一株干酪乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

本研究旨在分离既能用于微生态制剂又能用于青贮饲料发酵剂的优良乳酸菌,采集规模化牛场青贮饲料,取梯度稀释液涂布MRS平板,进行厌氧培养,筛选优势菌株,观察其菌落形态,并进行生化试验和特异性PCR鉴定。研究自筛乳酸菌的生长曲线、产酸曲线、培养温度及培养基初始pH对菌株生长的影响,并研究其抑菌特性、药物敏感性和安全性。试验筛选到1株菌落形态圆形、边缘整齐、表面光滑、乳白色、镜检为革兰氏阳性的无芽孢杆菌。生化结果显示,分离菌株可厌氧生长,运动性试验、过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、吲哚试验结果均为阴性,15种糖醇发酵试验结果符合干酪乳杆菌生化特征。用干酪乳酸杆菌特异性引物对菌株进行PCR鉴定,琼脂糖凝胶电泳结果显示在727 bp处出现特异性扩增条带,与生化鉴定结果相符,将分离菌株命名为RS1。RS1在0~4 h时发酵液pH变化不明显,处于生长延迟期;4~16 h时发酵液pH下降较快,进入对数生长期;16~36 h时发酵液pH下降缓慢,进入稳定期。RS1在培养温度为20~50 ℃范围内均能生长,适宜生长温度为25~40 ℃;在培养液初始pH 1.0~9.0条件下均能生长,最适pH为6.0~8.0;对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为23 mm,对大肠杆菌的抑菌圈直径为17 mm;对恩诺沙星和头孢他啶耐药;经14 d灌服小鼠生长状况良好。上述结果表明,本试验筛选到的干酪乳杆菌RS1安全、无致病性,在微生态制剂及生物饲料添加剂领域具有潜在的开发价值。     

鸡源乳杆菌的分离鉴定及其益生特性研究

利用选择性培养、革兰氏染色、芽孢染色、糖发酵试验、经典生理生化试验、耐酸和耐胆盐试验等方法,成功地从健康鸡的肠道中分离、鉴定并筛选出1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳杆菌,命名为乳杆菌L3株。采用雏鸡安全性试验和肠黏液糖蛋白黏附性试验对乳杆菌L3株的安全性和黏附能力进行检测,证明所筛选的乳杆菌不仅对酸和胆盐的耐受性较好,且具有良好的安全性和肠道黏附能力。     

1株马乳酒样乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

【目的】从新疆克州地区传统发酵马奶酒中分离既有抗菌活性又有抗氧化活性的乳酸菌,继而获得能用于微生态制剂开发的优良菌株。【方法】采用MRS固体培养基进行乳酸菌分离培养,筛选优势菌株,观察菌体形态学特征,并通过16S rRNA基因序列分析进行分子鉴定。研究菌株的生长曲线、产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力和抑菌能力,通过检测菌株耐H₂O₂能力及菌株发酵液、无细胞提取物、菌体混悬液的DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除能力、羟自由基清除能力等相关指标来评价菌株体外抗氧化功能,并通过药敏试验和小鼠饲喂试验评估菌株的安全性。【结果】试验筛选出1株菌落形态圆形、白色半透明、边缘不整齐的革兰氏阳性菌,将其命名为JK-24,经16S rRNA克隆测序鉴定该菌株为马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)。在6～18 h,D_{600 nm}值增长速度较快,进入对数生长期,JK-24发酵液pH下降明显;JK-24在pH 2.5～6.5范围内均能生长,能耐受0.3%胆盐;发酵液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分...     

猪源罗伊氏乳杆菌GL001的分离与益生特性研究

为了给猪源益生菌制剂的研究与开发提供更多理论依据,从小型巴马猪粪便中分离获得罗伊氏乳杆菌GL001,对该分离菌株的生长特性、产酸性能、模拟胃肠道环境下的耐受能力、药物敏感性及动物安全性进行检测。结果显示：罗伊氏乳杆菌GL001能迅速进入对数生长期,在16 h达到最高生长点后,pH值也相应变平稳;罗伊氏乳杆菌GL001在模拟的胃液环境中,1.5 h的存活率为93.84%,3 h后为88.41%;对0.3%的胆盐环境耐受性强;罗伊氏乳杆菌GL001对阿莫西林、链霉素、多西环素、氧氟沙星敏感,但对青霉素不敏感;细菌的上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用;大鼠安全性试验表明,分离的罗伊氏乳杆菌GL001对雌鼠、雄鼠的生长和脏器指数均无影响,大鼠脏器没有细菌异位情况。研究表明,分离得到的罗伊氏乳杆菌GL001可作为潜在饲用益生菌进一步研究。     

