心ELISA检测方法,用该方法分别检测猪囊尾蚴、棘球蚴和猪蛔虫具有良好的特异性。用ELISA和RT-PCR同时检测120份样品,ELISA的特异性和敏感性分别为98.1％和80.0％,2种方法的符合率为95.8％。        

羊痘病毒双抗体夹心ELISA 检测方法的建立

用纯化的山羊痘病毒分别免疫家兔和豚鼠,制备高效价的抗血清.经方阵滴定测定捕获抗体、检测抗体、酶结合物和标准抗原的稀释倍数.通过对阴性样品的检测,确定阴阳性的判定标准,初步建立羊痘病毒间接夹心ELISA 诊断方法.用建立的ELISA 方法对31份已知背景样品进行检测,总符合率为93.5%.经特异性试验、批内重复试验和对比试验,说明建立的夹心ELISA 诊断方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.对田间样品的检测表明,该ELISA 诊断方法可应用于对羊痘的鉴别诊断.     

不同方法提纯鸡减蛋综合征病毒的比较

通过相关系数的计算与显著性检验,结合病毒蛋白浓度的大小,同时进行电镜观察,证实了由鸭胚增殖的ＥＤＳ病毒采用６０％饱和度的硫酸铵或１０％聚乙二醇（ＭＷ６０００）深沉法初提后,再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００层析法提纯的效果优于ＤＥＡＥ５２纤维素色谱法。     

牛妊娠相关糖蛋白boPAG2双抗体夹心ELISA体系的建立

【目的】通过双抗体夹心ELISA体系实现对牛妊娠相关糖蛋白boPAG2的免疫学检测,为后续研发牛妊娠检测试剂盒奠定基础。【方法】将自制boPAG2作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,以细胞融合技术对呈阳性的杂交瘤细胞进行筛选。运用ELISA相加性试验筛选最佳配对抗体,初步建立起双抗体夹心酶联免疫吸附试验系统,采集牛场中120头荷斯坦奶牛血清样本进行初筛。【结果】筛选出3株能稳定分泌boPAG2单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2C01,5E02,3B05。纯化出单克隆抗体滴度为(1∶22.48×10⁴)～(1∶11.96×10⁴),免疫球蛋白亚型均为IgG。ELISA相加性试验筛选出2株可识别boPAG2抗原不同表位的最佳配对抗体5E02和3B05。当5E02作为包被抗体,3B05作为检测抗体时,其最佳稀释质量浓度为1.25μg/mL,检测boPAG2的灵敏度可达5μg/mL。【结论】制备和选定了两株最佳配对单克隆抗体5E02和3B05,该对抗体效价高,通过建立双抗体夹心ELISA体系实现对boPAG2的免疫学检测,并对少量血清样品进行了初步...     

间接ELISA检测减蛋综合征病毒抗体方法的建立

应用SephdexG-200亲和层析获得纯化的减蛋综合征病毒EDSV作ELISA抗原,应用抗鸡Ig轻链单抗1B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测EDSV抗体水平的ELISA方法。确立了将鸡血清100倍稀释监测ELISA效价(ET)的回归方程y=0.59287x+0.75757(r=0.96763)可用于定量测定。血凝抑制(HI)抗体与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法比血凝抑制试验敏感2倍以上.