一株猪源乳杆菌的分离鉴定

从猪小肠中分离得到一株乳杆菌,对其进行生理生化鉴定、16S r DNA基因测序和同源性分析。分析结果显示,该菌株的菌落有溶钙圈,白色圆形,边缘光滑,无鞭毛,无荚膜,无芽孢的革兰氏阳性杆菌,16SrDNA序列与NCBI公布的约氏乳杆菌Lactobacillus gasseri的同源性为98.7%,将该菌株鉴定为格氏乳杆菌。     

一株植物乳杆菌的分离鉴定及其生长特性研究

从健康仔猪肠道内容物中分离筛选得到一株抗逆性较好、产酸及抑菌能力较强的菌株LYP06-2，结合其生理生化特性及16SrDNA序列分析，鉴定该菌株为乳杆菌属的植物乳杆菌（Laetobaeillus plantarum）。菌株LYP06-2在pH2．0的人工胃液中处理3h后存活率为31．3％，人工肠液中存活率为33．0％，胆盐浓度为0.3％时存活率为3．7％，对大肠杆菌K88、K99具有较强的抑制作用，也有较强的产酸能力，这为将来规模化生产有效的微生态制剂产品奠定了基础。     

1株关岭黄牛瘤胃源发酵乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

为了分离具有优良益生特性的牛源乳酸菌,探究其用于畜牧微生态制剂研发的潜力,试验采集健康关岭黄牛瘤胃液,接种于MRS肉汤培养基富集后分离乳酸菌,使用含0.3%胆盐的无菌PBS初步筛选耐胆盐乳酸菌,通过革兰氏染色镜检和16S rRNA测序进行鉴定,并对分离菌的生长特性、产酸能力、耐受特性、药物敏感性、抑菌特性及细胞黏附性进行分析。结果表明：经筛选分离得到1株菌,命名为NCO,经革兰氏染色、镜检和16S rRNA测序鉴定为发酵乳杆菌;该菌具有良好的生长和产酸能力,培养4 h后进入对数生长期,16 h后达到稳定期,培养28 h的菌液pH值为4.43;对低pH值、胆盐、胃液和肠液环境具有耐受能力;该分离菌对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素耐药;其培养上清液对金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌具有极强的抑制作用;该分离菌对Caco-2细胞的黏附数量为43.5 cfu/个,具有一定黏附性。说明分离菌NCO具有优良的生物学特性,有潜力作为优良微生态制剂的候选菌株。     

1株鲤鱼源植物乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

【目的】筛选具有优良益生特性的鲤源乳酸菌作为水产养殖用微生态制剂候选菌株。【方法】以鲤鱼肠道内容物及黏膜为菌株的分离来源,采用MRS培养基进行菌株分离纯化,经16S rRNA测序鉴定后,对分离菌株生长特性、产酸能力、耐酸、耐胆盐、抑菌特性、药物敏感性及安全性等生物学特性进行分析。【结果】试验成功分离到1株植物乳杆菌,将其命名为YY001,该分离株在MRS培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色,革兰氏染色为阳性、无芽孢、两端钝圆的短小杆菌;4 h后进入对数期生长,12 h后生长达到稳定期;具有较强的产酸能力,产酸曲线显示,0~12 h pH迅速下降,培养16 h的菌液pH达3.8;在pH 3.0和0.3%胆盐的条件下具有一定耐受性;该分离株对水产常见致病菌柱状黄杆菌、维气氏单胞菌和嗜水气单胞菌均具抑菌效果,且对柱状黄杆菌的抑菌效果最显著,抑菌圈直径达34.19 mm;药物敏感性试验结果显示,分离株对卡那霉素、链霉素和万古霉素耐药;每天一次连续1周灌胃10⁸CFU分离菌株对小鼠无毒害作用。【结论】本研究分离到的菌株YY001具有优良的生物学特性,可作为水产养殖用微生态制剂候选菌株,为后续制备鲤鱼用微生态制剂奠定基础。     

猪源芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从自然生长的健康猪肠道中分离到13株芽孢杆菌,通过生理生化试验初步鉴定其中9株为枯草芽孢杆菌,2株为巨大芽孢杆菌,1株为地衣芽孢杆菌,1株为凝结芽孢杆菌;对这13株芽孢杆菌分别进行了耐酸性试验、耐胆盐试验、体外抑菌试验和动物安全性试验。结果表明,其中1株地衣芽孢杆菌B7株和1株枯草芽孢杆菌B9株均有较强的耐酸、耐胆盐能力,对致病性大肠杆菌具有较好的体外抑制能力,且均安全无毒,可作为动物用益生菌制剂的候选菌种。     

6株猪源乳酸杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

本研究从健康乳猪肠道分离筛选出6株乳杆菌,所选菌株均能耐受浓度为0.8%~1.0%的牛胆盐,对pH3.0的酸度有较强的抵抗力,对60℃高温环境有较强的耐受性,其代谢产物对含有K88、987P、F41粘附因子的3株致病性大肠杆菌均有抑制作用,对小白鼠无致病性,具备益生菌的基本条件,为研究与开发微生态制剂奠定了基础。     

犊牛瘤胃内黏膜乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

利用厌氧菌分离技术从犊牛瘤胃中分离出1株细菌,通过对其形态、生理生化特性、16S rRNA基因序列测定与同源性分析,表明分离株为黏膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae),是瘤胃内分离到的1株新菌种,并对其进行了高温耐受试验、耐酸性试验、安全性检测、抑菌试验等生物学特性研究。黏膜乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究为以后克隆耐酸基因,研制瘤胃微生态制剂及调控瘤胃微生物发酵奠定了基础。     

一株干酪乳杆菌的生物学特性研究

通过对一株具有降胆固醇功能的益生茵一千酪乳杆菌生物学特性研究。发现所筛选的干酪乳杆菌BDⅡ能够耐受2．5％的牛胆盐和6．0％盐，在pH2．5R MRS-broth中仍可以生长，并有抑制常见致病茵，对部分抗生素比较敏感的特性，对小白鼠安全无毒，可以用作微生态制剂和酸奶发酵剂的优良菌种。     

自然发酵泡菜汁中植物乳杆菌的分离鉴定与体外益生特性研究

利用MRS固体培养基从自然发酵的泡菜汁中分离到1株优势乳酸菌,将其命名为菌株R1,经16S rRNA基因序列分析,并结合生理生化特性和糖发酵试验将其鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。菌株R1具有很强的产酸能力,24 h内可使MRS液体培养基p H从6.14降为3.59。菌株R1的发酵上清液对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鸡肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌均有很好的抑制作用。体外益生试验表明,菌株R1能耐受0.3%的胆盐、p H 3.0的酸度以及60℃、30 min的热处理,对人工胃液和人工肠液也有很好的耐受性。菌株R1对头孢类和青霉素类抗生素较敏感,对诺氟沙星、卡那霉素、链霉素等抗生素不敏感。     

一株强抗逆性猪源乳酸菌的筛选及生物学特性研究

本试验从健康仔猪粪便样品中分离纯化得到5株乳酸菌,并应用16S rRNA基因进化分析对其进行种属鉴定。通过对此5株菌进行耐热、耐酸、耐胆盐、耐贮藏性能和抗生素抗性选育,与伤寒沙门氏菌、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌进行混合培养,探究其对大肠杆菌、鸡白痢沙门等病原菌的抑菌效果,最终筛选出一株具有强抗逆性和优良益生特性的屎肠球菌,并进一步对其生长性能和生理生化特性进行了系统研究,为菌株的开发与应用提供理论参考。 [关键词] 仔猪粪便|屎肠球菌|筛选|抗逆性|益生特性     

1株猪源病原菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

通过对一起病死猪的实验室诊断 ,从病猪心血、脏器中分离到了 1株对小白鼠和家兔都具有较强致病性的细菌。经显微镜观察、培养特性观察、生化特征鉴定 ,此菌为多杀性巴氏杆菌 ,但此菌与其他多杀性巴氏杆菌不同的是它能利用水杨素、鼠李糖、阿拉伯糖。 O抗原琼脂扩散试验鉴定此菌菌体抗原为 O1型 ;Carter间接血凝试验法检验荚膜抗原类型此菌为 A型。体外滤纸扩散法检验此巴氏杆菌对药物敏感性 ,试验表明该菌耐青霉素、土霉素、四环素、磺胺嘧啶、痢特灵、阿米卡星、头孢唑啉 ;但对庆大霉素、卡那霉素、盐酸环丙沙星、氟哌酸敏感 ,对氨苄西林 ,链霉素中度敏感。自制灭活苗进行免疫原性实验检测 ,本分离菌疫苗对小白鼠和家兔保护率约为 70 % ,而市售巴氏杆菌疫苗对小白鼠和家兔保护率约为 3 0 %～ 40 %。     

一株水貂源乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为研究适用于水貂的专用菌制剂,试验采集健康成年母貂的新鲜肠粘膜和粪便,用改良MRS培养基,对肠道与粪便中的微生物进行分离培养,筛选优势菌株,观察其菌落形态,并进行生化试验和16SrRNA分子生物学鉴定,并对其生长情况和安全性等生物特性进行了研究。结果表明,优势菌株(RSJ)为乳酸杆菌;生长6h进入对数期,前18h菌株繁殖较快,pH急速下降;18~36h,菌株维持在稳定期;pH 2.0和3.0时菌株不生长,pH 5.0和6.0时生长良好;对青霉素和环丙沙星的耐药性较强,对其余的抗生素则表现为敏感;菌株RSJ对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑菌作用。安全性试验显示,RSJ对小鼠无毒性。RSJ菌株具备了益生菌的基本条件,为进一步研究与开发微生态制剂奠定了基础。     

一株布氏乳杆菌的分离、鉴定及其特性研究

为寻找抗性菌,以替代部分抗生素,并研究其特性,试验以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌为指示菌,采用牛津杯法从传统发酵食品中筛选出1株对3种病原菌均具有拮抗作用的菌株。利用菌落形态、革兰氏染色、16SrDNA序列分析来鉴定菌株,并测定其生长曲线。结果显示,试验筛选得到了1株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均具有抑制作用的益生菌,经鉴定为布氏乳杆菌(Lentilactobacillus buchneri)。此分离菌为革兰氏阳性菌,单生或成对生长。此菌在抑菌方面具有良好的应用前景。     

一株鸡源植物乳杆菌益生性能的评价

为评价一株来源于鸡肠道内容物的植物乳杆菌DK106的益生性能,试验测定了该菌株的生长特点、抗逆性、药物敏感性、抗氧化能力和黏附性等。结果显示,该菌株在14?h进入生长稳定期|能耐受0.3%胆盐浓度|对氟苯尼考、头孢噻肟、头孢曲松和林可霉素敏感|DPPH自由基清除率高达90.79%|该菌株经二甲苯处理30?min后,其表面疏水率高达97.40%|自凝聚率在第5小时可达68.80%|与大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌的第2小时共凝聚率分别达到20.59%、16.37%和55.32%。综上所述,植物乳杆菌DK106具有良好的益生性能,可作为家禽微生物饲料添加剂的菌株来源。[关键词]鸡|植物乳杆菌|益生性能     

一株土壤源地衣芽孢杆菌的鉴定及生物学特性研究

试验旨在筛选优质土壤源益生菌菌种资源,为畜牧生产中微生态制剂研发提供候选菌株。试验以北京市郊区农田土壤为材料,经紫外诱变、革兰氏染色和接触酶试验分离并筛选出1株对金黄色葡萄球菌具有明显抑制能力的菌株。通过16S rRNA基因进化分析和种属鉴定,判定该菌为一株地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。进一步通过耐热、耐酸、耐胆盐和抗生素敏感性检测,发现该地衣芽孢杆菌在85℃处理10 min后存活率高达93.33%,pH为3.0及2.5时对其活性均影响较小,并且在0.3%、1.0%和2.0%的胆盐浓度下培养3 h仍可继续生长,表现出优良的抗逆性。通过与病原菌混合培养以及对多种致病菌的抑菌试验检测,发现该菌株对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有抑制作用。     

干酪乳杆菌YG-01株的益生特性及抑菌活性研究

【目的】评价从奶酪中分离出的干酪乳杆菌YG-01的益生性及抑菌活性,为该菌株在食品动物生产中的应用提供理论参考。【方法】本研究分别检测干酪乳杆菌YG-01株的药物敏感性、肠道定植能力、消化道环境耐受特性、肠道菌群调节作用、抑制肠道致病菌活性及促生长作用。【结果】药敏试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01对米诺环素、红霉素、克拉霉素、克林霉素、青霉素等常见抗生素极敏感;利用探针(carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester, cFDA-SE)标记的干酪乳杆菌YG-01灌喂试验兔,口服后第1天,干酪乳杆菌YG-01在兔空肠、回肠和结肠的检出率分别为70.9%、59.3%和66.0%,口服后第11天时仍保持较高定植水平(>35%);干酪乳杆菌YG-01的活菌数在模拟胃液(pH为2.5、3.5、4.5)、模拟肠液、胆酸盐浓度<2 g/L及在9%NaCl溶液中均高于1×10⁵ CFU/mL;体外抑菌试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01能显著抑制大肠埃希菌O157、小肠结肠炎耶尔森菌、沙门菌、志贺菌、副溶血弧菌等肠道致...